一种用于III型呼肠孤病毒RT-qPCR的检测方法技术

本发明专利技术涉及C12Q1/70技术领域，更具体涉及一种用于III型呼肠孤病毒RT

【技术实现步骤摘要】
一种用于III型呼肠孤病毒RT
‑
qPCR的检测方法


[0001]本专利技术涉及C12Q1/70
，更具体涉及一种用于III型呼肠孤病毒RT
‑
qPCR的检测方法。

技术介绍

[0002]Ⅲ型呼肠孤病毒(Reovirus type 3，Reo
‑
3)属于呼肠病毒科，可以感染人类呼吸道和肠道。目前检测病毒的方法有生物素
‑
亲和素免疫法、酶联免疫法等。CN201910801455提供了一种采用RT
‑
qPCR技术检测杯状病毒的方法，包括提取待测样品总RNA，反应前准备，上样反应，然而使用相同的方法在检测Ⅲ型呼肠孤病毒时，存在精密度差等一系列的问题。CN201910294310同样提供了一种RT
‑
qPCR方法，该方法同样无法适用于III型呼肠孤病毒的检测。

技术实现思路

[0003]针对现有技术中存在的一些问题，本专利技术第一个方面提供了一种用于III型呼肠孤病毒RT
‑
qPCR的检测方法，包括下面步骤本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于III型呼肠孤病毒RT
‑
qPCR的检测方法，其特征在于，包括下面步骤：(1)核酸的提取和核酸浓度的测定；(2)重组质粒的溶解和稀释；(3)引物、探针溶解；(4)RT
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qPCR反应以及数据处理：RT
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qPCR反应条件包括：1)42℃处理4
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6min；2)95℃处理25
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35s；3)95℃处理3
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6s，60℃处理30
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40s，循环处理40次。2.根据权利要求1所述用于III型呼肠孤病毒RT
‑
qPCR的检测方法，其特征在于，核酸的提取过程包括：将carrier RNA
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AVE混合液和AVL添加至离心管中，加入病毒原液后，震荡、孵育后，洗涤、离心后，依次经过AW1混合液、AW2混合液、RNase free Water处理后，即得。3.根据权利要求2所述用于III型呼肠孤病毒RT
‑
qPCR的检测方法，其特征在于，RNase free Water和病毒原液的体积比大于等于1:2.8。4.根据权利要求3所述用于III型呼肠孤病毒RT
‑
qPCR的检测方法，其特征在于，重组质粒的溶解和稀释过程包括：Reo
‑
3重组质粒干粉后离心，然后使用RNase free Water使得Reo
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3重组质粒溶解，之后振荡、离心后稀释。5.根据权利要求4所述用于III型呼肠孤病毒RT
‑
qPCR的检测方法，其特征在于，重组质粒的溶解和稀释过程包括下面步骤：(1)将Reo
‑
3重组质粒干粉后离心，加入RNase free Water，充分振荡后瞬时离心，在65
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75℃温浴8
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12min；(2)取出Reo

【专利技术属性】
技术研发人员：刘金良，营婷，杨佳佳，王林，
申请(专利权)人：微谱生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：