用于防治烟草霉烂病的复合菌剂、发酵方法及其施用方法技术

本申请公开了一种用于防治烟草霉烂病的复合菌剂、发酵方法及其施用方法，至少包括：生防菌BA08、生防菌BA20、生防菌BSRS

【技术实现步骤摘要】
用于防治烟草霉烂病的复合菌剂、发酵方法及其施用方法


[0001]本申请涉及微生物应用
，特别是一种用于防治烟草霉烂病的复合菌剂、发酵方法及其施用方法。

技术介绍

[0002]近年来，烘烤期烟草霉烂已成为我国南方部分烟区烘烤环节烟叶损失的重要原因之一。烟叶烘烤变黄期内，由于温湿度适宜，烟叶含水量高，死体营养型微生物容易滋生，是烟叶发生霉烂的主要时期。
[0003]引起烟叶腐烂的微生物种类较多，主要有青霉属、曲霉属、根霉属、毛霉属真菌，以及芽孢杆菌、乳杆菌和果胶杆菌属细菌等。近期课题组研究发现云南省大理州烟草霉烂病为由少根根霉(Rhizopus arrhizus)引起的真菌性病害(卢灿华,苏家恩,盖晓彤,等.烤烟霉变病原菌鉴定及其生防菌筛选[J].中国烟草科学,2022,43(2):45
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51.)，可以为害烟叶叶柄、叶肉组织，以叶基霉烂型为主，发病率达30％以上，损失在20％左右。因此，烟草霉烂病对烟叶生产的危害十分严重。此外，雪茄烟在晾制和发酵过程中也普遍存在霉烂现象，亟需进行科技攻关，突破采后烟叶调制和发酵期烟叶的关键技术瓶颈。
[0004]烟草霉烂病的防治方法有化学药剂、设备改进和生物防治等方法。其中，生物防治由于其防效高、专一性强、环境友好，以及不易产生抗药性病毒株等优点，受到广泛的青睐。
[0005]目前，用于防治霉烂病的微生物报道较少，其中以单菌株的报道为主，例如贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)Z002(CN112322536A)、05
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1205(CN112375700A)和GY1(CN112391315A)，胶质芽孢杆菌(B.mucilaginosus)YN2011(CN110384247A)；而复合生防菌则仅有组合微生物菌剂(CN110250209A)的报道。CN110250209A中公开了一种具有防治烟草霉烂病功能的微生物菌剂，微生物菌剂包括以下重量份的组分：枯草芽孢杆菌25～30份，解淀粉芽孢杆菌40～50份，胶质芽孢杆菌20～35份，吐温
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20为0.05～0.15份、氮酮0.005～0.015份。该复合微生物菌剂经验证具有防治烟草霉烂病的功能，通过生长优势在烟叶叶柄形成竞争占位，同时其代谢产物能够抑制有害真菌，从而抑制病原菌的生长。
[0006]虽然CN110250209A中公开的复合菌剂虽然在烟草烘烤霉烂病中的防效可以达到95～100％，但该复合菌剂对于由少根根霉引发的烘烤霉烂病以及雪茄烟霉变病的防治效果并不明确，而且该复合菌剂所用复合菌种类属于现有已知功能菌株组合，未对其他未知菌株进行进一步的探索。
[0007]现有复合菌剂种类单一，功效单一，目前市场需求缺口较大，亟需开发多种复合生防菌剂，满足烟叶烘烤、调制期霉烂病的绿色防控，实现烟草产业高质量发展和绿色转型。

技术实现思路

[0008]本申请提供了一种用于防治烟草霉烂病的复合菌剂、发酵方法及其施用方法，用于解决现有技术中存在的缺乏针对烟草霉烂病的有效复合菌剂的技术问题。
[0009]本申请提供了一种用于防治烟草霉烂病的复合菌剂，至少包括：生防菌BA08、生防
菌BA20、生防菌BSRS
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1；
[0010]生防菌BA08为枯草芽孢杆菌(Bacillus.subtilis)的一个株系，保藏编号为CCTCC No：M 2022549；
[0011]生防菌BA20为枯草芽孢杆菌(Bacillus.subtilis)的一个株系，保藏编号为CCTCC No：M 2022548；
[0012]生防菌BSRS
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1为桑肠杆菌(Enterobacter.mori)的一个株系，保藏编号为CCTCC No：M 2022550。
[0013]通过实验优选发现，采用包括上述生防菌剂的复合菌剂喷施烘烤烟叶后，能有效防止调制过程中烟叶因少根根霉引发烟草霉烂病，防效可达88.51％，病情指数最低可达10.05％。
[0014]本申请提供复合菌剂中各菌株对烟草霉烂病的防效虽然均不突出，但通过将其复合使用后，能显著提高所得复合菌剂的防效。
[0015]优选地，适用烤烟烟叶或雪茄烟叶。例如所适用烤烟烟叶具体为K326。
[0016]本申请的另一方面还提供了一种上述复合菌剂的发酵方法，包括以下步骤：
[0017]将生防菌BA08、生防菌BA20、生防菌BSRS
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1的种子液混合后，接种于培养液中进行液体发酵，得到复合菌剂发酵液。
[0018]本申请提供复合菌剂发酵方法，所用液体发酵为枯草芽孢杆菌常用发酵培养基和培养条件。按此发酵后所得发酵液可用于防治少根根霉引发烟草霉烂病。
[0019]优选地，复合菌剂发酵液为液体发酵所得发酵原液的2～10倍稀释液。
[0020]按此比例稀释后，复合菌剂均能发挥对烟叶霉烂病的防效。
[0021]优选地，复合菌剂发酵液为液体发酵所得发酵原液的2倍稀释液。按此比例稀释后，所得防效效果最优。防效可达88.51％，病情指数最低可达10.05％。
[0022]优选地，当处理烟叶为雪茄烟叶时，复合菌剂发酵液为液体发酵所得发酵原液的10倍稀释液。
[0023]优选地，生防菌BA08、生防菌BA20、生防菌BSRS
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1的种子液按体积比为0.5～2：0.5～2：1～2。
[0024]优选地，生防菌BA08、生防菌BA20、生防菌BSRS
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1的种子液按体积比等比例混合后进行液体发酵。
[0025]优选地，液体发酵条件：保持搅拌器转速为120r/min至发酵结束；
[0026]发酵通气量：保持15m3/h时保持至发酵结束；
[0027]发酵温度：整个发酵过程保持温度在36.5～37.5℃；
[0028]发酵时间：运行发酵42h。
[0029]优选地，液体发酵培养基，各成分以g/L计为：蔗糖10g/L，骨蛋白胨5g/L，玉米浆干粉5g/L，豆粕粉15g/L，硫酸镁0.5g/L，pH 7.2。
[0030]本申请的另一方面还提供了一种上述复合菌剂的施用方法，包括以下步骤：
[0031]向每杆烟叶的叶柄处喷施50～200mL如上述方法发酵所得的复合菌剂发酵液。
[0032]优选地，复合菌剂的喷施量为75mL。
[0033]本申请能产生的有益效果包括：
[0034]1)本申请所提供的用于防治烟草霉烂病的复合菌剂，该复合菌剂稳定性好，是烘
烤期烟草霉烂病的高效生防菌，对烟叶调制过程中由少根根霉引发的霉烂病的相对防效在70％以上。说明本申请提供的复合菌剂能对由少根根霉引发的霉烂病发挥较好的防治效果。
[0035]2)本申请所提供的用于防治烟草霉烂病的复合菌剂，以枯草芽孢杆菌(Bacillus.subtilis)BA08、枯草芽孢杆菌(Bacillu本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于防治烟草霉烂病的复合菌剂，其特征在于，至少包括：生防菌BA08、生防菌BA20、生防菌BSRS
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1；生防菌BA08为枯草芽孢杆菌(Bacillus.subtilis)的一个株系，保藏编号为CCTCC No：M 2022549；生防菌BA20为枯草芽孢杆菌(Bacillus.subtilis)的一个株系，保藏编号为CCTCC No：M 2022548；生防菌BSRS
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1为桑肠杆菌(Enterobacter.mori)的一个株系，保藏编号为CCTCC No：M 2022550。2.根据权利要求1所述的复合菌剂，其特征在于，适用于烤烟烟叶或雪茄烟叶。3.一种如权利要求1或2所述复合菌剂的发酵方法，其特征在于，包括以下步骤：将生防菌BA08、生防菌BA20、生防菌BSRS
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1的种子液混合后，接种于培养液中进行液体发酵，得到复合菌剂发酵液。4.根据权利要求3所述的发酵方法，其特征在于，复合菌剂发酵液为液体发酵所得发酵原液的2～10倍稀释液。5.根据权利要求3所述的发酵方法，其特征在于，复合菌剂发酵液为液体发酵所得发酵原液的2倍稀释液。6.根据权利要求3所述的发...

【专利技术属性】
技术研发人员：卢灿华，夏振远，苏家恩，蔡永占，张光海，王庆，陈志会，盖晓彤，李军营，马俊红，陈颐，姜宁，晋艳，
申请(专利权)人：云南省烟草农业科学研究院，
类型：发明
国别省市：