硅酸铝镁在促进冬虫夏草菌产芽生孢子中的应用制造技术

本发明专利技术公开了硅酸铝镁在促进冬虫夏草菌产芽生孢子中的应用。本发明专利技术针对人工培养虫菌结合冬虫夏草过程中如何快速得到大量感染用芽生孢子的问题，在冬虫夏草菌培养基中添加硅酸铝镁，诱导冬虫夏草菌高效产生芽生孢子，在添加1.0～5.0g/L硅酸铝镁的培养基中接入冬虫夏草菌接种母液，在芽孢收取时间内(25～45d)，添加了硅酸铝镁的培养基的产孢量比未添加组的提高了4～14倍，最适添加量在2.0～3.5g/L之间，产孢量比未添加组平均可提高10倍左右；硅酸铝镁添加还可增加芽生孢子的耐受性和保活能力，可延长收集时间45～60d。本发明专利技术能更高效获得芽生孢子，可缩短冬虫夏草人工培养的时间，节约人工培养成本。节约人工培养成本。节约人工培养成本。

【技术实现步骤摘要】
硅酸铝镁在促进冬虫夏草菌产芽生孢子中的应用


[0001]本专利技术属于真菌培养
，具体涉及硅酸铝镁在促进冬虫夏草菌产芽生孢子中的应用。

技术介绍

[0002]冬虫夏草是冬虫夏草菌侵染寄主昆虫
‑
蝙蝠蛾科Hepialidae幼虫，在合适环境下形成的幼虫尸体与真菌子座的复合形态结构。由于良好的药理药效作用，冬虫夏草被称为“中药三大宝”(人参、鹿茸和冬虫夏草)之一。冬虫夏草主要产于海拔3000米以上的青藏高原，生长周期长，生存条件恶劣，因此，野生资源极为有限。随着“亚健康”人群的扩大，冬虫夏草日益受到人们的青睐；而过度采挖和气候变暖导致野生冬虫夏草处于濒危。唯一选择是进行冬虫夏草人工培育。
[0003]我国自20世纪70年代后期就开始冬虫夏草菌人工培养技术，通过对冬虫夏草菌无性型菌丝体的发酵培养已开发生产出多种替代产品，如冬虫夏草菌发酵菌丝体制成的“百令胶囊”已作为国家重要一类新药。另外，通过模拟青藏高原生态环境，在低海拔环境，通过冬虫夏草菌侵染蝙蝠蛾幼虫人工培养冬虫夏草近年也获得成功。研究发现，冬虫夏草菌在蝙蝠蛾幼虫血腔以芽生孢子形态存在。相比体表感染，通过注射芽生孢子至蝙蝠蛾幼虫血腔，由于减少了附着蝙蝠蛾幼虫体表和穿透体壁的环节，缩短了人工培养冬虫夏草的周期，而且，注射高浓度芽生孢子可以缩短芽生孢子在蝙蝠蛾血腔内的增殖时间。因此，如何快速获得大量用于感染用的芽生孢子是冬虫夏草人工培养过程中亟待解决的问题，解决该问题有利于节约冬虫夏草人工培养成本。

技术实现思路

[0004]基于上述问题，本专利技术的目的是提供一种硅酸铝镁在促进冬虫夏草菌产芽生孢子中的应用。在冬虫夏草菌培养基中加入硅酸铝镁能提高培养液中冬虫夏草菌芽生孢子数量，并增强芽生孢子的耐受性和活性，为冬虫夏草人工培养产业提供重要的技术支撑。
[0005]本专利技术通过实验发现，在冬虫夏草菌培养基中加入硅酸铝镁可以提高冬虫夏草菌芽生孢子的数量，并增强芽生孢子的耐受性和活性。
[0006]因此，本专利技术的第一个目的是提供硅酸铝镁在促进冬虫夏草菌产芽生孢子中的应用。
[0007]优选的，所述的应用是在接种冬虫夏草菌的培养基中加入硅酸铝镁，然后进行培养。
[0008]优选的，所述的硅酸铝镁在培养基中的浓度为1.0～5.0g/L。
[0009]优选的，所述的硅酸铝镁在培养基中的浓度为2.0～3.5g/L。
[0010]本专利技术的第二个目的是提供硅酸铝镁在提高冬虫夏草菌芽生孢子耐受性和活性中的应用。
[0011]本专利技术的第三个目的是提供硅酸铝镁在制备提高冬虫夏草菌芽生孢子数量，或冬
虫夏草菌芽生孢子耐受性和活性的制剂中的应用。
[0012]本专利技术的第四个目的是提供一种提高冬虫夏草菌芽生孢子数量，或冬虫夏草菌芽生孢子耐受性和活性的方法，是将冬虫夏草菌接种至添加有硅酸铝镁的培养基中培养。
[0013]优选的，所述的硅酸铝镁在液体培养基中的浓度为1.0～5.0g/L。
[0014]优选的，所述的液体培养基为PMG培养基，其配方为：每升培养基中含有去皮土豆200g、麦芽糖20g、蛋白胨10g、磷酸二氢钾3g、硫酸镁1.5g、大蜡螟5g、维生素B1 0.02g，溶剂为水。
[0015]优选的，所述的培养，其培养条件为：14
±
1℃，120r/min，黑暗条件。
[0016]本专利技术针对人工培养虫菌结合冬虫夏草过程中如何快速得到大量感染用芽生孢子的问题，在冬虫夏草菌培养基中添加硅酸铝镁，诱导冬虫夏草菌高效产生芽生孢子，在添加1.0～5.0g/L硅酸铝镁的培养基中接入冬虫夏草菌接种母液，在规定芽孢收取时间内(25～45d)，添加了硅酸铝镁的培养基的产孢量比未添加对照组的提高了4～14倍，平均提高8倍左右，最适添加量在2.0～3.5g/L之间，产孢量比未添加对照组平均可提高10倍左右；硅酸铝镁添加还可增加芽生孢子的耐受性和保活能力，可延长收集时间45～60d。本专利技术能更高效获得芽生孢子用于注射感染蝙蝠蛾人工培养虫菌结合冬虫夏草，缩短冬虫夏草人工培养的时间，节约人工培养成本。
附图说明
[0017]图1为不同硅酸铝镁的添加量对产孢量的影响关系曲线图。
[0018]图2为添加2.0、3.5和5.0g/L硅酸铝镁培养55d取样检测芽孢结果图。
[0019]图3为添加2.0、3.5g/L硅酸铝镁培养和未添加硅酸铝镁(CK)培养在电镜检测下的芽孢对比图。
具体实施方式
[0020]以下结合具体实施例，对本专利技术的具体实施方式进行详细描述，这些实施例用于理解而不是限制本专利技术的范围。
[0021]实施例1
[0022]1、方法
[0023](1)培养基配制：配制PMG培养基(取去皮土豆200g、麦芽糖20g、蛋白胨10g、磷酸二氢钾3g、硫酸镁1.5g、大蜡螟5g、维生素B1 0.02g，溶于1000mL纯净水，搅拌溶解，高温灭菌，冷却，即得)，在培养基中分别添加终浓度为0、2.0、3.5、5.0g/L硅酸铝镁，配制含有不同硅酸铝镁的添加量的培养基，在高压灭菌锅121℃灭菌30min，将灭完菌的培养基放置与无菌冷却室至室温以下(20℃)，然后分装至三角瓶，每瓶装液量为150mL。
[0024](2)接种及培养：取收集好的冬虫夏草芽孢液(106个/mL，即中国被毛孢芽生孢子液)，在超净工作台中操作，使用移液枪，按照接种量为500μL/瓶，吸取500μL的芽孢液注射入步骤(1)的三角瓶培养基中，封口，全程保持无菌操作。接种完成后放入摇床上黑暗培养，转速120r/min，温度14
±
1℃。
[0025](3)取样、计数及检测：培养至20d后进行取样观察，每5d取样一次，时间梯度设置为20d、25d、30d、35d、40d、45d、50d、55d、60d九个梯度。每瓶每次取样1.5mL，每次取完样后，
培养瓶继续培养。将样品进行芽孢计数，计数在显微镜下进行，采用血球计数板进行计数，每次计数点液量为10μL，每个样计数2次。
[0026](4)收集及芽孢活性检测：在培养至30d时，进行芽孢收集，然后对收集的芽孢液进行计数，计数完成后，将芽孢液稀释至106层级，最后用移液枪吸取稀释后的芽孢液点样至G5培养基(取去皮土豆200g、葡萄糖20g、蛋白胨10g、磷酸二氢钾3g、硫酸镁1.5g、大蜡螟5g、维生素B1 0.02g、琼脂16g，溶于1000mL纯净水，搅拌溶解，高温灭菌，冷却，即得)上进行活性检测试验，为避免点样之间的差异性，选择每个平皿点样20μL，完成后放入14
±
1℃的环境中培养，并定时进行试验观察。
[0027](5)对每一次的观察(取样计数、收集计数、萌发情况)做好详细记录。
[0028]试验重复3次，每个浓度每次接种11瓶，其中3瓶作为取样瓶，另外8瓶作为每个时间点的收集用瓶。选用不含硅酸铝镁的培养基作为CK。最后，进行数据分析，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.硅酸铝镁在促进冬虫夏草菌产芽生孢子中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的应用是在接种冬虫夏草菌的培养基中加入硅酸铝镁，然后进行培养。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的硅酸铝镁在培养基中的浓度为1.0～5.0g/L。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的硅酸铝镁在培养基中的浓度为2.0～3.5g/L。5.硅酸铝镁在提高冬虫夏草菌芽生孢子耐受性和活性中的应用。6.硅酸铝镁在制备提高冬虫夏草菌芽生孢子数量和/或芽生孢子耐受性和活性的制剂中的应用。7.一种提高冬虫夏草菌芽生孢子数量和/或芽生孢子耐受...

【专利技术属性】
技术研发人员：周雯，熊佳福，王锦锋，
申请(专利权)人：力源新资源开发广东有限公司，
类型：发明
国别省市：