一种重金属铅离子培养基环境下的羊肚菌菌丝培养方法技术

本发明专利技术属于食用菌培养技术领域，公开了一种重金属铅离子培养基环境下的羊肚菌菌丝培养方法，在综合分析相关研究的基础上，聚焦羊肚菌生长前期中菌丝体培育；通过制备含不同浓度铅离子溶液的培养基，将羊肚菌母种接种到含不同浓度铅离子溶液的培养基中放入培养箱培养，培养箱参数为温度25℃、湿度5％rH、光照0％；以七天为生长记录周期，每天记录羊肚菌菌丝生长情况。本发明专利技术聚焦食用菌生长前期中菌丝体培育这一片段，通过创造性地在空白培养基中加入重金属离子来制备不同浓度铅离子溶液的培养基，将羊肚菌菌丝置于重金属环境背景下培养，观察不同浓度Pb

【技术实现步骤摘要】
一种重金属铅离子培养基环境下的羊肚菌菌丝培养方法


[0001]本专利技术属于食用菌培养
，尤其涉及一种重金属铅离子培养基环境下的羊肚菌菌丝培养方法。

技术介绍

[0002]目前，工业和科技的发展带来了许多诟病，重金属问题就是其中之一。就食用菌而言，随着工业和城市污染物的大量排放，以及农药、化肥的不合理使用，食用菌中重金属污染也日益严重。食用菌富集吸附重金属最早是从蘑菇属(Agaricus)中镉高水平积累发现的。食用菌富集吸附重金属具有差异性，这种差异性不但体现在食用菌的种类上，还体现在不同的重金属元素上。若能摸清菌丝体吸附重金属的规律，就可以采取有效手段降低菌体内的重金属含量，规范生产程序，为食用菌食品质量安全提供保障。目前而言，围绕食用菌富集重金属的能力、特点、规律等方面已经展开了不少研究，但目前的研究仅停留在对食用菌子实体富集重金属的初级探索方面，一般做法是选用未被污染的食用菌栽培种通过栽培后，以获取的食用菌子实体为研究对象去探究其对重金属的吸收规律；或者通过添加外源物控制栽培基质中的重金属含量来影响子实体生长过程中对重金属的吸收，但最终也是以食用菌子实体为实验对象去研究食用菌与重金属之间的富集规律，并没有细化到食用菌菌丝吸收重金属方面的研究。
[0003]通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：现有技术仅停留在对食用菌富集重金属的初级探索方面，并没有细化到食用菌菌丝方面的研究。

技术实现思路

[0004]为了解决现有技术中仅针对食用菌子实体富集重金属的研究而忽略食用菌菌丝体吸附重金属方面的探索，本专利技术提供了一种重金属铅离子培养基环境下的羊肚菌菌丝培养方法。
[0005]本专利技术是这样实现的，一种重金属铅离子培养基环境下的羊肚菌菌丝培养方法，以羊肚菌菌丝为试验材料，以浓度为0mg/L、2mg/L、4mg/L、6mg/L、8mg/L、10mg/L的重金属铅胁迫培养羊肚菌菌丝，研究羊肚菌菌丝生长状况。所述重金属铅离子培养基环境下的羊肚菌菌丝培养方法包括：
[0006]在综合分析相关研究的基础上，聚焦羊肚菌生长前期中菌丝体培育；通过制备含不同浓度铅离子溶液的培养基，将羊肚菌母种接种到含不同浓度铅离子溶液的培养基中放入培养箱培养，培养箱参数为温度25℃、湿度5％rH、光照0％；以七天为生长记录周期，每天记录羊肚菌菌丝生长情况。
[0007]进一步，所述重金属铅离子培养基环境下的羊肚菌菌丝培养方法具体过程为：步骤一，制备空白PDA培养基，盛于三角瓶中，并对空白PDA培养基进行标注；将三角瓶中制备好的空白培养基置于灭菌锅中，进行灭菌；
[0008]步骤二，根据稀释前后溶质的量相等公式配制好所需浓度的Pb
2+
溶液，将配置好的
所需浓度的Pb
2+
溶液加入空白培养基中，充分摇匀，摇匀后将混有铅离子溶液的培养基倒入培养皿中，实现不同浓度铅离子溶液培养基的配制；
[0009]步骤三，通过打孔器在原种平板上打孔，将打孔器在原种平板上打出的菌块接入不同浓度铅离子溶液培养基中，完成接种过程；
[0010]步骤四，以七天为观察周期，每天定时记录羊肚菌菌丝生长情况。
[0011]进一步，所述步骤一中，制备空白PDA培养基具体过程为：
[0012]将土豆洗净去皮，按培养基配方称取200g去皮土豆，土豆切成小块放入锅中，加水1000ml煮烂，用八层纱布过滤，弃去滤渣，滤液补充水分到1000ml；
[0013]把滤液放入锅中，加入葡萄糖，搅拌均匀，再据实际实验需要加入15～20g琼脂，继续加热并用玻璃棒不断搅拌，待琼脂溶解完后，再补足水分至1000ml。
[0014]进一步，所述加水1000ml煮烂具体过程为：煮沸20～30分钟，能被玻璃棒戳破停止。
[0015]进一步，所述步骤一中，盛于三角瓶中具体过程为：
[0016]将配制的空白培养基分装于三角瓶内，分装时用三角漏斗辅助分装，以免使培养基沾在瓶口上造成污染。
[0017]进一步，所述步骤一中，对空白PDA培养基进行标注具体过程为：
[0018]分装完成后，在三角瓶口上塞上棉塞，再在棉塞外包一层牛皮纸，通过橡皮筋扎好，通过记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。
[0019]进一步，所述步骤一中，将三角瓶中制备好的空白培养基置于灭菌锅中，进行灭菌具体过程为：
[0020]将三角瓶中制备好的空白培养基置于灭菌锅中，设置参数121℃灭菌20分钟后取出；培养基经灭菌后，放在25℃培养箱中培养24h，直至无菌生长，进行使用。
[0021]进一步，所述步骤二中，实现不同浓度铅离子溶液培养基的配制具体过程为：
[0022]根据稀释前后溶质的量相等公式C1V1＝C2V2配制好所需浓度的Pb
2+
溶液；所需Pb
2+
溶液的浓度分别为：0mg/L、2mg/L、4mg/L、6mg/L、8mg/L、10mg/L；
[0023]将三角瓶内空白培养基加热至热溶状态后置于超净工作台内，通过移液枪将事先配制好的不同浓度的铅离子溶液加入空白培养基中，充分摇匀，摇匀后将混有铅离子溶液的培养基倒入培养皿中；
[0024]将含重金属铅离子溶液的培养基置于25℃培养箱中培养24h，被杂菌感染的培养皿剔除；在铅离子溶液的添加顺序过程中，先将空白培养基加入三角瓶中，再往三角瓶中加入铅离子溶液。
[0025]进一步，所述步骤三中，接种过程具体过程为：
[0026]剔除掉被杂菌感染的培养皿后，选择符合标准的培养皿置于超净工作台内，通过打孔器在培养皿内居中打孔：首先采用进行过灭菌的打孔器在原种平板上打孔，然后将打孔器在原种平板上打出的菌块接入不同浓度铅离子溶液培养基中，完成一次接种操作；在相同条件下接种完六组不同浓度铅离子溶液的培养皿放入培养箱培养，培养箱中培养参数统一设置为温度25℃、湿度5％rH、光照0％；六组不同浓度铅离子溶液的培养皿中每组重复设三个平行组。
[0027]进一步，所述步骤四中，羊肚菌菌丝生长情况包括菌落直径、菌丝色泽、尖端发育
情况。
[0028]结合上述的技术方案和解决的技术问题，请从以下几方面分析本专利技术所要保护的技术方案所具备的优点及积极效果为：
[0029]第一、针对上述现有技术存在的技术问题以及解决该问题的难度，紧密结合本专利技术的所要保护的技术方案以及研发过程中结果和数据等，详细、深刻地分析本专利技术技术方案如何解决的技术问题，解决问题之后带来的一些具备创造性的技术效果。具体描述如下：
[0030]本专利技术在综合分析相关研究的基础上，聚焦食用菌生长前期中菌丝体培育这一片段，通过创造性地在空白培养基中加入重金属离子来制备不同浓度铅离子溶液的培养基，将羊肚菌菌丝置于重金属环境背景下培养，观察不同浓度Pb
2+
环境下的羊肚菌菌丝生长情况，探索出羊肚菌菌丝对铅离子最大富集值和耐受值。
[0031]第二，把技术方案看做一个本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重金属铅离子培养基环境下的羊肚菌菌丝培养方法，其特征在于，所述重金属铅离子培养基环境下的羊肚菌菌丝培养方法包括：在综合分析相关研究的基础上，聚焦羊肚菌生长前期中菌丝体培育；通过制备含不同浓度铅离子溶液的培养基，将羊肚菌母种接种到含不同浓度铅离子溶液的培养基中放入培养箱培养，培养箱参数为温度25℃、湿度5％rH、光照0％；以七天为生长记录周期，每天记录羊肚菌菌丝生长情况。2.如权利要求1所述重金属铅离子培养基环境下的羊肚菌菌丝培养方法，其特征在于，所述重金属铅离子培养基环境下的羊肚菌菌丝培养方法具体过程为：步骤一，制备空白PDA培养基，盛于三角瓶中，并对空白PDA培养基进行标注；将三角瓶中制备好的空白培养基置于灭菌锅中，进行灭菌；步骤二，根据稀释前后溶质的量相等公式配制好所需浓度的Pb
2+
溶液，将配置好的所需浓度的Pb
2+
溶液加入空白培养基中，充分摇匀，摇匀后将混有铅离子溶液的培养基倒入培养皿中，实现不同浓度铅离子溶液培养基的配制；步骤三，通过打孔器在原种平板上打孔，将打孔器在原种平板上打出的菌块接入不同浓度铅离子溶液培养基中，完成接种过程；步骤四，以七天为观察周期，每天定时记录羊肚菌菌丝生长情况。3.如权利要求2所述重金属铅离子培养基环境下的羊肚菌菌丝培养方法，其特征在于，所述步骤一中，制备空白PDA培养基具体过程为：将土豆洗净去皮，按培养基配方称取200g去皮土豆，土豆切成小块放入锅中，加水1000ml煮烂，用八层纱布过滤，弃去滤渣，滤液补充水分到1000ml；把滤液放入锅中，加入葡萄糖，搅拌均匀，再据实际实验需要加入15～20g琼脂，继续加热并用玻璃棒不断搅拌，待琼脂溶解完后，再补足水分至1000ml。4.如权利要求3所述重金属铅离子培养基环境下的羊肚菌菌丝培养方法，其特征在于，所述加水1000ml煮烂具体过程为：煮沸20～30分钟，能被玻璃棒戳破停止。5.如权利要求2所述重金属铅离子培养基环境下的羊肚菌菌丝培养方法，其特征在于，所述步骤一中，盛于三角瓶中具体过程为：将配制的空白培养基分装于三角瓶内，分装时用三角漏斗辅助分装，以免使培养基沾在瓶口上造成污染。6.如权利要求2所述重金属铅离子培养基环境下的羊...

【专利技术属性】
技术研发人员：李浪，刘妮，王玉珠，苏文文，朱生亮，代丽华，
申请(专利权)人：贵州省山地资源研究所，
类型：发明
国别省市：