【技术实现步骤摘要】
肿瘤细胞特有修饰多肽/蛋白的制备方法、抗体及肿瘤诊疗方法
[0001]本申请涉及生物基因工程
，具体而言，涉及一种肿瘤细胞特有修饰多肽/蛋白的制备方法、抗体及肿瘤诊疗方法。
技术介绍
[0002]大部分肿瘤目前仍是无法治愈，就在于没有找到肿瘤的特有抗原。目前发现的肿瘤标记物种类多，部分运用于临床进行诊断。但这些抗原不仅存在于肿瘤细胞，也存在于正常细胞，所以诊断只有参考价值，而化疗及放疗则因没有发现肿瘤细胞特有抗原不能精确定位而将正常细胞与肿瘤细胞一起毁灭。
[0003]根据肿瘤的特点，经10年研究，创立了肿瘤发病机制理论。理论核心就是肿瘤发病是由蛋白质发生新的修饰基团。这个新修饰基团理论可以解释肿瘤发生，代谢特点，转移，钙化，不死，免疫逃避等。
[0004]根据该理论，在红外光谱上发现只有肿瘤细胞有这个新修饰基团，正常细胞无该新修饰基团。进一步质谱，证实有该修饰基团，并且找到发生修饰的多肽及蛋白，根据蛋白的功能，完全能够解释肿瘤发生，代谢特点，为何转移，为何肿瘤发生免疫逃避等。
[0005]通过...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种肿瘤细胞特有修饰多肽/蛋白的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：从肿瘤组织中提取得到细胞膜蛋白质；采用蛋白质酶解法，对所述细胞膜蛋白质进行酶解，获取目的多肽；对所述目的多肽采用强阴离子交换层析方法进行富集，得到富集后的目的多肽；对富集后的目的多肽进行质谱分析、鉴定，明确有无目的修饰基团；根据修饰类型及修饰位点，并经过PD查库，明确该修饰基因的序列，得到所述肿瘤细胞特有修饰多肽/蛋白的制备方法。2.如权利要求1所述的一种肿瘤细胞特有修饰多肽/蛋白的制备方法，其特征在于，所述从肿瘤组织中提取得到细胞膜蛋白质，包括：准备肿瘤组织，将400
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500mg的肿瘤组织放置于5ml的微型离心管中，加4ml的细胞清洗液到组织中，短暂漩涡并弃掉清洗液；转移至2ml的组织碾磨器中并用剪刀将组织剪切成小块，加1ml的透化缓冲液到组织中并碾磨到形成均一的悬液；再加1ml的透化缓冲液并转移匀浆到一个新的反应管中，在持续混匀条件下在4度孵育10分钟；在16000*g，4度条件下离心15分钟沉积透化后的细胞，小心去掉含有胞浆蛋白的上清液并转移到一个新的反应管中；将沉积物重悬在1ml的增溶缓冲液中，用移液器上下抽吸以获得均质重悬液，在持续混匀条件下在4度孵育30分钟；在16000*g
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4度条件下离心15分钟，将含有可溶性膜蛋白以及膜相关蛋白的上清液转移到一个新的蛋白质溶液样品试管中，以此得到所述细胞膜蛋白质。3.如权利要求2所述的一种肿瘤细胞特有修饰多肽/蛋白的制备方法，其特征在于，所述从肿瘤组织中提取得到细胞膜蛋白质，还包括：NanoDrop OneA280紫外光测定上清液，确定所述上清液中所述细胞膜蛋白质的蛋白含量。4.如权利要求1所述的一种肿瘤细胞特有修饰多肽/蛋白的制备方法，其特征在于，所述蛋白质酶解法，采用超滤辅助样品制备方法
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FASP酶解法。5.如权利要求2所述的一种肿瘤细胞特有修饰多肽/蛋白的制备方法，其特征在于，所述采用蛋白质酶解法，对所述细胞膜蛋白质进行酶解，获取目的蛋白或者多肽，包括：将二硫苏糖醇DTT液加入上述蛋白质溶液样品试管中，得到DTT最终浓度为100mM的溶液，将试管置于沸水浴反应5min，然后放置于试管架逐渐冷却至室温；在上溶液加入200μLUAbuffer液混匀，转入到10kD超滤离心管中，高速离心(14000g，15min)，弃滤液，重复该步骤，取上清；加入100μL 50mmol/l IAAbuffer，600rpm振荡1min，室温下避光反应30min，高速离心(14000g 15min)，再次加入100μL UA buffer离心(14000g 15min)，重复该步骤两次；加入100μL 25mM NH4HCO3溶液，离心(14000g 15min)，重复该步骤两次；加入40μLTrypsinbuffer，600rpm振荡1min，37...
【专利技术属性】
技术研发人员：郭维英，
申请(专利权)人：中国科学院大学宁波华美医院，
类型：发明
国别省市：
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