一种Zn基免疫调节佐剂的制备方法及产品和应用技术

本发明专利技术公开了一种Zn基免疫调节佐剂的制备方法：S1、在氩气保护下，将氯化铝溶液、氯化镁溶液的混合盐溶液加入氢氧化钠溶液中，搅拌，离心后重悬作为第一混合溶液；S2、向第一混合溶液中加入氯化锌溶液，稀释后进行搅拌置换，离心后重悬作为第二混合溶液；S3、将第二混合溶液进行水热反应，得到Zn基免疫调节佐剂。本发明专利技术还公开了上述制备方法制得的Zn基免疫调节佐剂及在制备能逆转肿瘤微酸环境或/和逆转肿瘤微酸环境的材料上的应用。本发明专利技术制备得到的Zn基免疫调节佐剂具备良好的纯度、抗酸性和肿瘤特异性杀伤效果，可以逆转肿瘤部位的免疫抑制微环境、通过干扰自噬和激活cGAS

【技术实现步骤摘要】
一种Zn基免疫调节佐剂的制备方法及产品和应用


[0001]本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种Zn基新型免疫调节佐剂的制备方法及产品和应用。

技术介绍

[0002]恶性肿瘤是威胁人类生命健康的第二大重大疾病，现有的治疗手段(如手术切除、放疗、化疗等)难以有效抑制其增殖与转移。作为对现有治疗手段的重要补充，肿瘤治疗性疫苗能通过刺激机体形成保护性免疫应答，有效追踪并清除恶性肿瘤。然而，受限于肿瘤微环境的免疫抑制和特异性的肿瘤细胞表面抗原靶点的缺乏，目前实体瘤的临床免疫治疗效果仍差强人意。目前研究较为广泛的方法是将佐剂与细胞因子或抗体的联用，通过瘤内注射诱导免疫原性细胞死亡，进而富集肿瘤相关抗原到淋巴结以唤起肿瘤特异性免疫。然而，由于细胞因子的多效性及抗体的脱靶效应，该方法容易产生非特异性毒性，且不能直接干扰免疫抑制肿瘤微环境。
[0003]因此，针对肿瘤特性，开发能同时调节免疫抑制微环境并促进特异性肿瘤免疫的新型免疫佐剂尤为重要。
[0004]肿瘤微环境的异常代谢(如乳酸积累)是限制免疫疗效的重要原因之一。中和肿瘤区域微酸环境能有效恢复免疫细胞(如细胞毒性T细胞、自然杀伤细胞、M1肿瘤相关巨噬细胞等)的功能和水平。在肿瘤细胞内，与维持pH稳态密切相关的细胞器是溶酶体。破坏肿瘤溶酶体不仅能减轻肿瘤酸性，还能阻断自噬途径并破坏线粒体以触发肿瘤细胞死亡。此外，营养性金属离子(Zn
2+
)能发挥类似细胞因子的作用。例如，Zn
2+
可协同受损线粒体释放的DNA激活肿瘤细胞中环鸟苷酸
‑
腺苷酸合成酶
‑
干扰素基因刺激因子(cGas
‑
STING)信号通路，从而诱导免疫原性的细胞死亡，放大特异性肿瘤免疫的杀伤效果。
[0005]鉴于以上背景，开发能同时调节肿瘤微环境异常代谢并促进特异性肿瘤免疫的Zn基治疗性佐剂，有望同时解决肿瘤微环境的免疫抑制和特异性的肿瘤细胞表面抗原靶点的缺乏的限制，实现高效的抗肿瘤效果。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供一种Zn基免疫调节佐剂的制备方法，制备得到的Zn基免疫调节佐剂具备良好的纯度、抗酸性和肿瘤特异性杀伤效果，可以逆转肿瘤部位的免疫抑制微环境、通过干扰自噬和激活cGAS
‑
STING途径放大肿瘤特异性免疫，实现对原位、远端及转移性肿瘤的有效治疗。
[0007]本专利技术所提供的技术方案为：
[0008]本专利技术提供一种Zn基免疫调节佐剂的制备方法(一种抗酸性良好且高纯度的制备方法)，所述方法包括如下步骤：
[0009]S1、在氩气保护下，将氯化铝溶液、氯化镁溶液的混合盐溶液加入氢氧化钠溶液中，搅拌，离心后重悬作为第一混合溶液；
[0010]S2、向步骤S1中的第一混合溶液中加入氯化锌溶液，稀释后进行搅拌置换，离心后重悬作为第二混合溶液；
[0011]S3、将步骤S2中第二混合溶液进行水热反应，得到Zn基免疫调节佐剂。
[0012]本专利技术中，氯化铝、氯化镁的混合盐溶液加入氢氧化钠溶液，生成氢氧化铝与氢氧化镁的混合物。加入氯化锌进行搅拌后，离子半径与Mg
2+
相似的Zn
2+
能置换MgAl
‑
悬浊液中的Mg
2+
，终产物的纯度及pH与搅拌置换时间及Zn前体的投料浓度息息相关，并最终影响Zn基新型调节佐剂的抗酸性和免疫调节效果。随后在水热反应中，氢氧化镁/锌缓慢水解，Mg
2+
和Zn
2+
攻击氢氧化铝中的Al
3+
，最终形成规则的三元金属片层结构—Zn基免疫调节佐剂。
[0013]在步骤S1中，将0.5～5g氯化铝分散于3.5～35mL超纯水的氯化铝溶液和1～10g氯化镁分散于3.5～35mL超纯水的氯化镁溶液混合获得混合盐溶液，在氩气保护下将混合盐溶液与0.5～5g分散于28～280mL的氢氧化钠溶液混匀反应，离心后用28～280mL超纯水重悬作为第一混合溶液；在步骤S2中，在2～30mL第一混合溶液中加入3～50mg分散于2.5～37.5mL超纯水的氯化锌溶液，用5.5～82.5mL超纯水重悬。通过上述投料含量可以控制Zn基免疫调节佐剂的纯度及pH。
[0014]作为优选，在步骤S2中，在2～20mL第一混合溶液中加入3～27mg分散于2.5～25mL超纯水的氯化锌溶液，用5.5～55mL超纯水稀释后进行搅拌置换，离心后用5～20mL超纯水重悬作为第二混合溶液。从而使制备得到的Zn基免疫调节佐剂的纯度及pH及粒径更合适应用于逆转肿瘤微酸环境或/和增强肿瘤特异性免疫。
[0015]本专利技术中步骤S1所述搅拌时长为5～60min，步骤S2所述搅拌置换时长为1～10h，水热反应的温度为70～120℃，反应时间为1～10h；优选步骤S1所述搅拌时长为5～30min，步骤S2所述搅拌置换时长为2～8h，水热反应的温度为100℃，反应时间为1～5h。通过进一步控制反应时间来同时控制Zn基免疫调节佐剂的纯度及pH。
[0016]本专利技术针对实体瘤治疗中面临的肿瘤微环境的免疫抑制及特异性的肿瘤细胞表面抗原靶点的缺乏的限制，提供了上述Zn基免疫调节佐剂的制备方法，通过控制Zn的投料浓度来控制该Zn基新型调节佐剂的pH，为解除肿瘤微环境的酸性抑制奠定基础，使其所得到的Zn基免疫调节佐剂具备良好的纯度、抗酸性和肿瘤特异性杀伤效果，可以逆转肿瘤部位的免疫抑制微环境、通过干扰自噬和激活cGAS
‑
STING途径放大肿瘤特异性免疫，实现对原位、远端及转移性肿瘤的有效治疗。
[0017]本专利技术制备的Zn基免疫调节佐剂为片状，粒径为100
±
10nm。Zn基免疫调节佐剂的尺寸便于被细胞摄取，且表现出明显的肿瘤特异性毒性，即对肿瘤细胞(B16F10、4T1)表现出明显细胞毒性，对正常细胞(DC2.4、Raw264.7)毒性不明显。
[0018]本专利技术还提供了上述制备方法得到的Zn基免疫调节佐剂。
[0019]本专利技术还提供了Zn基免疫调节佐剂在制备能逆转肿瘤微酸环境的材料上的应用。
[0020]本专利技术还提供了Zn基免疫调节佐剂在制备能增强肿瘤特异性免疫的材料上的应用。其主要是通过阻断肿瘤细胞自噬及激活cGAS
‑
STING途径。
[0021]本专利技术还提供了Zn基免疫调节佐剂在制备能同时逆转肿瘤微酸环境和增强肿瘤特异性免疫的材料上的应用。或称之为同时改善免疫微环境和促进肿瘤特异性免疫的材料。
[0022]与现有技术相比，本专利技术的有益效果体现在：
[0023](1)本专利技术中的制备方法其反应体系温和，合成条件可控，成本低，具有良好的临床转化潜力。
[0024](2)本专利技术中所得到的Zn基免疫调节佐剂可通过控制Zn的投料浓度控制pH及终产物纯度，实现了抗酸性和佐剂活性的平衡，并具有较高的纯度。
[00本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种Zn基免疫调节佐剂的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：S1、在氩气保护下，将氯化铝溶液、氯化镁溶液的混合盐溶液加入氢氧化钠溶液中，搅拌，离心后重悬作为第一混合溶液；S2、向步骤S1中的第一混合溶液中加入氯化锌溶液，稀释后进行搅拌置换，离心后重悬作为第二混合溶液；S3、将步骤S2中第二混合溶液进行水热反应，得到Zn基免疫调节佐剂。2.根据权利要求1所述的Zn基免疫调节佐剂的制备方法，其特征在于，在步骤S1中，将0.5～5g氯化铝分散于3.5～35mL超纯水的氯化铝溶液和1～10g氯化镁分散于3.5～35mL超纯水的氯化镁溶液混合获得混合盐溶液，在氩气保护下将混合盐溶液与0.5～5g分散于28～280mL的氢氧化钠溶液混匀反应，离心后用28～280mL超纯水重悬作为第一混合溶液；在步骤S2中，在2～30mL第一混合溶液中加入3～50mg分散于2.5～37.5mL超纯水的氯化锌溶液，用5....

【专利技术属性】
技术研发人员：李方园，凌代舜，张凌霄，胡希，赵婧，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：