一种三七总皂苷的分离纯化方法技术

本发明专利技术属于皂苷纯化分离领域，具体涉及三七总皂苷的分离纯化。本发明专利技术提供的三七总皂苷纯化方法针对三七总提取物采用梯度盐析、分子蒸馏和固相萃取联合手段，具有快速分离、成本较低、纯度高的优点，无需树脂层析处理，适合工业化生产；且产品提取率和纯度较高。且产品提取率和纯度较高。

【技术实现步骤摘要】
一种三七总皂苷的分离纯化方法


[0001]本专利技术涉及天然产物分离纯化领域，具体涉及三七总皂苷的不依赖树脂层析的纯化富集方法。

技术介绍

[0002]三七为五加科人参属植物，又名田七、参三七，为传统珍贵药材。目前发现其含有皂苷、多糖、黄酮类、挥发油和氨基酸等在内的至少两百多种活性化合物， 其根、茎、叶、花均可入药， 目前《国家基本药物目录》和《国家中药保护品种目录》中至少有二十余种制剂含有三七组分。现代药理学表明三七不但具有止血、扩张血管、活血化瘀药理作用，还有着降低心肌耗氧量、抑制血小板凝聚、扩张冠状动脉、抗动脉粥样硬化、抗血栓形成等活性。 其中，三七总皂苷（PNS）具有良好的活血化瘀作用，抗炎作用，心肌保护作用等。
[0003]作为三七的主要有效活性成分，三七总皂苷成分较杂，含有多种单体皂苷，主要成分有三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Rb1、Rd、Re等，其中以人参皂苷Rg1和Rb1较多。《中国药典》规定：三七总皂苷按干燥品计算，人参皂苷Rg1不得少于25％、人参皂苷Rb1不得少于30％，且三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd总量不得低于75％(口服用)。
[0004]皂苷类物质的常规预提取方法有加水煎法、有机溶剂回流提取法、渗漉法等，以及有微波提取、超声提取法等；已经比较成熟。
[0005]但是，对于三七总皂苷分离纯化工艺，精制的方法不多，种类主要包括色谱法、层析法和结晶法等。硅胶柱色谱与凝胶柱色谱法可以纯化得到高纯度的皂苷成分， 但其操作复杂，成本高，不适合工业化生产。
[0006]其中柱层析法例如可以采用硅胶、氧化铝、大孔吸附树脂等，其中大孔树脂吸附分离工艺操作简便，成本较低，使用最广。也是目前工业化生产采用的主要方法。
[0007]但是树脂吸附分离技术存在如下缺点：（1）分离得到的产品纯度不高，适合粗分离或初步分离。为了得到高纯度产品，需要进行再次或多次吸附分离。造成大量的损耗。使得分离产率较低。（2）特异性分离效果差，分离效果严重依赖上柱样品纯度。即，对上柱液的纯度要求较高，杂质含量越多分离效果越差，因此通常需要经过一系列前处理进行初步纯化才能上柱。
[0008]在现有技术中，示例性地，CN107669721A对三七粗粉进行酶解后，将酶解物进行水提以及多级逆流醇提， 然后采用大孔吸附树脂吸附处理，得到三七总皂苷的收率约在80％。CN104800258A将三七药材粉碎成粗粉，多功能提取罐中加6
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8倍量的水，再加入乳化剂混匀，然后回流提取；然后提取液再过大孔吸附树脂，尽管提取物收率提高了30％，但是纯度仍然未获得明显提升。
[0009]因此，现有技术中采用大孔树脂吸附存在的工业化生产损耗大、产品纯度不高的缺陷难以克服。
[0010]面对传统工艺的不足，有必要寻找到一种操作简单、要求低、成并适用于大规模工
业生产的三七总皂苷提取及分离纯化方法。
[0011]申请人在与集团兄弟公司的合作研发中发现，可以通过特定的盐析步骤结合硅胶柱层析实现高纯度三七总皂苷的低损耗提取分离，可以用于护肤品添加剂，从而避免了采用两次或多次硅胶柱层析带来的高损耗。但遗憾的是，该工艺仍需要结合柱层析以实现高纯度产品的分离。
[0012]因此，在面对成分复杂的三七提取物时，现有技术的工业化生产难以从其中直接大规模纯化分离得到高纯度的三七总皂苷。
[0013]综上，基于三七粗提原料，开发不依赖柱层析或树脂纯化的分离纯化工艺，且成本低廉、适合大批量快速纯化且产品收率和纯度较高的三七总皂苷提取分离技术具有重要的应用价值和市场价值。

技术实现思路

[0014]针对现有技术中从三七提取液中分离三七总皂苷存在的分离效率低、消耗大、产物纯度低以及难以大批量低成本工业化分离等问题，本专利技术提供了一种不依赖柱层析的基于梯度盐析
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固相萃取相结合的三七总皂苷提取分离工艺。
[0015]具体地，本专利技术的首要目的是提供一种三七总皂苷提取物的制备方法。
[0016]所述方法针对三七总提取物采用梯度盐析、分子蒸馏和固相萃取联合手段，具有快速分离、成本较低、纯度高的优点，适合工业化生产；且产品提取率和纯度较高。
[0017]本专利技术的另一目的在于提供上述分离纯化得到的三七总皂苷提取物精制品，其具有不低于90%的HPLC纯度，优选为不低于95%的纯度。
[0018]本专利技术方法采用的主要技术方案为：对初提后的三七总皂苷粗提物进行分子蒸馏获得轻相组分，再采用特定体系的梯度盐析、微球吸附相结合（固相萃取）的手段，从而提高三七总皂苷产品的纯化效率和纯度，并有效降低产品损耗（无需采用层析工艺），适合工业化生产。
[0019]其中，所述梯度盐析至少包括在两段不同pH下进行的盐析处理；其中，初次盐析pH优选5.0
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6.0，二次盐析pH不低于6.5，优选不低于6.8。
[0020]进一步地，盐析处理后对所得盐析物用醇溶液（优选乙醇或丁醇）进行重结晶，从而得到纯化的三七总皂苷固体。优选地，三七总皂苷的含量不低于95%。
[0021]具体地，本专利技术的技术方案如下。
[0022]第一个方面，本专利技术提供一种三七总皂苷提取物的分离纯化方法，包括以下步骤S1
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S4：步骤S1：提取预处理，制备三七总皂苷粗提物将干燥的三七粉用有机溶剂法进行常规提取，得到三七总皂苷粗提物。优选采用含醇的水溶液进行提取。
[0023]三七总皂苷的提取方法是本领域熟知的。
[0024]优选地，按照如下步骤进行：将经过清洗、干燥处理的三七药材（优选干燥的根）粉碎至粒径0.2
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0.5mm，用60
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80%体积分数的乙醇溶液（在本申请方案中所有醇溶液的百分数都是指体积百分数）浸泡2
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6h后（优选60
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70℃下热浸，或置于摇床上震摇）,100
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300W超声处理15
‑
30min后，再采用回
流提取法进行提取：每次回流提取30
‑
60min，至少提取两次，过滤，合并收集提取液；优选地，将合并的提取液以6000
‑
8000rpm离心20
‑
30min，收集上清液并减压蒸发浓缩至原药材量的1
‑
2倍重量。
[0025]更优选地，所述提取还可以采用加速溶剂法，其中，加速溶剂法包括：其中加速溶剂提取条件为：以乙醇为溶剂，提取温度120
‑
125℃，提取压力6
‑
6.8MPa，提取时间25
‑
45min。
[0026]步骤S2：分子蒸馏处理，去除大分子重相组分对于粗提物中的核酸、蛋白、部分多糖等大分子重相组分，可以通过分子蒸馏的方法快速与小分子轻相组分分离开来。
[0027]具体地，分子蒸馏纯化的步骤如下：取上述本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种三七总皂苷的分离纯化方法，所述三七总皂苷由三七或三七粗提物为原料，经分子蒸馏、梯度盐析、微球富集步骤处理得到；其特征在于，所述梯度盐析步骤至少包括在两段不同pH下进行的盐析处理；其中，初次盐析pH 5.0
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6.0，二次盐析pH不低于6.8。2.一种三七总皂苷的分离纯化方法，其特征在于，具体步骤如下：步骤S1：制备三七总皂苷粗提物将干燥的三七粉用有机溶剂进行提取，浓缩，得到三七总皂苷粗提物；所述有机溶剂优选采用含醇的水溶液进行提取；步骤S2：分子蒸馏处理，去除大分子重相组分，步骤如下：取上述浓缩后的三七总皂苷提取物溶液，在分子蒸馏器中进行预热处理后进行分子蒸馏，参数为：真空度为3
‑
15Pa，蒸馏温度150
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180℃，蒸馏时间15
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30min，冷凝温度4
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10℃，刮膜转速300
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400r/min；收集沿冷凝柱流出的轻相组分；步骤S3：梯度盐析处理：将上述经过分子蒸馏处理的三七总皂苷溶液用至少两段不同的pH进行盐析处理，得到三七总皂苷析出物；其中，初次盐析pH5.0
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6.0，二次盐析pH 6.8
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7.2；步骤S4：功能化磁性微球富集及除盐处理采用表面含有羟基或氨基官能团的磁性微球进行富集及除盐处理。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤S3具体操作如下：1）：水浴加热下将得到的三七皂苷总提物固体用去离子水恰好溶解，向其中加入氯化钠至3
‑
5wt%，并用碳酸钠调pH至5.0
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6.0，室温下搅拌1
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2h后置于冰浴条件下充分盐析，过滤，得到初次盐析固体；母液回收套用；2）：二次盐析：将上述盐析所得粗品用50
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60℃去离子水溶解，加入氯化钠至3
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5wt%，用氢氧化钠溶液调pH至6.8
‑
7.2，室温下搅拌1
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2 h，置于冰浴条件下充分盐析后过滤，得到二次盐析固体物；母液回收套用。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，还进一步包括如下步骤：在60℃水浴加热下将二次盐析物用醇溶液恰好溶解，用盐酸调pH至2...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐文旭，罗庆伟，王煜，杨文芬，张瑜，李辉，赵云，钱良茂，胡小梅，朱春秋，徐文钊，沈莎莎，洪慧敏，刘来有，蒋春梅，
申请(专利权)人：云南白药集团文山七花有限责任公司，
类型：发明
国别省市：