一种用于级联递送药物的透明质酸纳米给药系统的制备方法技术方案

本发明专利技术公开了一种用于级联递送药物的透明质酸纳米给药系统的制备方法，以透明质酸为载体，化学连接阿霉素前药和一氧化氮前药，制备前药聚糖(HA

【技术实现步骤摘要】
一种用于级联递送药物的透明质酸纳米给药系统的制备方法


[0001]本专利技术涉及生物医药
，尤其是涉及一种用于级联递送药物的透明质酸纳米给药系统的制备方法。

技术介绍

[0002]尺寸从100到200纳米不等的数十种抗癌纳米药物，已经被批准用于临床应用或临床试验。然而，许多证据表明，纳米药物虽然可以提高药物的生物安全性，但与小分子药物制剂相比，却无法提高疗效。
[0003]纳米药物抗肿瘤效率低下的主要原因是肿瘤组织固有的病理屏障对纳米药物从表层肿瘤向深层肿瘤的扩散构成了巨大的挑战，抗肿瘤药物不能充分内化到深层肿瘤，导致疗效不理想。因此，要解决纳米药物传递效率低下的问题，必须克服一系列不利的生物障碍，特别是肿瘤组织中密集的细胞外基质和纳米药物的非靶向性肿瘤摄取。
[0004]肿瘤微环境中的细胞外基质(ECM)，尤其是致密胶原，是将纳米颗粒递送至肿瘤的第一道屏障。肿瘤组织中紧密的胶原可以提高间质流体压力，阻止纳米颗粒的深度渗透。内源性分子一氧化氮(NO)是一种自由基，可与超氧阴离子反应形成更强大的氧化剂过氧亚硝酸盐(RNS)，以促进胶原降解，有望有效提高纳米药物在肿瘤部位的渗透性。
[0005]此外，肿瘤细胞对纳米药物的低摄取是药物递送的第二个障碍。主动靶向策略可以通过纳米颗粒上的配体和肿瘤细胞上的受体之间的特异性识别来增强药物递送系统的肿瘤摄取。CD44是各种癌细胞膜上的特异性受体，与透明质酸(HA)有很强的亲和力，保证了纳米颗粒的肿瘤吸收效率。因此，为了最终提高纳米颗粒的内化效率，结合肿瘤组织的深度渗透和增强肿瘤细胞对纳米颗粒的吸收的策略将能提高抗肿瘤治疗疗效。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是提供一种用于级联递送药物的透明质酸纳米给药系统的制备方法，解决了上述
技术介绍
中纳米药物输送效率低下的问题。
[0007]为实现上述目的，本专利技术提供了一种用于级联递送药物的透明质酸纳米给药系统的制备方法，包括如下步骤：
[0008]S1、顺式乌头酸酐
‑
阿霉素(CAD)的制备：将盐酸阿霉素溶于去离子水中并冰浴，将顺式乌头酸酐溶于1,4
‑
二氧六环中，并在搅拌情况下将其缓慢加入盐酸阿霉素溶液中，然后缓慢加入浓度0.1～1M的氢氧化钠溶液；调节上述混合溶液的pH值至8.5～9.0，之后冰浴15～30min，再将pH值调整到7.0并搅拌20～40min，在室温下反应24小时后，向混合溶液中缓慢加入浓度为0.5～1.5M的冰盐酸，直到出现重沉淀，将混合物在冰上静置0.5～2h后10000rpm离心8～15min，收集沉淀并冻干，得到顺式乌头酸酐
‑
阿霉素；
[0009]S2、一氧化氮前药(alkynyl
‑
JS
‑
K)的制备：将JS
‑
K{O2‑
(2,4
‑
dinitropheny l)
‑1‑
[(4
‑
ethoxycarbonyl)piperazin
‑1‑
yl]diazen
‑1‑
ium
‑
1,2
‑
diolate}加入二氯甲烷中搅拌形成悬浊液，冰浴使悬浊液温度降至0℃后加入三乙醇胺，并搅拌至固体完全溶解，保持0℃
条件下缓慢加入氯甲酸丙炔酸酯，冰浴搅拌反应1～2h至反应完全，得到反应液；向上述反应液中加入二氯甲烷稀释，然后用10％柠檬酸洗，水相用二氯甲烷提取一次后合并有机相，无水Na2SO4干燥、过滤、旋蒸得粗品，粗品柱纯化得淡黄色固体产物alkynyl
‑
JS
‑
K；
[0010]S3、HA
‑
Az
‑
Cys的制备：将透明质酸钠(HA)溶解在去离子水中，充分搅拌至透明质酸钠完全溶解，再加入1
‑
(3
‑
二甲氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N
‑
羟基琥珀酰亚胺(NHS)反应30分钟，之后加入3
‑
叠氮丙基胺(Az)反应24小时，随后加入胱胺盐酸盐(Cys)反应24小时；将溶液装入截留分子量为3500Da的透析袋中，用去离子水透析3天，然后冻干得HA
‑
Az
‑
Cys；
[0011]S4、HA
‑
DOX
‑
JS
‑
K的制备：将所述步骤S3中制备的HA
‑
Az
‑
Cys溶解在去离子水中，将所述步骤S1中制备的顺式乌头酸酐
‑
阿霉素溶解在二甲基甲酰胺中，之后加入到HA
‑
Az
‑
Cys溶液中，然后向溶液中加入1
‑
(3
‑
二甲氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N
‑
羟基琥珀酰亚胺(NHS)，在室温下搅拌24～48h，将溶液装入截留分子量为3500～8000Da的透析袋中，用去离子水透析3天后冻干得HA
‑
DOX；
[0012]将HA
‑
DOX溶解在去离子水中，将所述步骤S2中制备的一氧化氮前药溶于四氢呋喃后加入到HA
‑
DOX溶液中，然后向溶液中加入五水硫酸铜和抗坏血酸钠，在氮气保护下室温反应24～48h，将混合物装入截留分子量为3500～8000Da的透析袋中，用去离子水透析3天后冻干得HA
‑
DOX
‑
JS
‑
K；
[0013]S5、制备HA
‑
DOX
‑
JS
‑
K NPs：将所述步骤S4中制备的HA
‑
DOX
‑
JS
‑
K溶解在去离子水中，然后在室温下搅拌24～48h；HA
‑
DOX
‑
JS
‑
K的亲疏水作用自组装为粒径100～400nm的纳米粒子，随后用0.45μm过滤器过滤去除杂质，得到纯净的HA
‑
DOX
‑
JS
‑
K NPs。
[0014]优选的，所述步骤S1中，每60mL去离子水中加入100mg盐酸阿霉素，每1mL1,4
‑
二氧六环加入0.1mmol顺式乌头酸酐，所述盐酸阿霉素和顺式乌头酸酐的摩尔比为1:(1～2)。
[0015]优选的，所述步骤S2中，每100mL二氯甲烷加入1.095gJS
‑
K，所述JS
‑
K和氯甲酸丙炔酸酯的摩尔比为1:(1～2)。
[0016]优选的，所述步骤S3中，所述透明质酸钠的分子量为4～20万，每50mL去离子水加入300mg透明质酸钠。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于级联递送药物的透明质酸纳米给药系统的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：S1、顺式乌头酸酐
‑
阿霉素(CAD)的制备：将盐酸阿霉素溶于去离子水中并冰浴，将顺式乌头酸酐溶于1,4
‑
二氧六环中，并在搅拌情况下将其缓慢加入盐酸阿霉素溶液中，然后缓慢加入浓度0.1～1M的氢氧化钠溶液；调节上述混合溶液的pH值至8.5～9.0，之后冰浴15～30min，再将pH值调整到7.0并搅拌20～40min，在室温下反应24小时后，向混合溶液中缓慢加入浓度为0.5～1.5M的冰盐酸，直到出现重沉淀，将混合物在冰上静置0.5～2h后10000rpm离心8～15min，收集沉淀并冻干，得到顺式乌头酸酐
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阿霉素；S2、一氧化氮前药(alkynyl
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JS
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K)的制备：将JS
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K{O2‑
(2,4
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dinitropheny l)
‑1‑
[(4
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ethoxycarbonyl)piperazin
‑1‑
yl]diazen
‑1‑
ium
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1,2
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diolate}加入二氯甲烷中搅拌形成悬浊液，冰浴使悬浊液温度降至0℃后加入三乙醇胺，并搅拌至固体完全溶解，保持0℃条件下缓慢加入氯甲酸丙炔酸酯，冰浴搅拌反应1～2h至反应完全，得到反应液；向上述反应液中加入二氯甲烷稀释，然后用10％柠檬酸洗，水相用二氯甲烷提取一次后合并有机相，无水Na2SO4干燥、过滤、旋蒸得粗品，粗品柱纯化得淡黄色固体产物alkynyl
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JS
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K；S3、HA
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Az
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Cys的制备：将透明质酸钠(HA)溶解在去离子水中，充分搅拌至透明质酸钠完全溶解，再加入1
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(3
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二甲氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N
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羟基琥珀酰亚胺(NHS)反应30分钟，之后加入3
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叠氮丙基胺(Az)反应24小时，随后加入胱胺盐酸盐(Cys)反应24小时；将溶液装入截留分子量为3500Da的透析袋中，用去离子水透析3天，然后冻干得HA
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Az
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Cys；S4、HA
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DOX
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JS
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K的制备：将所述步骤S3中制备的HA
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Az
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Cys溶解在去离子水中，将所述步骤S1中制备的顺式乌头酸酐
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阿霉素溶解在二甲基甲酰胺中，之后加入到HA
‑
Az
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Cys溶液中，然后向溶液中加入1
‑
(3
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二甲氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N
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羟基琥珀酰亚胺(NHS)，在室温下搅拌24～48h，将溶液装入截留分子量为3500～8000Da的透析袋中，用去离子水透析3天后冻干得HA
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DOX；将HA
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DOX溶解在去离子水中，将所述步骤S2中制备的一氧化氮前药溶于四氢呋喃后加入到HA
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DOX溶液中，然后向溶液中加入五水硫酸铜和抗坏血酸钠，在氮气保护下室温反应24～48h，将混合物装入截留分子量为3500～8000Da的透析袋中，用去离子水透析3天后冻干得HA
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【专利技术属性】
技术研发人员：张计敏，邓梅桂，赵鹏，张宇，陈小爱，
申请(专利权)人：河北工业大学，
类型：发明
国别省市：