一种用于新型冠状病毒快速核酸检测的直扩试剂制造技术

本发明专利技术涉及生物化学技术领域，具体涉及一种用于新型冠状病毒快速核酸检测的直扩试剂，包括将二醇与碱性化合物按照预设比例组合，得到碱性乙二醇组合物；将百里酚、2

【技术实现步骤摘要】
一种用于新型冠状病毒快速核酸检测的直扩试剂


[0001]本专利技术涉及生物化学
，尤其涉及一种用于新型冠状病毒快速核酸检测的直扩试剂。

技术介绍

[0002]新型冠状病毒大流行对检测提出了巨大需求。目前，最流行的新型冠状病毒检测方法是通过逆转录结合聚合酶链反应检测其RNA基因组。
[0003]基本原理是从组织、细胞、体液等多种类型样本中分离病毒RNA，通过逆转录结合聚合酶链反应，将样本中微量的病毒信息成倍放大，最后以荧光信号的强弱对RNA进行相对定量。具有高灵敏度、高特异性、适用样本类型广泛等优点。
[0004]病毒检测从采集样本开始。目前推荐的新型冠状病毒检测使用拭子从上呼吸道采集样本，或从下呼吸道采集痰或唾液。从鼻咽或口咽收集的拭子样本浸入病毒转移培养基中中以形成病毒悬浮液。病毒悬浮液立即用于检测或在4℃下储存72小时，或在
‑
20℃下储存更长时间。病毒转移培养基中由生理盐水溶液或细胞培养基加上抗生素组成。
[0005]最常用的病毒核酸检测包括两个步骤:病毒核酸纯化步骤，然后是采用RT
‑
PCR试剂和新型冠状病毒特异性探针进行检测。
[0006]采用上述方式，病毒核酸纯化过程会导致病毒检测时间延长，降低了对病毒的检测效率。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的在于提供一种用于新型冠状病毒快速核酸检测的直扩试剂，旨在解决现有的病毒核酸检测方法的检测效率较低的问题。
[0008]为实现上述目的，第一方面，本专利技术提供了一种用于新型冠状病毒快速核酸检测的直扩试剂的检测方法，包括以下步骤：
[0009]将二醇与碱性化合物按照预设比例组合，得到碱性乙二醇组合物；
[0010]将百里酚、2
‑
苯基苯酚和吐温20溶解在乙二醇中，得到病毒保存组合物；
[0011]采集生物样本；
[0012]将所述生物样本与所述碱性乙二醇组合物组合后置于所述病毒保存组合物中进行保存，得到第一反应混合物；
[0013]将所述反应混合物中的病毒核酸从病毒包膜中释放出来进行逆转录结合聚合酶链反应，同时通过核衣壳基因探针进行检测，得到第一病毒检测结果。
[0014]其中，在步骤将所述反应混合物中的病毒核酸从病毒包膜中释放出来进行逆转录结合聚合酶链反应，得到病毒检测结果之后，所述方法还包括：
[0015]将灭活病毒与所述碱性乙二醇组合物组合后置于所述病毒保存组合物中进行保存，得到第二反应混合物；
[0016]在室温下孵育所述第二反应混合物5
‑
30min，得到孵育组合物；
[0017]将所述孵育组合物与荧光反应混合物进行混合，得到第二反应混合物；
[0018]使用非离子去污剂对所述第二反应混合物进行处理后进行实时荧光定量分析，得到第二病毒检测结果；
[0019]使用所述第二病毒检测结果对所述第一病毒检测结果进行评估。
[0020]其中，所述碱性乙二醇组合物中的所述二醇的浓度范围为10％
‑
25％。
[0021]其中，所述生物样本包括下呼吸道样本和上呼吸道采集拭子中的任意一种；
[0022]所述下呼吸道样本包括唾液样本和痰样本。
[0023]其中，所述非离子去污剂包括Tween 20、Triton X
‑
100、NP 40和Brij 35。
[0024]其中，所述采集唾液样本，包括：
[0025]通过唾液采集储存装置抽取目标口腔内的唾液；
[0026]将所述唾液浸入病毒转移培养基中，得到唾液样本。
[0027]其中，所述唾液采集储存装置包括储存管、活塞和吸入机构，所述活塞设置于所述储存管内侧壁，所述吸入机构设置于所述储存管底部。
[0028]第二方面，本专利技术提供了一种用于新型冠状病毒快速核酸检测的直扩试剂，包括碱性乙二醇组合物和病毒保存组合物；
[0029]所述碱性乙二醇组合物包括二醇和碱性化合物；
[0030]所述碱性化合物包括碱性乙二醇溶液和聚亚烷基二醇中的任意一种；
[0031]所述碱性乙二醇溶液包括65g PEG 200、0.252g KOH和34.75g ml水；
[0032]所述聚亚烷基二醇包括聚乙二醇、丙二醇和聚丙二醇；
[0033]所述病毒保存组合物包括25mg/ml的百里酚、20pg/ml的2
‑
苯基苯酚和50mg/ml的吐温20。
[0034]本专利技术的一种用于新型冠状病毒快速核酸检测的直扩试剂，通过将二醇与碱性化合物按照预设比例组合，得到碱性乙二醇组合物；将百里酚、2
‑
苯基苯酚和吐温20溶解在乙二醇中，得到病毒保存组合物；采集生物样本；将所述生物样本与所述碱性乙二醇组合物组合后置于所述病毒保存组合物中进行保存，得到第一反应混合物；将所述反应混合物中的病毒核酸从病毒包膜中释放出来进行逆转录结合聚合酶链反应，同时通过核衣壳基因探针进行检测，得到第一病毒检测结果，本法专利技术无需对病毒核酸纯化，基于碱性乙二醇组合物可以快速、可靠和灵敏地检测病毒核酸，在不到1小时的时间内通过逆转录结合聚合酶链反应检测病毒核酸，解决了现有的病毒核酸检测方法的检测效率较低的问题。
附图说明
[0035]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0036]图1是本专利技术提供的一种用于新型冠状病毒快速核酸检测的直扩试剂的流程图。
[0037]图2是唾液采集储存装置的结构示意图。
[0038]图3是唾液采集储存装置剖视图。
[0039]图4是图3细节A处的放大图。
[0040]图5是核酸提取后样本及hank
’
s液直扩存在大量抑制无法扩增的RT
‑
qPCR扩增曲线图。
[0041]图6是核酸提取后样本及hank
’
s液加入不同浓度不同种类的表面活性剂后的RT
‑
qPCR扩增曲线图。
[0042]图7是核酸提取样本及hank
’
s液加入不同浓度碱性聚乙二醇后样本的RT
‑
qPCR扩增曲线图。
[0043]图8是核酸提取样本及hank
’
s液加入不同浓度碱性聚乙二醇和表面活性剂的RT
‑
qPCR扩增曲线图。
[0044]1‑
储存管、2
‑
活塞、3
‑
吸入机构、4
‑
橡胶圈、5
‑
连接板、6
‑
拉杆、7
‑
手柄、8
‑
弹性杆、9
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于新型冠状病毒快速核酸检测的直扩试剂的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：将二醇与碱性化合物按照预设比例组合，得到碱性乙二醇组合物；将百里酚、2
‑
苯基苯酚和吐温20溶解在乙二醇中，得到病毒保存组合物；采集生物样本；将所述生物样本与所述碱性乙二醇组合物组合后置于所述病毒保存组合物中进行保存，得到第一反应混合物；将所述反应混合物中的病毒核酸从病毒包膜中释放出来进行逆转录结合聚合酶链反应，同时通过核衣壳基因探针进行检测，得到第一病毒检测结果。2.如权利要求1所述的用于新型冠状病毒快速核酸检测的直扩试剂的检测方法，其特征在于，在步骤将所述反应混合物中的病毒核酸从病毒包膜中释放出来进行逆转录结合聚合酶链反应，得到病毒检测结果之后，所述方法还包括：将灭活病毒与所述碱性乙二醇组合物组合后置于所述病毒保存组合物中进行保存，得到第二反应混合物；在室温下孵育所述第二反应混合物5
‑
30min，得到孵育组合物；将所述孵育组合物与荧光反应混合物进行混合，得到第二反应混合物；使用非离子去污剂对所述第二反应混合物进行处理后进行实时荧光定量分析，得到第二病毒检测结果；使用所述第二病毒检测结果对所述第一病毒检测结果进行评估。3.如权利要求1所述的用于新型冠状病毒快速核酸检测的直扩试剂的检测方法，其特征在于，所述碱性乙二醇组合物中的所述二醇的浓度范围为10％
‑
25％。4.如权利要求1所述的用于新型冠状病毒快速核酸检测...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩凯，许墨耘，
申请(专利权)人：雅礼上海生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：