一种利用表面增强拉曼光谱技术无标签监测药物的方法及其应用，本发明专利技术涉及一种利用表面增强拉曼光谱技术无标签监测药物的方法及其应用。本发明专利技术的目的是为了解决现有药物成分分析方法复杂、耗时长的问题，本发明专利技术用柠檬酸钠溶液还原硝酸银生成银溶胶，加入卤化物孵育制备增强基底，将增强基底与待测样品混合，然后加入氯化钙溶液充分混合，再进行SERS检测。本发明专利技术在血清中检测小分子药物具有较好的灵敏度和信噪比，还成功监测了小鼠血清中阿霉素分子的代谢水平并检测到人血清中乐果的SERS信号，以及可以对血清中药物进行定量分析，本发明专利技术方法具有检测时间短、高灵敏性、高稳定性和重现性的特点。本发明专利技术应用于药物监测领域。本发明专利技术应用于药物监测领域。本发明专利技术应用于药物监测领域。
【技术实现步骤摘要】
制备增强基底检测小分子药物。第一步“清洗”，利用卤化物清洗Ag@cit表面的柠檬酸根离子，不但消除了柠檬酸离子信号的干扰，而且形成了适合小分子药物进入的“热点”间隙，得到了清晰的小分子药物的SERS信号。第二步“清洗”，用钙离子再清洗Ag@cit表面，钙离子可以与残留柠檬酸根形成配合物进一步消除其影响。同时将氯化钙作为聚集剂可以引导银纳米颗粒(Ag@I)聚集，增强了SERS信号，该方法称为“两步清洗法”。该方法在血清中检测小分子药物具有较好的灵敏度和信噪比，成功的获得了具有较好信噪比的6种常见药物的SERS特征指纹图谱，包括阿霉素、阿糖胞苷、异烟肼、黄连素、柔红霉素和羧苄西林。此外，还成功地检测到了小鼠血清中阿霉素分子的SERS信号，以及可以对血清中药物进行定量分析。本申请建立的方法具有检测时间短、高灵敏性、高稳定性和重现性的特点，在药物检测领域具有广阔的应用前景。
附图说明
[0011]图1为实施例1中盐酸阿霉素、阿糖胞苷和盐酸黄连素的SERS谱图；
[0012]图2为实施例1中柔红霉素、羧卡西林和异烟肼的SERS谱图；
[0013]图3为实施例1中盐酸阿霉素、阿糖胞苷和盐酸黄连素混合物的SERS谱图；其中a为盐酸阿霉素、b为阿糖胞苷、c为盐酸黄连素、d为二氯甲烷；
[0014]图4为实施例1中柔红霉素、羧卡西林和异烟肼混合物的SERS谱图；d为二氯甲烷、e为柔红霉素、f为羧卡西林、g为异烟肼；
[0015]图5为实施例2中第1天到第5天小鼠血清中阿霉素的SERS光谱；其中1为5天、2为4天、3为3天、4为2天、5为1天；
[0016]图6为实施例2中I
1436
/I
701
特征峰比值随时间变化的折线图；
[0017]图7为实施例3中盐酸黄连素不同体系的SERS谱图；其中1为柠檬酸钠还原制备的银溶胶、2为碘离子孵育后的银溶胶、3为盐酸黄连素+碘离子孵育后的银溶胶；4为盐酸黄连素+引入钙离子聚集剂的银溶胶；
[0018]图8为实施例4中乐果固体及其甲醇溶液的SERS谱图；
[0019]图9为实施例5中盐酸黄连素在5种不同浓度下的SERS光谱；其中1为20μM、2为30μM、3为40μM、4为50μM、5为60μM；
[0020]图10为盐酸黄连素的特征峰强度比值(I
728
/I
701
)与相应浓度梯度的定量分析；
[0021]图11为混合药物的SERS光谱；其中1为盐酸黄连素浓度20μM、2为盐酸黄连素浓度30μM、3为盐酸黄连素浓度40μM、4为盐酸黄连素浓度50μM、5为盐酸黄连素浓度60μM；
[0022]图12为混合药物中盐酸黄连素的特征峰强度比值(I
728
/I
701
)与相应浓度梯度的定量分析。
具体实施方式
[0023]具体实施方式一：本实施方式一种利用表面增强拉曼光谱技术无标签监测药物的方法，按以下步骤进行：一、将硝酸银溶于去离子水中，以1000
‑
2500转/分钟的转速搅拌溶解，得到硝酸银溶液，然后向硝酸银溶液中加入柠檬酸钠溶液，加热至沸腾后停止加热，搅拌冷却至室温，得到银溶胶，再将银溶胶在20℃、5000
‑
10000转/分钟的条件下离心10
‑
30min，然后去上清，得到离心产物，然后将离心产物与浓度为1mM的卤化物溶液在室温下孵
育30
‑
180min，得到增强基底；其中向硝酸银溶液中加入柠檬酸钠溶液的方式为直接倒入或滴加，若是滴加到硝酸银溶液中，则滴加速度为8
‑
12滴/秒；柠檬酸钠溶液与硝酸银溶液的体积比为1：(20
‑
40)；离心产物与卤化物溶液的体积比为1：(0.5
‑
2)；
[0024]二、将增强基底与待测样品混合，然后加入浓度为10m M的氯化钙溶液，充分混合，再进行SERS检测，其中增强基底、待测样品与氯化钙溶液的体积比为20：(5
‑
15)：(1
‑
3)。
[0025]具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同的是：步骤一中硝酸银溶液的浓度为0.15
‑
0.20g/L，柠檬酸钠溶液的浓度为7
‑
13g/L。其它与具体实施方式一相同。
[0026]具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一或二不同的是：步骤一中卤化物为氯化钠、氯化钾、溴化钠、溴化钾、碘化钠或碘化钾。其它与具体实施方式一或二相同。
[0027]具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一至三之一不同的是：步骤二中SERS检测的检测条件为：激光波长为633nm，扫描时间为10
‑
60s，激光能量20mW。其它与具体实施方式一至三之一相同。
[0028]具体实施方式五：本实施方式一种利用表面增强拉曼光谱技术无标签监测药物的方法应用于分析血清中药物成分。
[0029]具体实施方式六：本实施方式与具体实施方式五不同的是：所述方法用于血清中农药的检测。其它与具体实施方式五相同。
[0030]具体实施方式七：本实施方式与具体实施方式五或六不同的是：所述方法用于检测并区分血清中混合药物的药物成分。其它与具体实施方式五或六相同。
[0031]具体实施方式八：本实施方式与具体实施方式六或七不同的是：检测并区分血清中混合药物的药物成分的方法：混合药物经二氯甲烷归一化通过SERS检测后，利用峰位和共享峰值强度差异区分混合药物的成分。其它与具体实施方式六或七相同。
[0032]具体实施方式九：本实施方式一种利用表面增强拉曼光谱技术无标签监测药物的方法应用于监测血清中药物代谢水平。
[0033]具体实施方式十：本实施方式一种利用表面增强拉曼光谱技术无标签监测药物的方法应用于血清中药物的定量分析。
[0034]通过以下试验验证本专利技术的有益效果：
[0035]实施例1、
[0036]一种利用表面增强拉曼光谱技术的快速无标签监测药物的方法，按以下步骤进行：一、制备增强基底：a、称取0.07g硝酸银溶于400mL去离子水中，在三颈烧瓶中以1650转/分钟的转速搅拌8分钟，得到硝酸银溶液；称取0.12g的柠檬酸钠溶于12ml去离子水，然后倒入到硝酸银溶液中，在搅拌条件下加热至沸腾后停止加热，溶液由黄色变为绿色，冷却至室温，得到银溶胶，避光保存；b、将银溶胶离心，6500转/分钟，20min，20℃去上清，然后取10μL离心产物与10μL浓度为1mM的碘化钾溶液在室温下孵育2h，得到增强基底；
[0037]二、将20μL增强基底与10μL待测样品混合，然后加入1.6μL氯化钙溶液(10m M)充分混合，再进行SERS检测，检测条件为：激光波长为633nm，扫描时间为30s，激光能量20mW。
[0038]待测样品的配制：
[0039]分别称取10...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种利用表面增强拉曼光谱技术无标签监测药物的方法，其特征在于该方法按以下步骤进行：一、将硝酸银溶于去离子水中，以1000
‑
2500转/分钟的转速搅拌溶解，得到硝酸银溶液，然后向硝酸银溶液中加入柠檬酸钠溶液，加热至沸腾后停止加热，搅拌冷却至室温，得到银溶胶，再将银溶胶在20℃、5000
‑
10000转/分钟的条件下离心10
‑
30min，然后去上清，得到离心产物，然后将离心产物与浓度为1mM的卤化物溶液在室温下孵育30
‑
180min，得到增强基底；其中向硝酸银溶液中加入柠檬酸钠溶液的方式为直接倒入或滴加，若是滴加到硝酸银溶液中，则滴加速度为8
‑
12滴/秒；柠檬酸钠溶液与硝酸银溶液的体积比为1：(20
‑
40)；离心产物与卤化物溶液的体积比为1：(0.5
‑
2)；二、将增强基底与待测样品混合，然后加入浓度为10m M的氯化钙溶液，充分混合，再进行SERS检测，其中增强基底、待测样品与氯化钙溶液的体积比为20：(5
‑
15)：(1
‑
3)。2.根据权利要求1所述的一种利用表面增强拉曼光谱技术无标签监测药物的...
【专利技术属性】
技术研发人员：李洋，孙建平，王蕴鹏，王晓童，
申请(专利权)人：哈尔滨医科大学，
类型：发明
国别省市：
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