一种龙虾尾肉中痕量恩诺沙星的SERS检测方法技术

本发明专利技术公开了一种龙虾尾肉中痕量恩诺沙星的SERS检测方法，属于食品，药品安全检测领域。本发明专利技术的龙虾尾肉中痕量恩诺沙星的SERS检测方法，是通过抗坏血酸的快速还原性来竞争并阻止置换反应，制备形态均一、SERS增强性能优异、氧化稳定性好的核

【技术实现步骤摘要】
一种龙虾尾肉中痕量恩诺沙星的SERS检测方法


[0001]本专利技术涉及一种龙虾尾肉中痕量恩诺沙星的SERS检测方法，属于食品、药品安全检测领域。

技术介绍

[0002]随着全球食品贸易和食品供应链的快速发展，食品安全已成为世界各国政府关注的热点问题和民生问题。食品安全和质量控制对于保护消费者权益和整个食品行业的发展至关重要。恩诺沙星作为一类广谱抗生素，因其优良的抗菌效果和低廉的价格优势，被广泛应用于家禽，牲畜以及水产领域。有些养殖户通过添加过量的抗生素来提高养殖成活率和动物健康状况。因此，快速、超灵敏检测抗生素变得非常重要。
[0003]目前常用于恩诺沙星残留的检测方法有高效液相色谱(HPLC)、气相色谱
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质谱联用(GC
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MS)、液相色谱
‑
串联质谱(LC
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MS/MS)等，这些方法具有准确性好、灵敏度高等特点，但存在着有机溶剂耗量大、费用高、检测周期长等缺点，很难满足快速检测的要求。因此迫切需要建立一种快捷、准确、灵敏、低耗的检测方法。
[0004]表面增强拉曼光谱(Surface
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Enhanced Raman Scattering，以下简称SERS)检测作为一种特殊的拉曼光谱检测技术，其增强机理已被证实为相邻纳米颗粒之间区域电磁场耦合形成表面电子云叠加“热点”，即“热点”效应。该检测技术既具有拉曼光谱的指纹识别性，又具有较高的响应强度，使得SERS检测技术具有灵敏度高，针对性强，测试迅速，成本低廉等优点，在分析检测领域凸显出巨大的潜力。
[0005]Au、AgNPs因其具有优异的表面等离子体共振(LSPR)的光学性质而被广泛研究，其中，Ag NPs虽然拥有优异的SERS增强性能，但它的化学稳定性和氧化稳定性较差，一旦氧化，SERS活性显著降低。相比之下，Au以其抗氧化性和良好的生物相容性而被广泛应用，但它在SERS增强性能比Ag差一个数量级。原则上，通过在Ag核表面沉积一层薄的Au壳，从而实现兼具有优异的化学稳定性(来自Au壳)和优异SERS活性(来自Ag核)的Ag@AuNPs溶液。但是制备完整金壳银核结构的粒子并不容易，原因是在金的还原生长过程中，很容易与纳米银发生置换反应，导致很难得到完全覆盖的核壳结构。同时，由于SERS效应是一种近场效应，增强效果随着分子与基底距离的增加而指数下降，因此为了保证待测分子在Ag@Au电子云叠加的“热点”范围内，严格控制金壳的厚度非常重要。
[0006]近年来，相对于由二聚体及三聚体纳米颗粒形成的一维(1D)“热点”，二维(2D)和三维(3D)结构的区域等离子体“热点”增强阵列因其长程效应和数量的增多而使得总体等离子体信号大大增强，并且信号增强效应更加稳定、持久。虽然三维“热点”阵列具有独立的光散射和众多空间增强局域场，但由颗粒自组装形成的区域有序二维“热点”阵列因具有偏振光效应和界面有序性而更易于实际操控和应用。

技术实现思路

[0007]针对现有技术存在的缺陷与不足，本专利技术建立了一种龙虾尾肉中痕量恩诺沙星的
SERS检测方法。首先通过制备形态均一、SERS增强性能优异、氧化稳定性好的核
‑
壳式双金属Ag@Au NPs溶液，关键制备策略为通过利用抗坏血酸的快速还原性来竞争并阻止置换反应，从而实现在Ag NPs上均匀且完全覆盖地沉积Au壳；之后利用微球刻蚀技术制备亲水性纳米基底模板材料，并成功将制备的Ag@Au NPs溶液通过静电吸附作用自然沉降到基底模板孔洞中，宏观上呈现为均匀排布的Ag@Au纳米阵列，孔洞中Ag@Au NPs相互之间聚集形成(区域电磁场耦合作用)形成“热点”效应，从而显著提高了龙虾尾肉中痕量恩诺沙星的检测灵敏度和稳定性。
[0008]本专利技术的目的是提供一种龙虾尾肉中痕量恩诺沙星的检测方法，所述方法包括如下步骤：
[0009](1)标样液的制备：配制得到一系列浓度的龙虾尾肉基质的恩诺沙星标样液；
[0010](2)待测样品提取液的制备：称取待测样品放入离心管中，加入乙酸乙酯涡旋震荡，超声振荡，离心取上清液；然后在上清液中加入正己烷和二氯甲烷涡旋，再离心，去除有机溶剂；再加入丙酮复溶，过有机滤膜，即得待测样品提取液；
[0011](3)龙虾尾肉基质的恩诺沙星标样液和待测样品提取液检测：分别取步骤(1)制备的一系列浓度的龙虾尾肉基质的恩诺沙星标样液和步骤(2)制备的待测样品提取液，滴加到Ag@Au纳米阵列基片槽中，黑暗静置，待基片表面水分蒸发后，取出基片，以1382cm
‑1为特征峰分别采集一些列浓度的龙虾尾肉基质的恩诺沙星标样液和待测样品提取液的SERS光谱强度；
[0012](4)标准曲线的绘制和待测样品中恩诺沙星的含量测定：以龙虾尾肉基质标样液中有效恩诺沙星浓度的对数为横坐标，以步骤(3)采集到的一些列浓度的龙虾尾肉基质的恩诺沙星标样液SERS光谱强度为纵坐标，构建定量关系模型；并依据此定量关系模型，根据步骤(3)测定的待测样品的SERS光谱强度，计算出待测样品中恩诺沙星的含量。
[0013]在一种实施方式中，步骤(3)所述Ag@Au纳米阵列基片是由Ag@Au NPs溶液和点阵极板组成。
[0014]在一种实施方式中，所述Ag@Au NPs由核壳结构组成，Ag为核，Au为壳；Au壳均匀的包覆在Ag的表面。
[0015]在一种实施方式中，所述Ag核的平均尺寸分别为18～35nm；所述Au壳的厚度为4～12.6nm。
[0016]在一种实施方式中，所述Ag核的平均尺寸分别为26.5nm；所述Au壳的厚度为6.8nm。
[0017]在一种实施方式中，所述龙虾尾肉基质的恩诺沙星标样液的浓度为10
‑4mol/L～10
‑
11
mol/L。
[0018]在一种实施方式中，步骤(2)所述离心取上清液中离心的条件为：5000～8000rpm，5
‑
10min。
[0019]在一种实施方式中，步骤(1)所述龙虾尾肉基质的恩诺沙星标样液的制备是在恩诺沙星标准溶液中加入龙虾尾肉基质提取液。
[0020]在一种实施方式中，步骤(3)所述Ag@Au纳米阵列基片的制备包括如下步骤：
[0021]1)Ag NPs种子溶液的制备：将柠檬酸盐溶液和水混合加热，然后再加入AgNO3溶液，搅拌之后加入NaBH4溶液；之后将上述混合溶液在70～80℃下持续剧烈搅拌反应；冷却
至室温；即得到Ag NPs种子溶液；
[0022]2)Ag NPs溶液的制备：将柠檬酸盐溶液与水混合并加热煮沸，然后在搅拌下加入步骤1)制备的Ag NPs种子溶液和AgNO3溶液，持续搅拌，冷却至室温，即得Ag NPs溶液；
[0023]3)Ag@Au NPs溶液的制备：将PVP
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5500溶液、L
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抗坏血酸溶液、NaOH水溶液和步骤2)的Ag NPs浓缩液混合本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种龙虾尾肉中痕量恩诺沙星的检测方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)标样液的制备：配制得到一系列浓度的龙虾尾肉基质的恩诺沙星标样液；(2)待测样品提取液的制备：称取待测样品放入离心管中，加入乙酸乙酯涡旋震荡，超声振荡，离心取上清液；然后在上清液中加入正己烷和二氯甲烷涡旋，再离心，去除有机溶剂；再加入丙酮复溶，过有机滤膜，即得待测样品提取液；(3)龙虾尾肉基质的恩诺沙星标样液和待测样品提取液检测：分别取步骤(1)制备的一系列浓度的龙虾尾肉基质的恩诺沙星标样液和步骤(2)制备的待测样品提取液，滴加到Ag@Au纳米阵列基片槽中，黑暗静置，待基片表面水分蒸发后，取出基片，以1382
±
5cm
‑1为特征峰分别采集一系列浓度的龙虾尾肉基质的恩诺沙星标样液和待测样品提取液的SERS光谱强度；(4)标准曲线的绘制和待测样品中恩诺沙星的含量测定：以龙虾尾肉基质标样液中有效恩诺沙星浓度的对数为横坐标，以步骤(3)采集到的一系列浓度的龙虾尾肉基质的恩诺沙星标样液SERS光谱强度为纵坐标，构建定量关系模型；并依据此定量关系模型，根据步骤(3)测定的待测样品的SERS光谱强度，计算出待测样品中恩诺沙星的含量。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述Ag@Au纳米阵列基片是由Ag@Au NPs溶液和点阵基板组成。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述Ag@Au NPs由核壳结构组成，Ag为核，Au为壳；Au壳均匀的包覆在Ag的表面。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述Ag的平均尺寸分别为18～35nm；所述Au壳的厚度为4～12.6nm。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述Ag的平均尺寸分别为26.5nm；所述Au壳的厚度为6.8nm。6.根据权利要求1～5任一项所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述Ag@Au纳米阵列基片的制备包括如下步骤：1)Ag NPs种子溶液的制备：将柠檬酸盐溶液和水混合加热，然后再加入AgNO3溶液，搅拌之后加入NaBH4溶液；之后将上述混合溶液在70...

【专利技术属性】
技术研发人员：成玉梁，李培珍，陈建男，于航，郭亚辉，谢云飞，姚卫蓉，钱和，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：