多核酸检测用结构物以及疾病、病毒或菌感染诊断试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及一种多核酸检测用结构物以及疾病、病毒或菌感染诊断试剂盒。本发明专利技术涉及一种能够通过直接应用样品来同时纯化和检测核酸的结构物，其特征在于，能够通过应用纸上实验室技术在一个芯片上执行样品的预处理、等温扩增、检测和分析步骤，并且能够通过侧流式移动样品来最终判断是否感染疾病和菌株。动样品来最终判断是否感染疾病和菌株。动样品来最终判断是否感染疾病和菌株。

【技术实现步骤摘要】
多核酸检测用结构物以及疾病、病毒或菌感染诊断试剂盒


[0001]本专利技术涉及一种不需从样品纯化核酸，直接应用样品即可同时进行核酸的纯化和检测的结构物，基于侧向流动性的一体化系统，即使不从样品纯化核酸而直接应用，也具有高检测灵敏度，并且可以同时检测多个靶核酸，从而能够快速简单地诊断多种疾病。

技术介绍

[0002]随着医疗服务水平的提高和诊断设备的发展，研发一种能够在日常生活中快速方便地测量的技术，以有效地应对新病毒、超级细菌、结核病、食物中毒细菌等威胁人类健康的传染性微生物。可以测量这些的分子诊断虽然是灵敏度和特异性优异的诊断方法，但经常需要特殊设备或试剂，或者包括复杂的过程。免疫诊断方法虽然容易、快速且简单地用试剂盒重现，但具有测量灵敏度低的问题。
[0003]目前，使用实时PCR(Real
‑
time PCR)的诊断法被称为最快且最灵敏的诊断法，通常可以在8小时以内诊断。目前，随着PCR技术和微通道技术的发展，分子诊断方法也急速发展，如由Alere公司制造的AlereTM I或由Roche公司制造的Cobas Influenza等可在60分钟内检测的产品也已上市。然而，就可进行急速分子诊断的方法学而言，需要昂贵的分析设备或昂贵的检查费用，并且需要几个步骤来实现分子诊断的全过程，因此现场诊断仍然存在局限性。
[0004]目前普遍的分子诊断法使用实时PCR，因其快速性而最普遍，但现场诊断或初级和二级医疗机构使用时需要大型且昂贵的设备，因此难以方便使用。分子诊断大致需要三个步骤：样品的预处理(preparation)、核酸扩增反应(reaction)和检测(detection)，核酸扩增反应和检测可以通过实时PCR设备同时重现，但仍然存在样品的预处理问题。
[0005]另一方面，纸上实验室(Lab
‑
on
‑
paper)技术是指基于一体化系统的技术，在一个芯片上执行样品的预处理、等温扩增、检测和分析步骤。由于可以通过小纸和纸中植入的芯片结构物自动化所有反应并快速执行，因此具有不受检测现场等场所的限制的优点。

技术实现思路

[0006]要解决的技术问题
[0007]在一个方面，提供一种多核酸检测用结构物，包括：样品垫，容纳生物样品，第一连接垫，配置在所述样品垫的上部，并连接样品垫与反应垫，反应垫，配置在所述第一连接垫的下部，包括能够与靶核酸特异性结合的引物以及用于等温扩增反应的试剂，并且产生等温扩增反应，阻挡垫，配置在所述反应垫的上部，保持反应温度以及阻挡样品的蒸发，第二连接垫，配置在所述反应垫的上部，并且金纳米颗粒固定在所述第二连接垫，检测垫，配置在所述第二连接垫的下部，从与所述金纳米颗粒结合的等温扩增反应物获得扩增的靶核酸，吸收垫，配置在所述检测垫的侧方，并吸收残留的样品，以及加热垫，配置在所述样品垫、反应垫和第二连接垫的下部。
[0008]另一方面，提供一种多核酸检测用结构物，所述样品垫和第一连接垫、反应垫、第
二连接垫、检测垫、吸收垫依次至少部分地接触，并沿侧向配置。
[0009]又一方面，提供一种疾病或菌感染诊断试剂盒，包括所述多核酸检测用结构物。
[0010]又一方面，提供一种用于疾病或菌感染诊断的信息提供方法，使用所述多核酸检测用结构物。
[0011]用于解决问题的手段
[0012]这里使用的专业术语仅用于描述特定实施例，而无意于限制本专利技术。除非明确地表示与此相反的意思，这里使用的单数形式包括复数形式。说明书中使用的“包括”的含义指定特定特性、领域、整数、步骤、操作、要素及/或成分，并不排除存在或添加其他特性、领域、整数、步骤、操作、要素、成分及/或群。
[0013]如果没有进行特殊的定义，本说明书中使用的所有术语(包括技术及科学术语)可以作为本专利技术所属
的具有一般知识的人员能够共同理解的意思来使用。并且，通常使用的在辞典中有定义的术语，在没有进行明确的特殊定义的情况下，不会进行异常或过度解释。
[0014]以下，参照附图，对根据本专利技术的优选实施例的多核酸检测用结构物进行说明。
[0015]本专利技术的疾病或菌感染诊断系统基于纸芯片上实验室(lab
‑
on
‑
paper chip)技术，如果使用本专利技术的疾病或菌感染诊断系统，即使不单独纯化核酸，也可以在移动到反应垫的同时纯化核酸物质并直接施加于扩增反应，可以通过应用单个样品来同时检测多个靶核酸，并诊断相关疾病。为了实现这一点，本专利技术的核酸检测用结构物包括样品垫120、第一连接垫131、反应垫140、加热垫141、阻挡垫142、第二连接垫150、检测垫160、吸收垫170和壳体110作为构成要素。
[0016]以下，对每个构成要素进行详细说明。
[0017]样品垫
[0018]样品垫120容纳含有核酸物质的样品。所述样品为从人体分离出来的，包括但不限于血液、血清、血浆、唾液、汗液、尿液、细胞培养液、组织悬液等，但不限于此。所述样品可以与细胞溶解用缓冲液(Lysis buffer)混合，根据需求，在与所述细胞溶解用缓冲液混合后，可以通过离心、过滤、沉淀等公知的方法进一步纯化。优选地，所述样品在与细胞溶解用缓冲液混合后，除了核酸检测用结构物以外，不包括纯化步骤以施加于所述样品垫。
[0019]所述细胞溶解用缓冲液(Lysis buffer)可包含5mM至80mM、5mM至50mM或10mM至50mM的Tris(三(羟甲基)氨基甲烷(tris(hydroxymethyl)aminomethane))。具体地，Tris可以是三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris
‑
HCl)，作为用于细胞溶解用缓冲液中的缓冲剂，可以减少突然的pH波动。
[0020]所述细胞溶解用缓冲液的pH可以为8.0至9.0。当pH小于8.0时，核酸物质的稳定性可能会降低或者移动速度可能会降低。
[0021]所述细胞溶解用缓冲液可包含5mM至50mM、5mM至40mM或10mM至20mM的氯化钾(KCl)。超过50mM的高浓度氯化钾有助于细胞溶解，但降低溶出的核酸物质的水溶性，因此可能需要添加大量的附加缓冲液或者增加移动到反应垫所需的时间。相反地，当氯化钾少于5mM时，细胞可能无法正常溶解。
[0022]所述细胞溶解用缓冲液可包含1mM至30mM、1mM至20mM或2mM至16mM的硫酸镁(MgSO4)。当包含适当量的硫酸镁时，已确认核酸物质的稳定性和移动速度增加，由于不影
响粘度，因此不干扰流体的流动，从而有利于纸芯片分析用的样品预处理。
[0023]所述细胞溶解用缓冲液可包含5mM至50mM、5mM至40mM或10mM至20mM的硫酸铵((NH4)2SO4)。超过50mM的高浓度硫酸铵可以沉淀细胞溶解物，当硫酸铵少于5mM时，pH可能会变得不稳定。
[0024]所述细胞溶解用缓冲液可包含0.01mg/ml至0.1mg/ml或0.0本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种多核酸检测用结构物，其中，包括：样品垫，容纳生物样品，第一连接垫，配置在所述样品垫的上部，并连接样品垫与反应垫，反应垫，配置在所述第一连接垫的下部，包括能够与靶核酸特异性结合的引物以及用于等温扩增反应的试剂，并且产生等温扩增反应，阻挡垫，配置在所述反应垫的上部，保持反应温度以及阻挡样品的蒸发，第二连接垫，配置在所述反应垫的上部，并且金纳米颗粒固定在所述第二连接垫，检测垫，配置在所述第二连接垫的下部，从与所述金纳米颗粒结合的等温扩增反应物获得扩增的靶核酸，吸收垫，配置在所述检测垫的侧方，并吸收残留的样品，以及加热垫，配置在所述样品垫、反应垫和第二连接垫的下部。2.根据权利要求1所述的多核酸检测用结构物，其中，所述样品垫、第一连接垫、反应垫、第二连接垫、检测垫和吸收垫依次至少部分地接触，并沿侧向配置。3.根据权利要求1所述的多核酸检测用结构物，其中，所述检测垫包括多个区分的检测区域。4.根据权利要求1所述的多核酸检测用结构物，其中，所述金纳米颗粒在表面包括链霉亲和素。5.根据权利要求1所述的多核酸检测用结构物，其中，所述反应垫包括具有...

【专利技术属性】
技术研发人员：金钟喆，
申请(专利权)人：艾德纽特丽珍公司，
类型：发明
国别省市：