牙髓间充质干细胞在制备治疗呼吸道瘘药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了牙髓间充质干细胞在制备治疗呼吸道瘘的药物中的应用。本发明专利技术对构建的SD大鼠气管瘘模型，系统观察了人牙髓间充质干细胞对气管瘘的损伤修复作用的疗效，并探讨瘘周局部注射和经尾静脉注射两种干细胞移植途径对瘘口组织修复及肺部炎症作用的变化，并初步探讨调控机制。根据实验结果显示，牙髓间充质干细胞对呼吸道瘘具有明显的治疗作用，促进瘘口组织修复愈合，减轻肺部炎症，促进瘘口处胶原纤维组织增生及新生血管生成。本发明专利技术为呼吸道瘘提供了一种取材方便、无伦理争议、免疫原性低而更具前景的干细胞治疗材料和策略。性低而更具前景的干细胞治疗材料和策略。性低而更具前景的干细胞治疗材料和策略。

【技术实现步骤摘要】
牙髓间充质干细胞在制备治疗呼吸道瘘药物中的应用


[0001]本专利技术属于生物医药
更具体地，涉及牙髓间充质干细胞在制备治疗呼吸道瘘药物中的应用。

技术介绍

[0002]呼吸道瘘临床病例不少，治疗棘手，病因复杂，瘘口累及部位不同，因组织修复差难愈合，感染持续存在，易形成持续瘘道；或周围组织异常增生，或形成肉芽组织，造成气道狭窄。多数患者易并发肺炎、败血症、持续脓胸、气胸、生存质量差，甚至呼吸衰竭而死亡，临床病死率高，目前尚无有效的治疗措施。内镜下介入治疗和手术修补瘘口是目前常用的治疗方法，但存在许多弊端，如经支气管镜植入各类封堵器、支架等容易发生脱落、感染、移位；外科手术创伤大、病人不能耐受、手术后易复发、并发症多等。
[0003]Prudencio J.D
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Agero在《Novel bronchoscopic treatment forbronchopleural fistula using adipose
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derived stromal cells》中公开在支气管镜下应用自体脂肪干细胞治疗支气管胸膜瘘是一种可行、安全、有效的方法。但脂肪干细胞需要抽取自体脂肪再分离，过程复杂，当异体移植时还有可能会发生排异。
[0004]人乳牙牙髓干细胞(SHED)是间充质干细胞(MSC)的一种，又叫牙髓间充质干细胞，于牙齿内部的牙髓组织中分离出的成纤维状细胞，具有自我更新、多向分化潜能以及替代、修复和加强受损的组织与器官的生物学功能，达到组织再生或修复的目的，尤其因取材方便、伦理争议少、免疫原性低而更具前景。前期研究已显示SHED在糖尿病、哮喘、肝硬化的再生与修复中发挥重要作用，但迄今为止尚未见SHED与呼吸道瘘的相关研究。

技术实现思路

[0005]本专利技术要解决的技术问题是克服现有干细胞制剂治疗气管瘘中的缺陷和不足，为治疗呼吸道瘘提供一种取材方便、无伦理争议、免疫原性低而更具前景的干细胞制剂。
[0006]本专利技术的目的是提供牙髓间充质干细胞在制备治疗呼吸道瘘药物中的应用，包括促进气管瘘愈合和减轻由其引发的肺部炎症。
[0007]本专利技术另一目的是提供一种治疗呼吸道瘘患者的牙髓干细胞注射剂。
[0008]本专利技术上述目的通过以下技术方案实现：
[0009]本专利技术对构建的SD大鼠气管瘘模型，系统观察了人牙髓间充质干细胞对气管瘘的损伤修复作用的疗效，并探讨两种干细胞移植途径(瘘周局部注射和经尾静脉注射)对瘘口组织修复及肺部炎症作用的变化，并初步探讨调控机制，为呼吸道瘘提供新的治疗思路和策略。根据实验结果显示，牙髓间充质干细胞对呼吸道瘘具有明显的治疗作用，促进瘘口组织修复愈合，减轻肺部炎症，促进瘘口处胶原纤维组织增生及新生血管生成。
[0010]因此，本专利技术要求保护如下技术方案：
[0011]牙髓间充质干细胞在制备治疗呼吸道瘘药物中的应用。
[0012]具体地，所述呼吸道瘘为气管瘘。
[0013]所述药物能够促进瘘口修复、愈合，能够减轻肺部炎症，能够促进瘘口处胶原纤维组织增生，能够促进瘘口处新生血管生成。
[0014]基于此，本专利技术提供一种治疗呼吸道瘘的药物，包含牙髓间充质干细胞。
[0015]优选地，所述药物中牙髓间充质干细胞量不低于1*107个细胞。
[0016]另外，所述药物除了以牙髓间充质干细胞为主要活性成分，通常，还可根据不同剂型的需要，增加一种或多种药学上可接受的载体或辅料，制备成不同的剂型。对于本专利技术方案呼吸道瘘的治疗，优选的药物剂型为注射剂。优选的使用方式为静脉注射。
[0017]本专利技术具有以下有益效果：
[0018]本专利技术研究得到，牙髓间充质干细胞对呼吸道瘘具有明显的治疗作用，并探讨两种干细胞移植途径(瘘周局部注射和经尾静脉注射)对瘘口组织修复及肺部炎症作用的变化，更加利于指导临床用药，为呼吸道瘘提供了一种取材方便、无伦理争议、免疫原性低而更具前景的干细胞治疗材料和策略。
附图说明
[0019]图1为大鼠气管瘘模型建立示意图。
[0020]图2为瘘口的修复情况。图中，A、B与C分别为第2、3、5天体视显微镜下瘘口愈合情况；D为第3天离体瘘口大小情况；E为第3天离体瘘口大小的统计学分析。
[0021]图3为大鼠第7天瘘口组织HE及Masson染色情况，胶原纤维组织增生，新生血管生成增加。
[0022]图4为SHED在大鼠瘘口和肺部的存活情况。A为瘘口组织的免疫荧光图； B为肺部组织的免疫荧光图。
[0023]图5为SHED治疗对大鼠肺部炎症的作用。图中，A为各组肺组织病理HE染色及炎症因子IL
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1β、IL
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33和IL
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4的免疫组化图；B为Smith评分，评价肺部炎症；C,D,E分别为IL
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1β、IL
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33和IL
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4免疫组化的半定量图；F为各组大鼠肺功能检测情况。
[0024]图6为TLR4在肺组织中的表达情况。A与C为免疫组化法检测TLR4在各组肺组织中的表达情况及统计分析；B和D为蛋白免疫印迹法检测TLR4在各组肺组织中的表达情况及统计分析。
[0025]图7为HMGB1和MyD88在肺组织中的表达情况。A为蛋白免疫印迹法检测各组肺组织中MyD88和HMGB1表达情况；B与C分别表示各组肺组织中 MyD88和HMGB1的统计分析。
具体实施方式
[0026]以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本专利技术，但实施例并不对本专利技术做任何形式的限定。除非特别说明，本专利技术采用的试剂、方法和设备为本
常规试剂、方法和设备。
[0027]除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。
[0028]实验例1实验动物模型的构建
[0029]一、实验方法
[0030]1、实验动物：SD大鼠，由华南理工大学实验动物中心负责购买自斯嘉景达生物科技有限公司。
[0031]2、实验步骤：SD大鼠麻醉后，行颈部纵行切口，备皮，碘伏消毒后用组织剪剪开皮肤，钝性分离皮下组织、肌肉层后，使颈部气管充分暴露在实验视野下。然后用手术打孔器在SD大鼠气管约第4
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5气管环处造直径为1.5mm瘘口，同时密切注意查看大鼠的生命体征。
[0032]二、实验结果
[0033]成功建立SD大鼠的气管瘘模型：体视显微镜下观察，瘘口边缘光滑，直径一致(图1)。造瘘后，模型大鼠呼吸急促并伴有哮鸣音，所有大鼠均存活。
[0034]实验例2人乳牙牙髓干细胞的鉴定
[0035]一、实验材料：
[0036]人牙髓间充质干细胞(SHED)，由卡替(上海)生物技术有限公司提供，取自6
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12岁人脱落乳牙牙髓。
[0037]二、实验方法与结果
[0038]经流式细胞术及三项诱导分化实验本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.牙髓间充质干细胞在制备治疗呼吸道瘘的药物中的应用。2.根据权利要求1所述应用，特征在于，所述呼吸道瘘为气管瘘。3.根据权利要求1所述应用，特征在于，所述药物的剂型为注射剂。4.根据权利要求1所述应用，特征在于，所述药物是能够促进瘘口修复愈合的药物。5.根据权利要求1所述应用，特征在于，所述药物是能够减轻肺部炎症的药物。6.根据权利要求1所述应用，特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴健，王芳，李章紊，李军，曹婧，高洁，李中鹏，
申请(专利权)人：卡替上海生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：