一种用于保存分离猪胸膜肺炎放线杆菌病料的组方试剂及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种用于保存分离猪胸膜肺炎放线杆菌病料的组方试剂及其应用，该组方试剂包括以下质量浓度的溶质成分：青霉素钠60

【技术实现步骤摘要】
一种用于保存分离猪胸膜肺炎放线杆菌病料的组方试剂及其应用


[0001]本专利技术属于病料保存
，涉及一种用于保存分离猪胸膜肺炎放线杆菌病料的组方试剂及其应用。

技术介绍

[0002]猪胸膜肺炎放线杆菌(App)现在已发现15个血清型，其中有的不具致病性，有的则会导致严重疾病。1、5、9、11和12型通常具有很强毒力，而3、6型较为温和，这种细菌寄生于扁桃体和上呼吸道。病原经飞沫或气雾在短距离内传播，在体外环境只能存活几天。
[0003]对于App的分离鉴定，目前主要是通过采集典型症状猪只的肺部组织送实验室进行分离。APP营养要求高，不容易培养，分离培养过程如果处理不当、培养条件不适合、分离不及时都很难分离到该菌；所以对于实验室来说，送检的病料重复拿来分离App显得尤为重要；但是送检的病料一般都是放于4℃冷藏，12h内应及时进行分离，否则，即使病料中有APP感染，也会因保存条件不当，存放时间太长，致使病料中APP死亡，所以对于送检的病料保存显得尤为重要。
[0004]目前对于送检病料的组织保存主要是通过4℃冷藏，对于APP分离条件要求较高，对于普通实验室来说首次分离的概率极低，所以很多时候需要对送检的病料进行保存，进行重复分离备用；但是对于APP菌株放于4℃冷藏，12h内应及时进行分离，否则，即使病料中有APP感染也会死亡，导致没办法分离到所需要的APP菌株；本专利技术专利技术的组方试剂能有效的保存感染APP的肺部组织病料，解决4℃冷藏条件下长期保存病料的同时还能分离到APP菌株的问题，提高APP的分离率，满足后续对于分离APP菌株的相关研究，如药敏试验或者疫苗研究，对于猪场后续对该病的治疗起着至关重要的作用。
[0005]因此，实验室急需一种用于APP送检肺部组织病料的保存方法，提高APP的分离率，避免送检病料组织的浪费；满足后续对于分离APP菌株的相关研究，如药敏试验或者疫苗研究，保障养猪产业的健康发展。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的就是为了提供一种用于保存分离猪胸膜肺炎放线杆菌病料的组方试剂及其应用，以实现在4℃冰箱条件下保存的送检病料60h还能分离出猪胸膜肺炎放线杆菌，同时对分离出的猪胸膜肺炎放线杆菌的生物学特性和毒力没有影响。
[0007]本专利技术的目的可以通过以下技术方案来实现：
[0008]本专利技术的技术方案之一提供了一种用于保存分离猪胸膜肺炎放线杆菌病料的组方试剂，包括以下质量浓度的溶质成分：青霉素钠60
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80mg/L，丙酸钙25
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35mg/L，纳他霉素8
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12mg/L，尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸16
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24mg/L。
[0009]进一步的，该组方试剂包括以下质量浓度的溶质成分：青霉素钠70mg/L，丙酸钙30mg/L，纳他霉素10mg/L，尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸20mg/L。
[0010]进一步的，该组方试剂中还加入有磷酸氢二钠。
[0011]更进一步的，磷酸氢二钠的加入量满足：其将组方试剂的pH调节至7
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7.5。
[0012]更优选的，磷酸氢二钠的加入量满足：其将组方试剂的pH调节至7.2。
[0013]本专利技术的技术方案之二提供了一种用于保存分离猪胸膜肺炎放线杆菌病料的组方试剂的制备方法，该制备方法具体为：
[0014]称取青霉素钠、丙酸钙、纳他霉素、尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸溶于水中，充分溶解，再加热处理，冷却，即完成。
[0015]进一步的，加热处理的温度为110℃～130℃，压力为0.2
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0.25MPa，时间为15
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25min。
[0016]更进一步的，加热处理的温度为120℃，时间为20min。
[0017]本专利技术的技术方案之三提供了一种用于保存分离猪胸膜肺炎放线杆菌病料的组方试剂的应用，该组方试剂用于保存分离猪胸膜肺炎放线杆菌病料。
[0018]进一步的，应用时，猪胸膜肺炎放线杆菌病料置于组方试剂中，再加入甘油，低温保存。甘油与组方试剂的体积比可以为3：7，另外，低温一般为4℃。
[0019]本专利技术中添加了丙酸钙，抑制霉菌生长的同时，该组分中的Ca2+可保证APP正常分泌Apx毒素，确保该组方试剂保存的病料对分离出的APP毒力没有影响；同时，还添加了NAD，可以为依赖NAD的APP菌株提供生长所需要的NAD营养因子，保证目标菌APP的活性，提高APP菌株的分离率；此外，添加了纳他霉素和青霉素钠，抑制真菌和革兰氏阳性菌生长，降低送检病料杂菌的生长和污染概率。
[0020]与现有技术相比，本专利技术具有以下优点：
[0021](1)可以长时间保存用于分离猪胸膜肺炎放线杆菌的病料，并对分离出的猪胸膜肺炎放线杆菌的生物学特性和毒力没有影响；
[0022](2)解决了送检病料不能一次分离出猪胸膜肺炎放线杆菌的问题，保证了送检病料的送检意义；
[0023](3)提高APP的分离率，满足后续对于分离APP菌株的相关研究，如药敏试验或者疫苗研究，对于猪场后续对该病的治疗起着至关重要的作用。
具体实施方式
[0024]下面结合具体实施例对本专利技术进行详细说明。本实施例以本专利技术技术方案为前提进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本专利技术的保护范围不限于下述的实施例。
[0025]以下各实施例中，青霉素钠由华北制药股份有限公司生产；纳他霉素由南京纳满生物科技有限公司生产，为食品级；尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸购自美国Sigma公司。
[0026]其余如无特别说明的原料或处理技术，则表明其均为本领域的常规市售原料或常规处理技术。
[0027]实施例1：
[0028]用于保存猪胸膜肺炎放线杆菌病料的组方试剂的配置：
[0029]取70mg青霉素钠、30mg丙酸钙、10mg纳他霉素粉末、20mg NAD溶于950ml的纯净水，充分溶解后用磷酸氢二钠调节PH值为7.2，然后用纯净水定容至1L；120℃高压(压力为0.2
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0.25MPa)20min冷却待用。
[0030]试验分为对照组和试验组，对照组的组织病料在生物安全柜里用无菌镊子和剪刀，无菌操作取大小约为4cm
×
4cm
×
4cm的肺部组织块，置于100mL广口瓶，然后置于4℃冰箱保存；试验组的病料按照上述方法取组织块，置于100mL广口瓶，然后加入70mL上述配置的组方试剂，最后加入30mL甘油，置于4℃冰箱保存；对照组和试验组分别各设置3个重复。
[0031]对照组和试验组保藏的组织病料分别于保藏的6h、12h、24h、36h、48h和60h进行APP菌株分离每个时间段各有3个肺部组织块，取完样之后组织块进行处理，不再放入4℃保存。
[0032]分离方法为：在生物安全柜中用无菌镊子从广口瓶中取出保存的肺部组织，用无菌剪刀剪个1cm的切口，用火焰灭菌的接种针在切口本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于保存分离猪胸膜肺炎放线杆菌病料的组方试剂，其特征在于，包括以下质量浓度的溶质成分：青霉素钠60
‑
80mg/L，丙酸钙25
‑
35mg/L，纳他霉素8
‑
12mg/L，尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸16
‑
24mg/L。2.根据权利要求1所述的一种用于保存分离猪胸膜肺炎放线杆菌病料的组方试剂，其特征在于，该组方试剂包括以下质量浓度的溶质成分：青霉素钠70mg/L，丙酸钙30mg/L，纳他霉素10mg/L，尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸20mg/L。3.根据权利要求1所述的一种用于保存分离猪胸膜肺炎放线杆菌病料的组方试剂，其特征在于，该组方试剂中还加入有磷酸氢二钠。4.根据权利要求3所述的一种用于保存分离猪胸膜肺炎放线杆菌病料的组方试剂，其特征在于，磷酸氢二钠的加入量满足：其将组方试剂的pH调节至7
‑
7.5。5.根据权利要求4所述的一种用于保存分离猪胸膜肺炎放线杆菌病料的组方试剂，其特征在于，磷酸氢二钠的加入量满足：其将组方试剂的pH调节至7...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓红玉，刘娴，陈秀萍，凌勇，丁能水，邓政，刘鸣慧，吴义才，吴有林，
申请(专利权)人：上杭傲农槐猪产业发展有限公司福建傲芯种业科技集团有限公司厦门嘉烨兴农业科技有限公司，
类型：发明
国别省市：