一种地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌混合发酵的方法技术

本发明专利技术提出了一种地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌混合发酵的方法，其特征在于，具体过程如下：地衣芽孢杆菌菌落与枯草芽孢杆菌菌落经混合培养后，所得菌种置于Landy液体培养基中完成发酵过程，发酵时间为24

【技术实现步骤摘要】
一种地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌混合发酵的方法


[0001]本专利技术涉及微生物发酵工程
，尤其涉及一种地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌混合发酵的方法。

技术介绍

[0002]上世纪40
‑
70年代，抗生素一直是临床抗感染的主要药物，但随着抗生素滥用，出现了越来越多耐药株和药物残留问题，对动物和人类健康造成极大威胁。为了解决这一问题开发安全无害，环保健康、性能稳定的替抗产品已成为人们关注的热点。
[0003]研究发现，通过动植物基因编码或人工合成的抗菌肽可作为潜在抗生素，它拥有广谱抗菌活性，强碱性和热稳定性，且不易产生耐药性。但多数抗菌肽存在一些缺点，通过化学合成的抗菌肽，分子数量大，序列长，成本高，价格昂贵。基因工程方法可大量合成抗菌肽，但是目前还存在技术上问题，比如易受蛋白酶攻击，表达产物对宿主细胞有毒性，在应用中可能存在安全问题等。因此，人们开始研究另一种替抗产品抗菌脂肽。
[0004]抗菌脂肽是芽孢杆菌属不同菌株代谢产生的脂肽，它是两亲性化物质，比抗菌肽有更好的抗菌效果，分子小，序列短，有效降低成本，且芽孢杆菌属的代谢产物脂肽对多种细菌有好的抑菌效果。

技术实现思路

[0005]本专利技术要解决的技术问题是克服现有技术存在的缺陷，本专利技术提出了一种地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌混合发酵的方法，通过地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌混合发酵产生替抗物质，为开发替抗药物的选择提供了空间。
[0006]为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是：一种地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌混合发酵的方法，具体过程如下：
[0007]地衣芽孢杆菌菌落与枯草芽孢杆菌菌落经混合培养后，所得菌种置于Landy液体培养基中完成发酵过程，发酵时间为24
‑
72h，发酵温度为30
‑
37℃；
[0008]所述Landy培养基以质量百分比计，包括酵母粉0.01％
‑
1％，葡萄糖0.5％
‑
5％，谷氨酸钠0.01％
‑
2％，MgSO40.001％
‑
1％，KCl 0.001％
‑
1％，KH2PO40.01％
‑
2％，FeSO40.001％
‑
1％，MnSO40.001％
‑
1％，CuSO40.001％
‑
1％，余量为水。
[0009]进一步地，所述地衣芽孢杆菌菌落与枯草芽孢杆菌菌落于10
‑
100ml LB液体培养基中完成混合培养过程，于混合培养过程之中，置于30
‑
37℃摇床中，摇床转速为150
‑
250r/min。
[0010]进一步地，所述LB培养基以质量分数计，包括酵母粉0.1％
‑
2％，胰蛋白胨0.1％
‑
5％，NaCL0.1％
‑
2％，余量为水；所述LB液体培养基pH为7.3。
[0011]进一步地，所述菌种的接种量为1
‑
10％。
[0012]进一步地，所述Landy液体培养基pH为7.0。
[0013]进一步地，所述地衣芽孢杆菌菌落或枯草芽孢杆菌菌落自固体培养基中完成扩增
过程以获得单菌落，培养过程为24h。
[0014]进一步地，所述固体培养基以质量分数计，包括酵母粉0.1％
‑
2％，胰蛋白胨0.1％
‑
5％，NaCL0.1％
‑
2％，琼脂粉0.1％
‑
4％，余量为水；所述固体培养基pH为7.3。
[0015]与现有技术相比，本专利技术的有益效果包括：通过地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌混合发酵产生替抗物质，对革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌有很好的抑菌效果，为新型替抗产品提供了新思路。
附图说明
[0016]参照附图来说明本专利技术的公开内容。应当了解，附图仅仅用于说明目的，而并非意在对本专利技术的保护范围构成限制。在附图中，相同的附图标记用于指代相同的部件。其中：
[0017]图1示意性显示了展现了地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌混合发酵产物对金黄色葡萄球菌抑菌试验结果。
具体实施方式
[0018]容易理解，根据本专利技术的技术方案，在不变更本专利技术实质精神下，本领域的一般技术人员可以提出可相互替换的多种结构方式以及实现方式。因此，以下具体实施方式以及附图仅是对本专利技术的技术方案的示例性说明，而不应当视为本专利技术的全部或者视为对本专利技术技术方案的限定或限制。
[0019]一种地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌混合发酵的方法，包括如下步骤：
[0020]S1、将地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌接种于固体培养基中，放在培养箱中24h，获得单菌落。
[0021]S2、将S1所述单菌落接种于装有10
‑
100mlLB液体培养基中，置于30
‑
37℃摇床中，摇床转速150
‑
250r/min。
[0022]S3、将S2经液体培养基培养后的所述菌种接种于Landy液体培养基中进行发酵，，接种量为1％
‑
10％，发酵时间24
‑
72h，发酵温度30
‑
37℃。
[0023]上述固体培养基配方包括以下重量百分比的原料：酵母粉0.1％
‑
2％，胰蛋白胨0.1％
‑
5％，NaCL0.1％
‑
2％，琼脂粉0.1％
‑
4％，调pH7.3，余量为水。
[0024]上述液体培养基配方包括以下重量百分比的原料：酵母粉0.1％
‑
2％，胰蛋白胨0.1％
‑
5％，NaCL0.1％
‑
2％，调pH7.3，余量为水。
[0025]上述Landy液体培养基配方包括以下重量百分比的原料：酵母粉0.01％
‑
1％，葡萄糖0.5％
‑
5％，谷氨酸钠0.01％
‑
2％，MgSO40.001％
‑
1％，KCl 0.001％
‑
1％，KH2PO40.01％
‑
2％，FeSO40.001％
‑
1％，MnSO40.001％
‑
1％，CuSO40.001％
‑
1％，调pH7.0，余量为水。
[0026]以下结合实施例对于本申请的技术效果作进一步的说明。
[0027]基于前述地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌混合发酵的方法对于地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌进行混合发酵，并选取金黄色葡萄球菌为指示菌，将金黄色葡萄球菌混于LB固体培养基中，待培养基干后，向培养基中吸管加样5
‑
10μL，放入37℃培养箱，观察抑菌圈大小，基于图1中所展现的内容，可知本专利技术地衣芽孢杆菌和枯本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌混合发酵的方法，其特征在于，具体过程如下：地衣芽孢杆菌菌落与枯草芽孢杆菌菌落经混合培养后，所得菌种置于Landy液体培养基中完成发酵过程，发酵时间为24
‑
72h，发酵温度为30
‑
37℃；所述Landy培养基以质量百分比计，包括酵母粉0.01％
‑
1％，葡萄糖0.5％
‑
5％，谷氨酸钠0.01％
‑
2％，MgSO40.001％
‑
1％，KCl 0.001％
‑
1％，KH2PO40.01％
‑
2％，FeSO40.001％
‑
1％，MnSO40.001％
‑
1％，CuSO40.001％
‑
1％，余量为水。2.根据权利要求1所述的地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌混合发酵的方法，其特征在于，所述地衣芽孢杆菌菌落与枯草芽孢杆菌菌落于10
‑
100ml LB液体培养基中完成混合培养过程，于混合培养过程之中，置于30
‑
37℃摇床中，摇床转速为150
‑...

【专利技术属性】
技术研发人员：张慧，朱佑民，金玉叶，
申请(专利权)人：上海国龙生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：