一种复合抗菌剂及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种复合抗菌剂及其应用，复合抗菌剂包括以下质量份的组分：0.05～1.6份乳酸链球菌素和1.6～51.2份盐酸小檗碱，用于抑制MRSA的生长，Nisin和盐酸小檗碱联用对MRSA具有协同抗菌作用，可降低二者的药物使用浓度，加快杀菌时间，能高效破除已成熟的生物膜并抑制生物膜的形成，并对创面愈合具有更强的促进作用。的促进作用。的促进作用。

【技术实现步骤摘要】
一种复合抗菌剂及其应用


[0001]本专利技术涉及微生物医药领域，具体涉及一种复合抗菌剂及其应用。

技术介绍

[0002]MRSA是慢性创面中最常分离的细菌。对于MRSA引起的创面感染治疗选择有限，因为这些菌株对整个类别的β
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内酰胺类抗生素都有抗药性。万古霉素一度被认为是治疗MRSA感染的最后一道防线，但也有越来越多的关于万古霉素体外抗药性的报道。除此之外，万古霉素必须静脉给药，创面修复是一个长期的过程，这使得在院外给药造成了困难，加重了患者的负担。而局部使用的抗菌剂如银离子、碘等对微生物是非选择性的杀灭并且对正常细胞具有细胞毒性，可能会破坏伤口床上的肉芽组织和上皮化。应用抗生素也可能会导致新耐药菌种的产生，因此，人们对寻找替代的治疗方法越来越感兴趣。
[0003]随着对皮肤微生态的不断研究的深入，微生态制剂疗法成为焦点。经过查阅资料发现乳酸链球菌产生的乳酸链球菌素(Nisin细菌素，下称Nisin)是目前唯一商业化生产的细菌素。Nisin作为食品防腐剂使用历史悠久，几乎没有证据表明，在已使用了近50年的Nisin的食品制品中出现稳定的耐药突变体。目前，Nisin的应用已经延展到生物医学的范畴，对包括MRSA在内的多种耐药的G
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菌均有抑制作用。Nisin是一种安全性较高的细菌素，但Nisin不能人工化学合成，生产成本高。因此，单独使用Nisin可能会导致用量过大，从而增加治疗成本。除此之外，Nisin抗菌谱较窄，对革兰氏阴性菌抗菌作用不强，由于MRSA感染性创面常合并与创面继发感染相关的菌群的定植增加，因此单独使用Nisin作为治疗药物来说是远远不够的。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供了一种复合抗菌剂及其应用，用以解决目前现有微生态制剂治疗成本高、对特定菌种抗菌作用不强的技术问题。
[0005]为解决上述技术问题，本专利技术采用以下技术方案：
[0006]一种复合抗菌剂，包括以下质量份的组分：
[0007]0.05～1.6份乳酸链球菌素和1.6～51.2份盐酸小檗碱。
[0008]上述技术方案的设计思路在于，专利技术人发现，盐酸小檗碱抗菌具有广谱性，对金葡菌、结核杆菌、肺炎双球菌等细菌都具有强大的抑制作用，而乳酸菌抑制的有害菌的主要物质为细菌素，Nisin与盐酸小檗碱均有破坏细菌生物膜的功能，因此盐酸小檗碱与Nisin在抗菌作用方面存在协同作用。联合使用可降低两者的使用浓度，降低抗菌药物的毒性和有效剂量，使得药物作用的时间进一步缩短，加快杀菌速度，并最大限度地减少细菌耐药性；同时，专利技术人还发现乳酸链球菌素和盐酸小檗碱联用促进创面的愈合。
[0009]作为上述技术方案的进一步优选，所述复合抗菌剂包括以下质量份的组分：
[0010]0.1～0.4份乳酸链球菌素、6.4～12.8份盐酸小檗碱。
[0011]基于同一技术构思，本专利技术还提供一种上述复合抗菌剂的应用，所述复合抗菌剂
用于抑制MRSA的生长。
[0012]作为上述技术方案的进一步优选，所述复合抗菌剂用于抑制MRSA生长时，将复合抗菌剂涂覆至MRSA菌落处形成抗菌体系，并使抗菌体系内乳酸链球菌素的浓度达到5～16μg/mL，盐酸小檗碱的浓度达到16～512μg/mL。
[0013]与现有技术相比，本专利技术的优点在于：
[0014]本专利技术的复合抗菌剂中Nisin和盐酸小檗碱联用对MRSA具有具有协同抗菌作用，可降低二者的药物使用浓度，加快杀菌时间，能高效破除已成熟的生物膜并抑制生物膜的形成，并对创面愈合具有更强的促进作用。
[0015]说明书附图
[0016]图1为实施例1中不同浓度Nisin的抗菌效果图；
[0017]图2为实施例1中不同浓度盐酸小檗碱的抗菌效果图；
[0018]图3为实施例1中不同组药剂的时间
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杀菌曲线；
[0019]图4为实施例1中不同组药剂对MRSA生物膜的破坏效果图；
[0020]图5为图4中四组药剂对MRSA生物膜的破坏效果对比结果；
[0021]图6为实施例1中不同组药剂对MRSA生物膜生长的抑制效果图；
[0022]图7为图6中四组药剂对MRSA生物膜生长的抑制效果对比结果；
[0023]图8为实施例1中不同组小鼠的体重生长曲线；
[0024]图9为实施例1中不同组小鼠的创面愈合情况；
[0025]图10为实施例1中不同组小鼠的创面愈合率随时间的变化关系；
[0026]图11为实施例1中不同组小鼠的第10d病理组织HE切片图(图种A为盐酸小檗碱组，B为Nisin组，C为盐酸小檗碱+Nisin组，D为生理盐水组，E为庆大霉素组)。
具体实施方式
[0027]以下结合具体实施例对本专利技术作进一步详细说明，实施例中所用主要试剂如表1所示，主要器材如表2所示，实施例所用实验动物为SPF级BALB/c雄性小鼠，4W龄，体重18
±
2g，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，许可证号：SCXK(沪)2017
‑
0005。
[0028]表1.实施例主要试剂
[0029][0030]表2.实施例主要器材
[0031][0032][0033]实施例1：
[0034]本实施例对复合抗菌剂对MRSA的抑制作用进行了研究。
[0035]一、体外抗菌实验
[0036]1.实验试剂的准备
[0037]MH肉汤(CAMHB)：将MH肉汤粉末21g溶解于三蒸水1000ml，高温高压灭菌15min(温度为121℃)。
[0038]Nisin原液：乳酸链球菌素粉末于4℃避光保存。称取10mg Nisin粉末溶于6.25mL DMSO，配成1600ug/ml的母液，然后用MH肉汤培养基稀释。
[0039]盐酸小檗碱：盐酸小檗碱粉末于常温避光保存，称取10mg盐酸小檗碱粉末溶于2mL DMSO，配置成5mg/ml浓度的母液；用MH肉汤培养基稀释，配置成512ug/ml的含药培养基。
[0040]2.细菌培养及菌液制备
[0041]将
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20℃甘油中保存的菌株于室温下放置30min复苏。用接种环刮甘油菌后，在MH平板上划线，将平板倒置恒温37℃培养过夜；用接种环挑取单克隆菌，接种至MH肉汤中，恒温37℃于摇床中摇菌过夜；第二天用移液器吸取菌液，用MH培养基稀释成1
×
105CFU/ml，30min内接种。
[0042]3.最低抑菌浓度(MIC)的测定
[0043]在96孔板中总共分为12组，每组3个复孔，200ul无菌蒸馏水封闭边缘。第1～10组每组各孔依次加入稀释后的药物溶液100ul和105cfu/ml新鲜菌液100ul，第11组毎孔加入无菌MH肉汤100ul和105cfu/ml新鲜菌液100ul，作为阴性对照。第12组各孔分别加无菌MH肉汤100ul及蒸馏水100本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种复合抗菌剂，其特征在于，包括以下质量份的组分：0.05～1.6份乳酸链球菌素和1.6～51.2份盐酸小檗碱。2.根据权利要求1所述的复合抗菌剂，其特征在于，包括以下质量份的组分：0.1～0.4份乳酸链球菌素、6.4～12.8份盐酸小檗碱。3.一种权利要求1或2所述的复合抗菌剂的应用，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：李高峰，许素琪，丁卫，
申请(专利权)人：湖南省人民医院湖南师范大学附属第一医院，
类型：发明
国别省市：