测定人血浆中熊去氧胆酸及其代谢物浓度的方法技术

技术编号:35948359 阅读:72 留言:0更新日期:2022-12-14 10:39
本发明专利技术公开了一种测定人血浆中熊去氧胆酸及其代谢物浓度的方法,该方法采用蛋白沉淀法进行前处理、LC

【技术实现步骤摘要】
测定人血浆中熊去氧胆酸及其代谢物浓度的方法


[0001]本专利技术涉及医药检测
,具体涉及一种测定人血浆中熊去氧胆酸及其代谢物牛磺熊去氧胆酸、氨基葡萄糖去氧胆酸浓度的方法。

技术介绍

[0002]熊去氧胆酸(3

α,7

β

二羟基
‑5‑
β

胆酸,UDCA)是一种天然存在的胆汁酸,在人血浆中少量存在。UDCA广泛用于胆结石的溶解,用于治疗原发性胆汁性肝硬化、原发性硬化性胆管炎和慢性肝炎等胆汁淤积性肝病。在人体内,UDCA与甘氨酸或牛磺酸结合并代谢形成牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)和氨基葡萄糖去氧胆酸(GUDCA),这些物质在十二指肠处发挥它们的药理作用。因此,有必要对原药及其代谢物进行定量检测。
[0003]现有技术已经开发并公布了多种测定生物体液中胆汁酸的分析方法;但大多数现有技术不能同时分析游离胆汁酸和结合胆汁酸,或仅关注游离的胆汁酸。且熊去氧胆酸生物样品的成分复杂、分离度差,常规液液萃取或固相萃取处理,检测操作复杂、技术难度大。本本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种测定人血浆中熊去氧胆酸及其代谢物浓度的方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)样品前处理:取待测样品,加入内标工作液,涡旋;加入沉淀剂,涡旋振荡,离心;取上清液稀释,进行LC

MS/MS分析;(2)液相色谱

质谱联用检测:色谱条件:色谱柱:Gemini NX

C18 110A,3.0
×
50mm 3.0micron,Phenomenex,保护柱:Gemini C18,4
×
3.0mm,Phenomenex,USA;流动相A:2mM乙酸铵水溶液;流动相B∶2mM乙酸铵水溶液∶甲醇∶乙腈体积比为2∶20∶80;洗脱方式为梯度洗脱;质谱条件:采用ESI源,负离子MRM模式检测;(3)标准曲线制备:将标准曲线样品按步骤(1)处理,按步骤(2)采用LC

MS/MS方法检测;记录每个浓度的待测物对应的峰面积,以待测物和内标的峰面积比值为纵坐标,以待测物浓度为横坐标,制备标准曲线回归方程;(4)待测物测定:将待测血浆按步骤(1)处理,按步骤(2)采用LC

MS/MS方法检测,记录待测物对应的峰面积,将待测物的色谱峰面积与内标峰面积的比值代入获得的标准曲线回归方程,计算测定的待测物的相应浓度,并减去空白血浆中待测物浓度。2.根据权利要求1所述的测定人血浆中熊去氧胆酸及其代谢物浓度的方法,其特征在于,所述沉淀剂为甲醇;所述涡旋的时间为30s;所述涡旋振荡时间为5min;所述离心条件为2490g,10min。3.根据权利要求1所述的测定人血浆中熊去氧胆酸及其代谢物浓度的方法,其特征在于,所述色谱条件还包括:进样量:20μL;柱温:30℃;梯度洗脱程序为:0.00

0.20min,70%流动相A;0.21

3.80min,70%流动相A下降至35%流动相A;3.80

3.81min,35%流动相A下降至2%流动相A;3.81

4.80min,2%流动相A;0.00

【专利技术属性】
技术研发人员:尹小丽
申请(专利权)人:湖南泰新医药科技有限公司
类型:发明
国别省市:

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