一种牡丹花粉蛋白多肽及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种牡丹花粉蛋白多肽及其制备方法与应用，所述牡丹花粉蛋白多肽的制备方法为：将牡丹花粉破壁，提取粗蛋白，加入地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌进行发酵、干燥，得到牡丹花粉蛋白多肽。本发明专利技术中采用温差和超声复合破壁的方式，提高了牡丹花粉的破壁率，便于有效提取牡丹花粉蛋白，采用地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌联合发酵的形式，使得牡丹花粉蛋白多肽纯度高。采用本发明专利技术中的方法制备得到的牡丹花粉蛋白多肽可用于制备降血压。丹花粉蛋白多肽可用于制备降血压。

【技术实现步骤摘要】
一种牡丹花粉蛋白多肽及其制备方法与应用


[0001]本专利技术涉及花粉发酵
，具体涉及一种牡丹花粉蛋白多肽及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]花粉的处理方法包括机械法，酶解法和发酵法。其中，机械法，但该方法过程激烈，对设备要求高。酶解法虽然过程简单，但需要严格控制反应条件。发酵法对花粉进行处理，既能做到抑菌、破壁，又能脱敏，不破坏花粉中的营养成分，但现有技术中，采用发酵法对牡丹花粉进行处理时，往往存在牡丹蛋白多肽的纯度不高的问题。

技术实现思路

[0003]针对上述现有技术，本专利技术的目的是提供一种牡丹花粉蛋白多肽及其制备方法与应用。
[0004]为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术的第一方面，提供了一种牡丹花粉蛋白多肽的制备方法，包括以下步骤：（1）将枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌接种于牡丹花粉蛋白发酵培养液中，30~40℃下发酵9~18h，待发酵结束后，在沸水浴中灭菌；（2）将灭菌后的牡丹花粉蛋白发酵培养液离心，取上清液，过滤，取滤液进行干燥，即得牡丹花粉蛋白多肽；优选的，步骤（1）中，将枯草芽孢杆菌种子液与地衣芽孢杆菌种子液等体积混合后，得混合种子液，将混合种子液接种于牡丹花粉蛋白发酵培养液中。
[0005]进一步优选的，混合种子液的接种量为牡丹花粉蛋白发酵培养液体积的2%~3%。
[0006]进一步优选的，混合种子液中，枯草芽孢杆菌的活菌数为1.6
×
108~1.8
×
108cfu/mL，地衣芽孢杆菌的活菌数为2.0
×
108~2.2
×
108cfu/mL。
[0007]优选的，步骤（2）中，离心转速为6000~8000 r/min，离心时间为10~20min。
[0008]优选的，步骤（2）中，干燥方法为喷雾干燥或真空冷冻干燥。
[0009]进一步优选的，喷雾干燥条件为0.08
‑
0.2个大气压、70
‑
130℃；真空冷冻干燥条件为
‑
55~
ꢀ‑
40℃。
[0010]优选的，步骤（2）中，过滤方法为：采用0.45μm滤膜过滤，然后以10kDa超滤膜超滤。
[0011]优选的，步骤（1）中，所述牡丹花粉蛋白发酵培养液由以下重量份原料组成：8~10份牡丹花粉蛋白、0.2~0.3份葡萄糖、0.5~0.7份氯化钠、0.01~0.02份樟脑磺酸和160~180份蒸馏水。
[0012]进一步优选的，所述牡丹花粉蛋白由如下方法制备而成：（A）将牡丹花粉粉碎、冷冻后，加入热水，搅拌，经超声处理后，得牡丹花粉溶液；（B）将牡丹花粉溶液搅拌、离心后，收集上清液，向上清液中加入硫酸铵固体，搅拌离心，收集沉淀，再向沉淀中加入磷酸盐缓冲液溶解，超滤，得牡丹花粉粗蛋白溶液；
（C）将牡丹花粉粗蛋白溶液于真空冷冻干燥，得牡丹花粉蛋白。
[0013]优选的，步骤（A）中，冷冻温度为
‑
30℃~
ꢀ‑
60℃，冷冻时间为12
‑
24h。
[0014]优选的，步骤（A）中，超声强度为200~600w，超声时间为10~40min。
[0015]优选的，步骤（A）中，牡丹花粉与热水的料液比为1g:（10
‑
30）mL。
[0016]优选的，步骤（B）中，所述搅拌温度为30~50℃，搅拌时间为4~6h。
[0017]优选的，步骤（B）中，离心转速为6000~8000r/min，离心时间为10~20min。
[0018]优选的，步骤（B）中，磷酸盐缓冲液的pH为5.0~7.0。
[0019]优选的，步骤（B）中，超滤采用100KDa的超滤膜。
[0020]优选的，步骤（C）中，真空冷冻干燥的温度为
‑
60℃~
ꢀ‑
40℃，真空冷冻干燥时间为6~8h。
[0021]本专利技术的第二方面，提供了一种牡丹花粉蛋白多肽。
[0022]本专利技术的第三方面，提供了一种牡丹花粉蛋白多肽在制备降血压产品中的应用。
[0023]本专利技术的有益效果：本专利技术采用将牡丹花粉进行破壁处理后，提取牡丹花粉粗蛋白、发酵酶解牡丹花粉粗蛋白，干燥得到牡丹花粉蛋白多肽。在发酵过程中，采用枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌混合发酵的形式,有效的加快了粗蛋白酶解形成多肽的过程，同时，还能保证牡丹花粉蛋白多肽的提取率。
[0024]其中，枯草芽孢杆菌能发酵产生中性蛋白酶，地衣芽胞杆菌则能通过发酵产生碱性蛋白酶，在中性蛋白酶和碱性蛋白酶的协同增强作用下，能使牡丹花粉粗蛋白有效的转化形成多肽。同时，本专利技术采用了温差
‑
超声的复合破壁的方式，能有效的将牡丹花粉中的蛋白质与脂质、纤维素等分离开，提高了牡丹花粉的破壁率，使后续操作中更好的提取牡丹花粉蛋白。
[0025]本专利技术制备得到的牡丹花粉蛋白多肽良好的保持了其中的营养成分，将人体难吸收的物质通过发酵法转化为易消化吸收的小分子，保证快速被人体消化吸收，提供机体所需要的能量。
具体实施方式
[0026]应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属
的普通技术人员通常理解的相同含义。
[0027]为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本申请的技术方案，以下将结合具体的实施例详细说明本申请的技术方案。
[0028]本专利技术实施例中所用的试验材料均为本领域常规的试验材料，均可通过商业渠道购买得到。
[0029]具体的：地衣芽孢杆菌购于中国工业微生物菌种保藏管理中心，菌株编号为CICC 25064；枯草芽孢杆菌购于中国工业微生物菌种保藏管理中心，菌株编号为CICC 10087。
[0030]实施例1（1）将牡丹花粉置于粉碎机中进行粉碎，在
‑
30℃冷冻24h，再加入热水，其中，粉碎冷冻后的牡丹花粉与热水之间的料液比为1g：10mL，在200w的超声强度下，超声处理40min，
得牡丹花粉溶液；（2）将牡丹花粉溶液于30℃下搅拌6h，在6000r/min下离心20min，过滤，取上清液，在上清液中逐级加入硫酸铵固体，使硫酸铵饱和度依次达到20%、40%、60%和80%，每次搅拌后于6000r/min下离心20min，收集各级沉淀，向沉淀中加pH为5.0的磷酸盐缓冲溶液，以100KDa的超滤膜进行超滤，得粗蛋白溶液；（3）将粗蛋白溶液于
‑
60℃下真空干燥8h，得牡丹花粉蛋白；（4）将枯草芽孢杆菌种子液和地衣芽孢杆菌种子液等体积混合，得混合种子液，将混合种子液按牡丹花粉蛋白发酵培养液体积的2%接种于牡丹花粉蛋白发酵培养液中，于30℃，摇床转速为200r/min条件下，恒温水浴发酵20h，发酵结束后，在沸水浴中灭菌；其中，混合种子液中枯草芽孢杆菌的活菌数为1.6本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种牡丹花粉蛋白多肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌接种于牡丹花粉蛋白发酵培养液中，30~40℃下发酵9~18h，待发酵结束后，在沸水浴中灭菌；（2）将灭菌后的牡丹花粉蛋白发酵培养液离心，取上清液，过滤，取滤液进行干燥，即得牡丹花粉蛋白多肽；所述牡丹花粉蛋白发酵培养液由以下重量份的原料组成：8~10份牡丹花粉蛋白、0.2~0.3份葡萄糖、0.5~0.7份氯化钠、0.01~0.02份樟脑磺酸和160~180份蒸馏水。2.如权利要求1所述的牡丹花粉蛋白多肽的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，离心转速为6000~8000r/min，离心时间为10~20min。3.如权利要求1所述的牡丹花粉蛋白多肽的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，干燥方法为喷雾干燥或真空冷冻干燥。4.如权利要求1所述的牡丹花粉蛋白多肽的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，过滤方法为：采用0.45μm滤膜过滤，然后以10kDa超滤膜超滤。5.如权利要求1所述的牡丹花粉蛋白多肽的制备方法，其特征在于，所述牡丹花粉蛋白由如下方法制备而成：（A）将牡丹花粉粉碎、冷冻后，加入热水，搅拌，经超声处理后，得牡丹...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵海明，闫乃芳，
申请(专利权)人：山东睿鹰制药集团有限公司，
类型：发明
国别省市：