结核鉴别诊断细胞因子及其在结核感染风险评估中的应用制造技术

本发明专利技术提供用于鉴别诊断结核分枝杆菌潜伏感染和细菌学阴性活动性感染及非结核肺部疾病IFN

【技术实现步骤摘要】
结核鉴别诊断细胞因子及其在结核感染风险评估中的应用


[0001]本专利技术涉及结核分枝杆菌潜伏感染和细菌学阴性活动性感染及非结核肺部疾病IFN
‑
γ阳性鉴别诊断的细胞因子及诊断模型，和其在结核感染风险评估中的应用，属于结核病检测


技术介绍

[0002]WHO估计结核的潜伏感染比例为人口的1/3，而在特定条件下导致的潜伏感染结核向活动性结核的转变，从而出现结核临床表现是目前造成严重的结核疾病负担的重要因素之一。我国作为结核疾病高负担国家之一，降低结核发病率是目前结核病防控的重要目标。尽管多年来我国在结核感染诊断、治疗及科学防控等方面取得了一系列进展，然而鉴于我国较高的潜伏感染比例和庞大的人口基数，结核发病率仍然居高不下。
[0003]目前，临床诊断结核感染的方法有限。结核菌素试验(TST)是临床常用筛查结核的免疫学方法，虽然操作简单，观察结果方便，但由于其较高的假阳性，对临床结核病的诊断意义有限；细菌学是诊断结核的金标准，但培养所需时间较长，而且阳性率取决于采集标本中细菌的数量而导致阳性率低，不利于早期诊断与治疗；影像学作为辅助诊断方法，对活动性肺结核诊断有一定价值，但对肺外结核诊断存在困难，且用于结核诊断特异性较差；血清学检测如ELISA、金标等检测抗原或抗体，极难检测活性结核病，鉴于其高的假阴性和假阳性，2011年7月WHO已明确提出停止使用活性结核病血液检测方法。
[0004]结核菌感染引起的T细胞γ干扰素释放试验(IGRA)是近年发展起来的一种新方法，可用于诊断结核(TB)和潜伏结核感染(LTBI)，美国认为IGRA可代替结核菌素皮试(TST)，英国相关指南推荐联用IGRA和TST两种测试。已研制开发成功的QuantiFERON
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TB Gold test(Cellestis Limited，Carnegie，Victoria，Australia)和the T
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SPOT.TB test(Oxford Immunotec Limited，Abingdon，United Kingdom)，以RD1区编码的结核特异性抗原6KD早期分泌靶向抗原(ESAT
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6)和10KD培养滤过蛋白(CFP
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10)为刺激源，检测外周血中结核特异性释放γ干扰素的T淋巴细胞，特异性、灵敏度高，而且对于结核感染，尤其是自然感染和卡介苗接种等潜伏感染的诊断也具有较强的特异性。然而，IGRA检测不能有效鉴别活动性和潜伏性结核感染。
[0005]活动性结核和潜伏感染结核是结核感染后两种主要的表现形式，活动性结核具有高度传染性，而潜伏感染结核一般不具有传染性。如何从广泛的潜伏感染结核群体中鉴别检测出活动性结核，实现早诊断早隔离早治疗，对于控制结核的传播具有重要意义。然而，对于结核的潜伏感染和活动性感染尚无有效的鉴别诊断手段。不仅如此，细菌学阴性的结核感染患者由于缺乏实验室证据，容易与其他非结核肺部疾病患者混淆，而非结核肺部疾病患者由于人群普遍的结核分枝杆菌潜伏感染及治疗过程中机体免疫水平的下降，存在发展成为活动性感染的风险。因此，临床需要对具有细菌学阴性结核感染和非结核肺部疾病患者进行结核活动性感染风险检测评估的实验室诊断试剂。
[0006]本专利技术将以流式细胞检测技术为基础的多因子检测平台为基础，对结核特异性抗
原刺激的全血上清进行多因子检测分析，筛选细胞因子表达组合，并通过数学模型验证多因子检测在结核感染鉴别诊断中的检测效能，对细菌学阴性结核感染和非结核肺部疾病患者进行结核活动性感染风险检测和评估。

技术实现思路

[0007]为对结核分枝杆菌潜伏感染和细菌学阴性活动性感染及非结核肺部疾病IFN
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γ阳性活动性感染进行鉴别诊断，本专利技术提供以下技术方案：
[0008]一方面，本专利技术提供确定待测样品中白细胞介素2(IL
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2)、白细胞介素6(IL
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6)和肿瘤坏死因子
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α(TNF
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α)表达量的试剂在制备用于鉴别诊断结核分枝杆菌潜伏感染和细菌学阴性活动性感染及非结核肺部疾病IFN
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γ阳性活动性感染的试剂盒中的应用，其中
[0009]Y＝1/(1+EXP(
‑
0.097967922
×
A
‑
0.001303236
×
B+0.003329857
×
C+1.918391909))，其中EXP表示指数；A表示IL
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2的表达量，B表示IL
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6的表达量；C表示TNF
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α的表达量；其中当Y小于0.7时，待测样品诊断为细菌学阴性的结核分枝杆菌活动性感染，当Y大于或等于0.7时，待测样品诊断为结核分枝杆菌潜伏感染。
[0010]在一些实施方案中，所述试剂选自白细胞介素2(IL
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2)抗体或抗原结合片段、白细胞介素6(IL
‑
6)抗体或抗原结合片段和肿瘤坏死因子
‑
α(TNF
‑
α)抗体或抗原结合片段。
[0011]在一些实施方案中，所述试剂盒还包括结核分枝杆菌特异性抗原，所述结核分枝杆菌特异性抗原选自ESAT
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6、CFP
‑
10、Rv3873和Rv3615c。
[0012]在一些实施方案中，所述试剂盒还包括植物凝集素(PHA)溶液或其他T细胞非特异性阳性刺激物，所述其他T细胞非特异性阳性刺激物选自佛波酯、离子霉素和CD3激活型抗体。
[0013]另一方面，本专利技术提供用于鉴别诊断结核分枝杆菌潜伏感染和细菌学阴性活动性感染及非结核肺部疾病IFN
‑
γ阳性活动性感染的T细胞特异性细胞因子，所述T细胞特异性细胞因子包括白细胞介素2(IL
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2)、白细胞介素6(IL
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6)和肿瘤坏死因子
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α(TNF
‑
α)。
[0014]另一方面，本专利技术提供用于鉴别诊断结核分枝杆菌潜伏感染和细菌学阴性活动性感染及非结核肺部疾病IFN
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γ阳性活动性感染的组合物或试剂盒，包括白细胞介素2(IL
‑
2)抗体或抗原结合片段、白细胞介素6(IL
‑
6)抗体或抗原结合片段和肿瘤坏死因子
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α(TNF
‑
α)抗体或抗原结合片段。
[0015]在一些实施方案中，所述用于鉴别诊断结核分枝杆菌潜伏感染和细菌学阴性活动性感染及非结核肺部疾病IFN
‑
γ阳性活动性感染的组合物或试剂盒，还包括结核分枝杆菌特异性抗原，所述结核分枝杆菌特异性抗原选自ESAT
‑
6、CFP
‑
10、Rv3873和Rv3615c。
[0016]在一些实施本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.确定待测样品中白细胞介素2(IL
‑
2)、白细胞介素6(IL
‑
6)和肿瘤坏死因子
‑
α(TNF
‑
α)表达量的试剂在制备用于鉴别诊断结核分枝杆菌潜伏感染和细菌学阴性活动性感染及非结核肺部疾病IFN
‑
γ阳性活动性感染的试剂盒中的应用，其中Y＝1/(1+EXP(
‑
0.097967922
×
A
‑
0.001303236
×
B+0.003329857
×
C+1.918391909))，其中EXP表示指数；A表示IL
‑
2的表达量，B表示IL
‑
6的表达量；C表示TNF
‑
α的表达量；其中当Y小于0.7时，待测样品诊断为细...

【专利技术属性】
技术研发人员：高福，谭曙光，蒋敏，孙文桥，
申请(专利权)人：中国科学院微生物研究所，
类型：发明
国别省市：