表达造血生长因子受体的NK细胞或T细胞及用于治疗癌症的用途制造技术

提供了表达造血生长因子受体的修饰的自然杀伤(NK)或T细胞。在一些实施方案中，NK细胞或T细胞表达血小板生成素受体或促红细胞生成素受体。还提供了治疗患有癌症的受试者的方法，该方法包括向受试者施用修饰的NK细胞或T细胞联合血小板生成素受体激动剂或促红细胞生成素受体激动剂，以及在一些实例中，白介素

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】表达造血生长因子受体的NK细胞或T细胞及用于治疗癌症的用途
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于2020年2月24日提交的美国临时申请号62/980,854的权益，其通过引用以其全文并入本文。


[0003]本公开涉及表达造血生长因子受体的修饰的自然杀伤细胞或T细胞及其使用方法。

技术介绍

[0004]目前存在许多不同的用于利用自然杀伤(NK)细胞作为免疫疗法来治疗癌症的临床前和临床策略。NK细胞不需要预先致敏，并且可以以不依赖于抗原的方式诱导肿瘤细胞毒性而不引起移植物抗宿主病，这使得NK细胞成为有吸引力的基于细胞的治疗选择。目前基因工程技术的最新进展为修饰NK细胞以增强其治疗癌症的疗效提供了可能性。在这方面，一些临床前报告表明，通过将NK细胞工程化为靶向特定肿瘤抗原，可以提高NK细胞的抗肿瘤细胞毒性。基于NK细胞的免疫疗法的一个显著限制是它们对细胞因子(例如白介素(IL)
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2、IL
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15或IL
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21)的依赖，这些细胞因子增强NK细胞在体外和体内的持久性和扩增。目前，大多数评价人体中NK细胞疗法的临床试验均利用过继细胞转移后外源性IL
‑
2或IL
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15施用(Childs和Carlsten,Nat.Rev.Drug Discov.14:487
‑
498,2015)。虽然IL
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2促进NK细胞的激活、增殖和细胞毒性，但它也具有诱导调节性T细胞(Treg)扩增的非期望作用，这可能抑制免疫应答。尽管IL
‑
15在不扩增Treg的情况下提高NK细胞稳态、扩增和细胞溶解能力(Hitchcock和Kaushansky,Br.J.Maematol.165:259
‑
268,2014；Rautela和Huntington,Curr.Opin.Immunol.44:1
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6,2017；Macais等人，Nat.Immunol.15:749
‑
757,2014)，但它具有与IL
‑
2观察到的相似细胞因子相关毒性，包括毛细血管渗漏综合征、低血压、发热和寒颤。
[0005]研究人员最近探索了多种方法来提高体内NK细胞的持久性，从而最大限度地减少毒性并减少或避免外源性细胞因子施用的需要。NK细胞系的基因修饰以表达IL
‑
2或内质网保留的IL
‑
2已显示导致自主NK细胞增殖(Nagashima等人，Blood 91:3850
‑
3861,1998；Konstantinidis et al.,Exp.Hematol.33:159
‑
164,2005)。同样，在不存在外源性细胞因子的情况下，NK细胞上表达IL
‑
15或膜结合的IL
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15可以增强其增殖和细胞毒性(Zhang等人，Haematologica 89:338
‑
347,2004；Sahm等人，Cancer Immunol.Immunother.61:1451
‑
1461,2012；Imamura等人，Blood 124:1081
‑
1088,2014)。最近，Liu等人证明，源自脐带血的NK细胞经工程化以表达抗CD19 CAR、IL
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15和自杀基因，具有提高的抗肿瘤活性和长期持久性(Leukemia 32:520
‑
531,2018)。此外，与野生型IL
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15相比，IL
‑
15超激动剂复合物(称为ALT
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803)在体内表现出更长半衰期和更佳免疫NK细胞激活(Xu等人，Cancer Res.73:3075
‑
3086,2013；Romee等人，Blood 131:2515
‑
2527,2018)。

技术实现思路

[0006]仍然需要提高NK细胞的存活、增殖和细胞毒性，同时减少非期望作用或不良作用。本文公开了表达造血生长因子受体的修饰的免疫细胞(例如NK细胞或T细胞)，以及它们的使用方法。
[0007]在一些实施方案中，提供了表达异源血小板生成素受体(c
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MPL)蛋白或异源促红细胞生成素受体(EPOR)蛋白的修饰的NK细胞或T细胞。在特定实例中，c
‑
MPL或EPOR蛋白是人蛋白。还提供了包括编码c
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MPL蛋白或EPOR蛋白的核酸的修饰的NK细胞或T细胞。修饰的NK细胞或T细胞可以是人NK细胞或T细胞。在另外的实施方案中，修饰的NK细胞或T细胞进一步表达嵌合抗原受体(CAR)。
[0008]还提供了培养或扩增修饰的NK细胞或T细胞的方法。在一些实例中，在存在血小板生成素受体激动剂的情况下，培养表达c
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MPL的修饰的NK细胞或T细胞。在其他实例中，在存在促红细胞生成素受体激动剂的情况下，培养表达EPOR的修饰的NK细胞或T细胞。在一些实施方案中，在存在血小板生成素受体激动剂或促红细胞生成素受体激动剂和白介素(IL)
‑
2的情况下，培养修饰的NK细胞或T细胞。在特定实例中，IL
‑
2的量为减少量的IL
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2(“低剂量”)，在一些实例中，为约1
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50U/ml IL
‑
2(例如，约1
‑
5U/ml ml、约2
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10U/ml、约5
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15U/ml、约10
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25U/ml、约20
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40U/ml、约25
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50U/ml或约5
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25U/ml)。
[0009]还提供了治疗患有癌症的受试者的方法。在一些实例中，该方法包括向受试者施用表达异源血小板生成素受体(c
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MPL)蛋白的修饰的NK细胞或T细胞和向受试者施用c
‑
MPL激动剂(例如TPO、艾曲泊帕(eltrombopag)、阿伐曲泊帕(avatrombopag)或罗普司亭(romiplostim))。在一些实例中，该方法还包括向受试者施用IL
‑
2，例如“低剂量”IL
‑
2(例如，约0.5
‑
4百万单位/m2)。在一些实例中，该方法还包括在向受试者施用NK细胞或T细胞之前，使修饰的NK细胞或T细胞与IL
‑
2(例如，约1
‑
50U/ml IL
‑
2(例如，约1
‑
5U/ml、约2
‑
10U/ml、约5
‑
15U/ml、约10
‑
25U/ml、约20
‑
40U/ml、约25...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种修饰的自然杀伤(NK)细胞，所述修饰的NK细胞表达异源血小板生成素受体(c
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MPL)蛋白或表达异源促红细胞生成素受体(EPOR)蛋白。2.根据权利要求1所述的修饰的NK细胞，其中所述细胞表达所述c
‑
MPL蛋白。3.根据权利要求2所述的修饰的NK细胞，其中所述c
‑
MPL蛋白是人c
‑
MPL蛋白。4.根据权利要求3所述的修饰的NK细胞，其中所述人c
‑
MPL蛋白与SEQ ID NO:1的氨基酸序列具有至少95％序列同一性。5.根据权利要求4所述的修饰的NK细胞，其中所述人c
‑
MPL蛋白包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列。6.根据权利要求2至5中任一项所述的修饰的NK细胞，其中所述细胞包含编码所述c
‑
MPL蛋白的核酸分子。7.根据权利要求2至6中任一项所述的修饰的NK细胞，其中用编码所述c
‑
MPL蛋白的核酸转导或转染所述NK细胞。8.根据权利要求1至7中任一项所述的修饰的NK细胞，其中所述修饰的NK细胞进一步表达嵌合抗原受体。9.根据权利要求1所述的修饰的NK细胞，其中所述细胞表达所述EPOR蛋白。10.一种修饰的T细胞，所述修饰的T细胞表达异源促红细胞生成素受体(EPOR)蛋白。11.根据权利要求9或权利要求10所述的修饰的T细胞或NK细胞，其中所述EPOR蛋白是人EPOR蛋白。12.根据权利要求9至11中任一项所述的修饰的T细胞或NK细胞，其中所述人EPOR蛋白与SEQ ID NO:3的氨基酸序列具有至少95％序列同一性。13.根据权利要求12所述的修饰的T细胞或NK细胞，其中所述人EPOR蛋白包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列。14.根据权利要求9至13中任一项所述的修饰的T细胞或NK细胞，其中所述细胞包含编码所述EPOR蛋白的核酸分子。15.根据权利要求9至14中任一项所述的修饰的T细胞或NK细胞，其中用编码所述EPOR蛋白的核酸转导或转染所述T细胞或NK细胞。16.根据权利要求9至15中任一项所述的修饰的T细胞或NK细胞，其中所述修饰的T细胞或NK细胞进一步表达嵌合抗原受体。17.根据权利要求1至16...

【专利技术属性】
技术研发人员：R，
申请(专利权)人：美国政府由卫生和人类服务部的部长所代表，
类型：发明
国别省市：