一种婴儿血管瘤微肿瘤模型的构建方法及应用技术

本发明专利技术属于生物医学领域，公开了一种婴儿血管瘤CD31+HemECs3D微肿瘤模型的构建方法及应用，包括：在无菌条件，用手术剪将血管瘤样本切碎，采用胶原酶A消化剪碎的组织；使用流式细胞仪从原代培养物中无菌分选CD31+细胞，在37℃含5％CO2的湿化环境中，对CD31+HemECs进行培养；将新鲜的猪主动脉浸泡在含有100U/ml青霉素和100g/ml链霉素的磷酸盐缓冲盐水(PBS)中，置于冰上后立即转入实验室，进行猪主动脉去细胞化及血管特异性DAM特征；分析脱细胞猪主动脉细胞外基质水凝胶的特性；制备微图案阵列打印3D培养皿，形成CD31+HemEC微肿瘤；评估模型对IH一线治疗药物普萘洛尔的适用性。本发明专利技术为IH的机制探索和药物筛选提供更加稳定和高效的实验模型，有利于维持肿瘤的异质性，模拟体内瘤体组织。拟体内瘤体组织。拟体内瘤体组织。

【技术实现步骤摘要】
一种婴儿血管瘤微肿瘤模型的构建方法及应用


[0001]本专利技术属于生物医学领域，尤其涉及一种婴儿血管瘤CD31+HemECs3D微肿瘤模型的构建方法及应用。

技术介绍

[0002]目前，婴儿血管瘤(infantitle hemangioma,IH)是婴儿最常见的血管肿瘤，它是一种非先天性的良性肿瘤，在新生儿中的发病率约为4％
‑
5％.在过去的40年里，IH的发病率似乎显著增加，这可能与低出生体重和早产儿的增加有关。
[0003]IH的发生发展呈现了一个独特的生命周期，病变在出生时并不存在，一般在患儿3至7周开始，增殖至12个月，消退期开始于1岁左右，并持续3
‑
5年，大约50％～70％肿瘤有残余(毛细血管扩张、纤维脂肪组织、皮肤赘余、水肿、色素沉着或疤痕)。约10％
‑
15％的婴儿血管瘤可出现并发症，如肿瘤溃疡出血，也可导致美容问题，甚至会造成严重的毁容，可造成气道阻塞，发生严重并发症危及生命，也可引起视力障碍，在某些情况下还会发生充血性心力衰竭.我们之前研究证实IH对患儿及父母生本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种婴儿血管瘤CD31+HemECs3D微肿瘤模型的构建方法，其特征在于，所述婴儿血管瘤CD31+HemECs3D微肿瘤模型的构建方法包括：步骤一，在无菌条件下，用手术剪将血管瘤样本切碎，采用胶原酶A消化剪碎的组织；步骤二，使用流式细胞仪从原代培养物中无菌分选CD31+细胞，在37℃含5％CO2的湿化环境中，对CD31+HemECs进行培养；步骤三，将新鲜的猪主动脉浸泡在含有100U/ml青霉素和100g/ml链霉素的磷酸盐缓冲盐水(PBS)中，置于冰上后立即转入实验室，采用Triton
‑
SDS
‑
Triton门静脉灌注法进行猪主动脉去细胞化及血管特异性DAM特征；步骤四，进行脱细胞猪主动脉细胞外基质水凝胶的特性分析；步骤五，制备微图案阵列打印3D培养皿，形成CD31+HemEC微肿瘤；步骤六，评估模型对IH一线治疗药物普萘洛尔的适用性。2.如权利要求1所述婴儿血管瘤CD31+HemECs3D微肿瘤模型的构建方法，其特征在于，所述步骤一是采用内皮细胞培养基培养原代细胞，所述内皮细胞培养基包含EBM
‑
2，添加20％胎牛血清、浓度为100单位/ml的青霉素和浓度为100μg/ml的链霉素。3.如权利要求1所述婴儿血管瘤CD31+HemECs3D微肿瘤模型的构建方法，其特征在于，所述步骤三中猪主动脉去细胞化的具体过程为：(1.1)用蒸馏水在转速为100r/min的轨道振动筛上冲洗24h，裂解血细胞；(1.2)浸入浓度为0.5％的TritonX
‑
100溶液中，持续振荡24h；用PBS洗涤2h后，将猪主动脉浸入0.25％SDS溶液中，连续振荡72h；为了去除残留的洗涤剂，将脱细胞化的猪主动脉用PBS振荡72h；(1.3)将脱细胞化的猪主动脉与新鲜猪主动脉用多聚甲醛固定，经石蜡包埋切片后，进行HE染色，评价脱细胞的程度。4.如权利要求1所述婴儿血管瘤CD31+HemECs3D微肿瘤模型的构建方法，其特征在于，所述步骤三中血管特异性DAM特征的具体过程为：(2.1)将获得的脱细胞血管保存在－20℃下以备进一步使用，所有步骤均在无菌环境下进行；(2.2)使用Wiley Mill将冻干的DAM磨成粉末，用浓度为10％的胃蛋白酶及0.01M HCl在室温下搅拌48h，获得血管脱细胞化ECM水凝胶；(2.3)加入0.1M NaOH将DAM溶液中和到pH值为7.2～7.4，...

【专利技术属性】
技术研发人员：李亚楠，朱星龙，吉毅，包骥，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，
类型：发明
国别省市：