利用HPLC-MS-MS测定普拉克索在血浆中含量的方法技术

本发明专利技术公开了利用HPLC

【技术实现步骤摘要】
利用HPLC
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MS
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MS测定普拉克索在血浆中含量的方法


[0001]本专利技术属于药物分析领域，具体涉及利用HPLC
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MS
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MS(高效液相色谱
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串联质谱技术)测定普拉克索在血浆中含量的方法。

技术介绍

[0002]普拉克索，是一种非麦角类的选择性多巴胺受体激动剂，被用来治疗特发性帕金森病的体征和症状；普拉克索由Boehringer
‑
Ingelheim公司研发，于1997年被FDA批准上市，2014年我国批准进口原研药品。
[0003]建立准确测定血浆样品中普拉克索含量的生物分析方法是该药进行以药动学参数为终点的生物等效性评价的必要条件。目前，现有技术未公开如何解决普拉克索生物样品分析中残留、吸附，及基质影响下准确定量的问题。

技术实现思路

[0004]本专利技术利用碱性洗针液、塑料材质管、硅胶色谱柱及同位素内标相结合的方法，为普拉克索以药动学为终点的生物等效性评价提供了抗吸附、无残留、准确的定量方法。
[0005]本专利技术提供了利用HPLC
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MS
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MS(高效液相色谱
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串联质谱技术)测定普拉克索在血浆中含量的方法，所述的测定方法包括如下步骤：
[0006]1)采用与待测样品来源相同的血浆配制标准样品和质控样品，分别加入同位素内标示踪普拉克索；
[0007]2)采用塑料材质管对步骤1)所述的样品在碱性条件下进行萃取，吹干后用复溶溶剂溶解；
[0008]3)采用正相色谱分离，酸性条件下对步骤2)溶解后样品进行分离，进样针外部清洗选择碱性洗针液；
[0009]4)用MS(质谱)作为检测器对步骤3)得到的样品进行分析。
[0010]在本专利技术的实施方案中，测定方法步骤1)所述的来源相同指的是相同人种来源的血浆。
[0011]在本专利技术的实施方案中，测定方法步骤1)所述的同位素内标指的是普拉克索
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D5。
[0012]在本专利技术的实施方案中，测定方法步骤2)所述的塑料材质管包括PP(聚丙烯)、PE(聚乙烯)和PVC(聚氯乙烯)中一种或多种。
[0013]在本专利技术的实施方案中，测定方法步骤2)所述的碱性条件指以NaOH或氨水调节的pH范围为9
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11的碱性条件。
[0014]在本专利技术的实施方案中，测定方法步骤2)所述的萃取指液液萃取或固相支持液液萃取。
[0015]在本专利技术的实施方案中，测定方法步骤2)所述的复溶溶剂为乙腈、或体积比大于85:15的甲醇
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水溶液。
[0016]在本专利技术的实施方案中，测定方法步骤3)所述的正相色谱指填料表面为硅醇基
(Si—OH)或以硅醇基(Si—OH)为主要官能团。
[0017]在本专利技术的实施方案中，测定方法步骤3)所述的酸性条件指以缓冲盐水溶液和含酸的有机溶剂作为流动相进行洗脱；所述缓冲盐水溶液为0.005～0.020mol/L的乙酸铵缓冲液或甲酸铵缓冲液；所述含酸的有机溶剂为含0.05体积％～0.10体积％甲酸的乙腈。
[0018]在本专利技术的实施方案中，测定方法步骤3)所述的碱性洗针液指用氨水调节的pH范围为8
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11的有机溶液或水溶液，所述有机溶液为含5体积％氨水的甲醇
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乙腈
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异丙醇体积比为1:1:1的溶液。
[0019]在本专利技术的实施方案中，测定方法步骤3)所述的正相色谱分离指：初始时，含酸的有机溶剂与缓冲盐水溶液的体积比为(85
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95):(15
‑
5)；中间洗脱时，含酸的有机溶剂与缓冲盐水溶液的体积比为50:50，方法结束时保持初始时含酸的有机溶剂与缓冲盐水溶液的体积比。
[0020]本专利技术的有益结果在于：
[0021]提出解决普拉克索残留、吸附的方法，明确了不同血浆中基质效应差异对准确定量的影响。
附图说明
[0022]图1表示的是双空白样品图谱。
[0023]图2表示的是定量下限图谱。
[0024]图3表示的是定量上限样品。
[0025]图4表示的是定量上限样品后的双空白样品图谱。
具体实施方式
[0026]下面通过本专利技术实施例对本专利技术的实施方案进行描述。
[0027]实施例1普拉克索的灵敏度及专属性
[0028]利用液液萃取原理将待测物提取分离。在两个15mLPP材质塑料管中分别加入200μL的空白血浆、200μL含普拉克索5pg/mL的血浆样品，再分别加入50μL普拉克索
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D5溶液(0.8ng/mL，溶剂：甲醇，其中空白血浆样品该步骤用甲醇替代)；加入200μL 5体积％氨水溶液，涡旋混匀；加入1.5mL甲基叔丁基醚，涡旋5min混匀；3000rpm离心3min，冷冻取上清溶液至长玻璃管中，40℃下用氮气吹干，再用200μL体积比为90:10的甲醇
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水溶液复溶。将样品加入96孔板中，通过HPLC
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MS
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MS(HPLC：Shimadzu公司，LC
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30AD；MS：AB Sciex公司，TQ6500+)检测。
[0029]HPLC
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MS
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MS的检测条件如下：
[0030]硅羟基色谱柱(2.1mm
×
100mm，3μm)，0.010mol/L的甲酸铵缓冲液为流动相A和C，以乙腈(含0.1体积％甲酸)为流动相B和D，进样针外部清洗使用含5体积％氨水的甲醇
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乙腈
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异丙醇体积比为1:1:1的溶液。柱温为40℃，进样量为10μL，按如下梯度程序进行洗脱：
[0031]其中LC
‑
20AT(用作二维泵)：
[0032]C相初始流速：0.12mL/min，D相初始流速：0.68mL/min；
[0033]LC
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30AD(用作一维泵)：
[0034]Total Flow(初始流速)：0.60mL/min，指A、B泵总流速
[0035]A相初始比例：10％，B相初始比例：90％；
[0036][0037][0038]双空白样品在分析物及内标出峰位置3.30min无干扰(见图1)，定量下限信噪比7.7(见图2)。
[0039]实施例2不同材质上普拉克索的吸附
[0040]用体积比90:10的甲醇
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水溶液配制成8mL样品溶液在塑料管中混匀，其中普拉克索(A)和普拉克索
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D5(IS)浓度分别为：500pg/mL、500pg/mL，未进行转管的样品记为S0。分别加1mL上述溶液到两支塑料管S1、S2、两支玻璃管B1、B2中，均涡旋1min，其中S1本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.利用HPLC
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MS
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MS测定普拉克索在血浆中含量的方法，所述的测定方法包括如下步骤：1）采用与待测样品来源相同的血浆配制标准样品和质控样品，分别加入同位素内标示踪普拉克索；2）采用塑料材质管对步骤1）得到的样品在碱性条件下进行萃取，吹干后用复溶溶剂溶解；3）采用正相色谱分离，酸性条件下对步骤2）得到的样品进行分离，进样针外部清洗选择碱性洗针液；4）用MS（质谱）作为检测器进行样品分析。2.如权利要求1所述的方法，其中，步骤1）所述的来源相同指的是相同人种来源的血浆。3.如权利要求1所述的方法，其中，步骤1）所述的同位素内标指的是普拉克索
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D5。4.如权利要求1所述的方法，其中，步骤2）所述的塑料材质管包括PP（聚丙烯）、PE（聚乙烯）和PVC（聚氯乙烯）中一种或多种。5.如权利要求1所述的方法，其中，步骤2）的碱性条件指以NaOH或氨水调节的pH范围为9
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11的碱性条件。6.如权利要求1所述的方法，其中，步骤2）所述的萃取指液液萃取或固相支持液液萃取。7.如权利要求1所述的方法，其中，步骤2）所述的复溶溶剂为乙腈、或体积比大于85:15的甲醇与水的溶液。8.如权利要求1至7中任一项所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨再香，何艳，严紫薇，
申请(专利权)人：植恩生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：