一种光核桃愈伤组织的诱导方法技术

本发明专利技术公开了一种光核桃愈伤组织的诱导方法。本发明专利技术属于植物愈伤组织诱导及培养技术领域，具体涉及诱导光核桃愈伤组织的方法及愈伤组织诱导培养基的筛选。本发明专利技术方法包括：以一年生光核桃作为试验材料，外植体预处理并消毒后接种于诱导培养基上，培养温度为23

【技术实现步骤摘要】
一种光核桃愈伤组织的诱导方法


[0001]本专利技术涉及植物愈伤组织诱导及培养技术，具体涉及一种高效诱导光核桃愈伤组织的方法及诱导培养基的筛选。

技术介绍

[0002]光核桃（Amygdalus mira (Koehne) Y
üꢀ
et Lu），蔷薇科桃属植物，是我国特有的西藏野生桃种，又名为西藏桃。其寿命可长达100至1000年之久，显著高于我国常见的栽培桃20
‑
30年的寿命，因此被誉为野生桃中的“活化石”，2019年被列为国家二级保护植物。光核桃树冠枝叶繁茂，花期长达为3
‑
4个月，花色多为白、粉红和红白相间等颜色，具有较高的观赏价值；其果实含糖量及维生素、钙、铁等多种营养成分较为丰富，可供食用；其种仁的功效与作用为活血祛瘀，润肠通便，具有很高的药用价值；光核桃具有较强的耐贫瘠、耐寒、耐旱和抗病等优良特性，被誉为“一个天然的多样性丰富的桃基因资源库”。
[0003]西藏高空空气环境形成了复杂多样的独特气候，而光核桃大多处于野生状态和半野生状态，且老龄化严重，同时由于城乡整改等问题，光核桃林被大量其他物种替代，导致其存活数量急剧减少。目前，光核桃主要以种子繁殖为主，而长期的这种单一的遗传方式极易发生种性退化、性状分离和变异，从而导致光核桃丧失原有的优良性状，进而影响种子萌芽率下降甚至阻碍植株生长等问题。为解决这一难题，扦插嫁接育苗已逐渐利用于光核桃的种植上，但在试验中发现，扦插技术受限于枝条选材严格，扦插生根较慢、嫁接成活率不稳定等多种影响因素，导致对其的研究依然存在瓶颈，无法有效保护光核桃野生种质资源的衰减。
[0004]组织培养再生技术是将植物的器官、组织以至单个细胞，在人工条件的介导下，使其能够继续生长，进而分化发育成一颗完整植株的过程。组织培养再生技术在优质种质资源的离体保存、评价、创新等方面具有积极的作用，其优势在于通过组培技术获得再生植株。相比种子繁殖和扦插繁殖技术所需要的周期更短、操作简便，且可以实现植株的批量繁殖，基本上可以实现全年种苗繁殖，而不受季节因素的影响。而目前光核桃的组织培养技术仅限于带芽茎段再生体系的研究阶段，完整的组织培养再生技术体系尚未建立，这也导致此技术尚未被广泛用于光核桃种质资源的推广与保护。因此，提供一种适合光核桃愈伤组织的诱导培养基和培养方法对开展保护和开发物种资源的研究具有重要意义。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种诱导光核桃愈伤组织快速增殖的方法，为光核桃种质资源的保护和优良性状的遗传育种奠定基础。
[0006]为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案：一种光核桃愈伤组织的诱导方法，具体步骤包括：将预处理并消毒的光核桃茎段接种于诱导培养基上进行初代培养，光照强度为900 lx
‑
1200lx，诱导培养14
‑
20天，即可得到光核桃愈伤组织；愈伤组织诱导培养基为MS+
30g/L 蔗糖+6.9g/L 琼脂+0.5mg/L 6
‑
BA+2.0mg/L NAA。
[0007]优选地，培养基pH为5.83。
[0008]本专利技术所述茎段为一年生盆栽光核桃的侧枝，且中间段的愈伤组织生成率最高。
[0009]本专利技术所述预处理为将光核桃侧枝茎段用流动的自来水冲洗3h以上；所述消毒为将预处理后的光核桃茎段于超净工作台里，先用无菌水清洗至少1次，然后用体积浓度为75%的乙醇水溶液处理20
‑
30s，再用质量浓度为0.1%的升汞溶液灭菌处理 1
‑
2min，最后用无菌水洗涤至少4次。
[0010]本专利技术诱导培养的条件进一步优选，培养温度为23
±
2℃，光照时间为16h/d，空气相对湿度维持在60%
‑
70%。
[0011]所述预处理可以将枝条置于42℃恒温水浴锅短暂处理10
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15min，大大降低枝条因内生菌造成的污染。
[0012]本专利技术还包括将所述得到的愈伤组织重新转接于所述诱导培养基中继续培养，光照强度为900lx
‑
1200lx，诱导培养15
‑
20天，即可得到长势旺盛的新愈伤组织。
[0013]本专利技术还提供了上述培养方法在光核桃植物组织培养上的应用。
[0014]专利技术所具有的有益效果：1.采用本专利技术中的诱导培养基可以高效诱导光核桃的愈伤组织的生成，且出愈率相对较高，为保护和开发物种资源的研究提供了育苗和快速繁殖的技术支持。
[0015]2.采用本专利技术中的培养方法，显著提高了愈伤组织培养的存活率，明显降低了污染率，且缩短了育种时间，节约试验成本。
附图说明
[0016]图1为光核桃愈伤诱导示意图（A为光核桃茎段接种到培养基上2周的示意图；B为光核桃愈伤继代3周的示意图；C为光核桃愈伤组织切碎重新接种到愈伤组织诱导培养基中的示意图；D为光核桃新愈伤组织诱导增殖后的示意图）。
具体实施方式
[0017]下面结合附图与本专利技术的具体实施例对本专利技术作进一步清楚完整的说明，但应当理解的是，所述的实施案例仅是本专利技术的一部分，本领域所获得的的其他实施案例均属于本专利技术保护的范围。
[0018]本专利技术所使用的光核桃试验材料均由东北林业大学生命科学学院遗传学实验室孟凡娟课题组保存并种植。
[0019]实施例一1.培养基的配置按照以下组分配置愈伤组织诱导培养基： MS+30g/L 蔗糖+6.9g/L 琼脂+0.5 mg/L 6
‑
BA+2.0 mg/L NAA，pH为5.83，121℃高压灭菌20min。
[0020]2.外植体预处理取一年生光核桃侧枝，去除叶片，保护芽点处不被损伤，茎段剪成5
‑
6cm大小，流水冲洗3h以上，之后将光核桃茎段于超净工作台里，先用无菌水清洗至少1次，然后用体积浓度为75%的乙醇水溶液处理20
‑
30s。
[0021]3.外植体接种预处理并消毒的外植体剪切为1
‑
2cm的小茎段，二次消毒，用质量浓度为0.1%的升汞溶液灭菌处理 1
‑
2min，最后用无菌水洗涤至少4次。将茎段平铺于诱导培养基上。
[0022]4.愈伤组织的培养将上述接种好的培养皿置于培养温度为23
±
2℃，光照时间为16h/d，空气相对湿度维持在60%
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70%，光照强度为900lx
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1200lx的无菌组培室，诱导培养15
‑
20天。如附图1（A）所示培养结果具体见表1表1: 0.5mg/L 6
‑
BA+2.0mg/L NAA光核桃愈伤组织诱导试验结果统计以上实施例的实施效果表1所示，利用植物组织培养技术成功诱导出光核桃愈伤组织，茎段平均膨大率为73.39%，平均出愈率为46.88%，最高可达55.56%，且愈伤呈现翠绿的健壮状态。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种光核桃愈伤组织的诱导方法，其特征在于：将预处理并消毒的光核桃茎段接种于愈伤组织诱导培养基上进行初代培养，培养温度为23
±
2℃，光照时间为16 h/d，空气相对湿度为60%
‑
70%，光照强度为900lx
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1200lx，诱导培养14
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20天，即可得到光核桃愈伤组织；愈伤组织诱导培养基为MS+30g/L 蔗糖+6.9g/L 琼脂+0.5mg/L 6
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BA（6
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苄氨基嘌呤）+2.0mg/L NAA（萘乙酸）。2.根据权利要求1所述光核桃愈伤组织的诱导方法，其特征在于，pH为5.83。3.根据权利要求1所述光核桃愈伤组织的诱导方法，其特征在于，所述茎段为一年生盆栽光核桃侧枝的中间段。4.根据权利要求1所述光核桃愈伤组织的诱导方法，其特征在于，所述预处理为将光核...

【专利技术属性】
技术研发人员：李建欣，陶雷，孟凡娟，
申请(专利权)人：东北林业大学，
类型：发明
国别省市：