本申请建立了一种PCOS小鼠卵泡形态学评估的方法，通过取离体卵巢组织后进行连续切片和HE染色比较正常小鼠和DHEA诱导小鼠目标卵泡的最大切面面积、壁层颗粒细胞层面积、壁层颗粒细胞层面积/目标卵泡最大切面面积比值，确定PCOS疾病中卵泡形态关键评估指标的临界值，准确评估PCOS卵泡。本申请的方案具有准确、高效、可重复性的特点，并且该方法的建立对研究PCOS的发生、发展机制以及有效的治疗措施具有重要意义。有重要意义。有重要意义。
【技术实现步骤摘要】
多囊卵巢综合征小鼠卵泡形态学评估方法
[0001]本申请属于生物学和疾病研究诊断领域，具体涉及一种多囊卵巢综合征小鼠卵泡形态学评估方法及应用。
技术介绍
[0002]多囊卵巢综合征(PCOS)是生育期妇女常见的生殖和内分泌紊乱性疾病，以雄激素过多、多囊卵巢和排卵障碍为主要临床特征，是无排卵性不育最常见的原因。PCOS患者大多依靠药物来治疗，采用手术治疗的患者很少，因此临床取材非常困难，这对PCOS病理生理机制及治疗效果的研究带来诸多困难。由于高雄激素血症是PCOS的主要病因，采用脱氢表雄酮(DHEA)皮下注射诱导幼年雌性小鼠PCOS形成是一种接近人类病理特征的理想型动物模型。一般均采用卵巢组织的连续切片和HE染色观察小鼠卵泡个数和形态来判断PCOS造模是否成功，描述PCOS主要病理改变为卵泡多呈囊性扩张，颗粒细胞层数减少，排列疏松。
[0003]目前，PCOS小鼠卵巢卵泡形态评估均为人为判断，未有相应具体数值的确定，也没有相应的量化标准，从而造成PCOS判断评估有误差，不利于临床病理评估。
技术实现思路
[0004]基于此，本申请提供一种多囊卵巢综合征小鼠卵泡形态学评估方法及应用，由于PCOS小鼠卵巢卵泡形态评估均为人为判断，没有相应的量化标准，从而造成PCOS判断与评估有误差。
[0005]为解决此技术问题，本申请的技术方案是，提供一种多囊卵巢综合征小鼠卵泡形态学评估方法，包括以下步骤：
[0006]步骤S1、选取周龄6～24周的C57BL/6小鼠的离体卵巢组织经过连续切片与染色后，确定目标卵泡在选取的多个切片中的最大切面面积，所述目标卵泡包括成熟卵泡或异常增大的卵泡。
[0007]步骤S2、统计具有目标卵泡的最大切面面积的切片中围绕该目标卵泡的壁层颗粒细胞内层的面积，计算卵巢壁层颗粒细胞层的面积。
[0008]步骤S3、根据目标卵泡最大切面面积与围绕该目标卵泡的壁层颗粒细胞内层的面积计算目标卵泡的所述卵巢壁层颗粒细胞层的面积与其最大切面的面积的比值。
[0009]步骤S4、根据所述目标卵泡的最大切面面积，和目标卵泡的卵巢壁层颗粒细胞层的面积与其最大切面的面积的比值来判断该离体卵巢组织是否符合多囊卵巢的形态学特征。
[0010]在其中一个实施例中，所述连续切片中每张切片的厚度独立地为4～6μm。
[0011]在其中一个实施例中，所述连续切片中每切8～12张切片选取一张切片进行染色。
[0012]在其中一个实施例中所述染色的方法包括HE染色和Masson染色中的一种或两种。
[0013]在其中一个实施例中，所述目标卵泡的数量≥1。
[0014]在其中一个实施例中，所述目标卵泡的数量＞1。
[0015]在其中一个实施例中，所述卵巢组织切片经染色后通过SPSS软件沿着卵巢组织切片的颗粒细胞层与卵泡膜层连接处，框选目标卵泡，确定所述最大切面面积。
[0016]在其中一个实施例中，所述卵巢组织切片染色后通过SPSS软件沿着卵巢组织切片的壁层颗粒细胞内层与卵泡腔连接处，框选壁层颗粒细胞内层，确定所述的壁层颗粒细胞内层面积。
[0017]在其中一个实施例中，壁层颗粒细胞层面积＝目标卵泡的最大切面面积
‑
壁层颗粒细胞内层面积；壁层颗粒细胞层面积/目标卵泡的最大切面面积＝(目标卵泡的最大切面面积
‑
壁层颗粒细胞内层面积)/目标卵泡的最大切面面积。
[0018]在其中一个实施例中，当所述卵巢切片统计后同时满足：
[0019](1)所述目标卵泡的最大切面的面积大于118649.4μm2。
[0020](2)所述壁层颗粒细胞层面积/所述目标卵泡的最大切面面积比值小于0.5261，则所述离体卵巢组织符合多囊卵巢的形态学特征。
[0021]在其中一个实施例中，统计待评估的卵巢组织中n个目标卵泡数值是否同时符合权利要求8所述的(1)和(2)的数值范围，若n≥1即为待评估的离体卵巢组织符合多囊卵巢的形态学特征。
[0022]本申请的多囊卵巢综合征小鼠卵泡形态学评估方法及应用，通过确定DHEA诱导PCOS疾病小鼠卵泡最大切面面积、壁层颗粒细胞层面积、壁层颗粒细胞层面积与目标卵泡的最大切面面积比值的形态学评估临界值，准确评估PCOS。本申请的方案具有准确、高效、可重复性的特点，并且该方法的建立对研究PCOS的发生、发展机制以及有效的治疗措施具有重要意义。
附图说明
[0023]图1为正常小鼠离体卵巢组织切片染色图。
[0024]图2为PCOS小鼠离体卵巢组织切片染色图。
[0025]图3为正常组与PCOS组离体卵巢组织的最大切面面积统计结果。
[0026]图4为正常组与PCOS组离体卵巢组织壁层颗粒细胞层面积统计结果。
[0027]图5为正常组与PCOS组离体卵巢组织壁层颗粒细胞层面积/最大切面面积比值的统计结果。
具体实施方式
[0028]下面结合实施方式和实施例，对本申请作进一步详细的说明。应理解，这些实施方式和实施例仅用于说明本申请而不用于限制本申请的范围，提供这些实施方式和实施例的目的是使对本申请公开内容理解更加透彻全面。还应理解，本申请可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施方式和实施例，本领域技术人员可以在不违背本申请内涵的情况下作各种改动或修改，得到的等价形式同样落于本申请的保护范围。此外，在下文的描述中，给出了大量具体的细节以便提供对本申请更为充分地理解，应理解，本申请可以无需一个或多个这些细节而得以实施。
[0029]除非另有定义，本申请所使用的所有的技术和科学术语与属于本申请的
的技术人员通常理解的含义相同。
complex，COC)，卵丘细胞参与细胞增殖和代谢；壁层颗粒细胞分布在卵泡壁，靠近基底膜和膜细胞，参与细胞分化和信号转导，同时，其还是类固醇激素生成的主要细胞，以旁分泌的方式促进卵泡发育。
[0041]FSH由脑垂体分泌，是下丘脑
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垂体
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性腺轴中的重要激素。颗粒细胞表面有丰富的受体，如：FSH受体、LH受体和雌激素受体。FSH与颗粒细胞上的FSH受体结合后，产生多种信号分子，促进卵泡募集，卵母细胞生长，使窦前卵泡向窦状卵泡发育，同时也促进颗粒细胞增殖和细胞内芳香化酶的合成，芳香化酶催化雄激素转化为雌激素。LH同样由脑垂体分泌，其作用是启动卵母细胞减数分裂、排卵、促进卵泡分化成黄体。LH峰作用于颗粒细胞上的LH受体，诱导卵丘颗粒细胞分泌透明质酸，使输卵管捕获卵巢排出的卵子。颗粒细胞表达的雌激素受体在雌激素刺激下诱导卵泡发育成熟和排卵。
[0042]脱氢表雄酮(Dehydroepiandrosterone)：是一种由肾上腺分泌产生的甾类激素，其英文缩写是DHEA。身体能将脱氢表雄甾酮转变成叫做雌激素和睾酮的另外两种甾类激素。脱氢表雄酮可在卵泡膜细胞中由胆固醇代谢产生，转变为雄烯二酮，后进入颗粒细胞，转化为雌本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种多囊卵巢综合征小鼠卵泡形态学评估方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤S1、选取周龄6～24周的小鼠的离体卵巢组织经过连续切片与染色后，确定目标卵泡在选取的多个切片中的最大切面面积，所述目标卵泡包括成熟卵泡或异常增大的卵泡；步骤S2、统计具有目标卵泡的最大切面面积的切片中围绕该目标卵泡的壁层颗粒细胞内层的面积，计算卵巢壁层颗粒细胞层的面积；步骤S3、根据目标卵泡最大切面面积与围绕该目标卵泡的壁层颗粒细胞内层的面积计算目标卵泡的所述卵巢壁层颗粒细胞层的面积与其最大切面的面积的比值；步骤S4、根据所述目标卵泡的最大切面面积，和目标卵泡的卵巢壁层颗粒细胞层的面积与其最大切面的面积的比值判断该离体卵巢组织是否符合多囊卵巢的形态学特征。2.根据权利要求1所述的多囊卵巢综合征小鼠卵泡形态学评估方法，其特征在于，所述连续切片中每张切片的厚度独立地为4～6μm。3.根据权利要求2所述的多囊卵巢综合征小鼠卵泡形态学评估方法，其特征在于，所述连续切片中每切8～12张切片选取一张切片进行染色。4.根据权利要求3所述的多囊卵巢综合征小鼠卵泡形态学评估方法，其特征在于，所述染色的方法包括HE染色和Masson染色中的一种或两种。5.根据权利要求1所述的多囊卵巢综合征小鼠卵泡形态学评估方法，其特征在于，所述目标卵泡的数量≥1；可选地，所述目标卵泡的数量＞1。6.根据权利要求1～5任一项所述的多囊卵巢综合征小鼠卵泡形态学评估方法...
【专利技术属性】
技术研发人员：肖娜，程腊梅，林戈，卢光琇，
申请(专利权)人：湖南光琇高新生命科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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