桑枝叶提取物在作为或制备用于预防或治疗伪狂犬病毒感染药物中的应用制造技术

本发明专利技术属于病毒抑制药物技术领域，具体涉及一种桑枝叶提取物在作为或制备用于预防或治疗伪狂犬病毒感染药物中的应用。桑枝叶醇提物(M4)在有效安全浓度之下(≤4mg/ml)可以抑制伪狂犬病毒感染引起的细胞病变和死亡，对病毒DNA增殖的抑制倍数可以达到1000倍；且对gE蛋白的表达也有显著的抑制作用。蛋白的表达也有显著的抑制作用。蛋白的表达也有显著的抑制作用。

【技术实现步骤摘要】
桑枝叶提取物在作为或制备用于预防或治疗伪狂犬病毒感染药物中的应用


[0001]本专利技术属于病毒抑制药物
，具体涉及一种桑枝叶提取物在作为或制备用于预防或治疗伪狂犬病毒感染药物中的应用。

技术介绍

[0002]伪狂犬病毒(PseudorabiesVirus,PRV)是疱疹病毒科的一种双链DNA囊膜病毒，能感染猪、牛、羊等多种家畜和野生动物，引发以发热、奇痒(猪除外)和脑脊髓炎为主要症状的伪狂犬病。PRV具有典型的疱疹病毒粒子结构，直径一般200nm左右，在电子显微镜下观察呈圆形或者椭圆形。成熟的病毒粒子由外到内主要包括囊膜、蛋白质皮层、核衣壳和双链线状基因组DNA，其中囊膜含有11个功能多样的糖蛋白包括gB、gC、gD等。
[0003]猪是PRV的自然宿主和贮存宿主，受PRV感染后，成年猪出现呼吸道症状并可建立终身性潜伏感染，仔猪出现脑脊髓炎，病死率可达100％，怀孕母猪流产、死胎。2011年PRV强变异毒株在我国出现，不仅给生猪养殖行业造成巨大经济损失，还出现多起感染人的病例，PRV已成为公共卫生和健康养殖领域共同面临的一个重要威胁，抗PRV药物的开发对于PRV的有效防控具有重要意义。

技术实现思路

[0004]针对以上问题，本专利技术目的之一在于提供一种桑枝叶提取物在作为或制备用于预防或治疗伪狂犬病毒感染药物中的应用，且预防或治疗效果显著。
[0005]为了达到上述目的，可以采用以下技术方案：
[0006]本专利技术一方面在于提供一种桑枝叶提取物在作为或制备用于预防或治疗伪狂犬病毒感染药物中的应用。
[0007]具体地，桑树(拉丁学名：MorusalbaL.)，荨麻目桑科桑属植物；桑枝为桑树的桑枝、桑条、嫩桑枝的总称，桑叶是桑科植物桑的干燥叶。现代药理学研究表明，桑枝叶的活性成分如鞣质、各种游离的糖类、生物碱类、黄酮类、甾醇类等对单纯疱疹病毒(HSV)、甲型H1N1流感病毒(FluA
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H1N1)、冠状病毒(Coronavirus)等多种病毒均有较好的抑制作用。
[0008]本专利技术另一方面提供一种桑枝叶提取物在作为或制备用于预防或治疗伪狂犬病毒感染药物中的应用。
[0009]本专利技术再一方面提供一种桑枝叶提取物在作为或制备用于抑制伪狂犬病毒复制的药物中的应用。
[0010]本专利技术再一方面提供一种桑枝叶提取物在作为或制备用于阻断伪狂犬病毒对宿主细胞侵染的药物中的应用。
[0011]本专利技术再一方面提供一种用于预防或治疗伪狂犬病毒感染药物，其包括桑枝叶提取物。
[0012]本专利技术再一方面提供一种用于抑制伪狂犬病毒复制的药物，其包括桑枝叶提取
物。
[0013]本专利技术再一方面提供一种用于阻断伪狂犬病毒对宿主细胞侵染的药物，其包括桑枝叶提取物。
[0014]本专利技术再一方面提供一种抑制伪狂犬病毒复制的方法，其包括：将桑枝叶提取物或包含桑枝叶提取物的药物与伪狂犬病毒共同孵育后感染细胞。
[0015]需要说明的是，上述应用和上述药物以及上述抑制伪狂犬病毒复制的方法中，桑枝叶提取物优选桑枝叶醇提取物。具体地，在一些实施例中，以IPEC
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J2为细胞模型，检测了桑枝叶醇提物对伪狂犬病毒感染细胞是否有抑制作用，并与桑枝叶水提物(M3)做了比较，结果显示，桑枝叶醇提物的抑制效果优于桑枝叶水提物。
[0016]需要说明的是，在一些实施例中，利用超高效液相色谱串联质谱(UPLC
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MS/MS)对M4中的代谢物进行了定性定量分析，一共在M4样品中鉴定得到了11类代谢物，共1218个，其中酚酸类物质当中的绿原酸相对含量最高；具体地，11类代谢物代谢物通过检索标准数据库比对得知，其中，黄酮类占比约28.08％；酚酸类占比约18.72％；脂质类占比约11.41％；其它类占比约9.69％；有机酸类占比约5.66％；生物碱类占比约5.50％；木脂素和香豆素类占比约6.65％；核苷酸及其衍生物类占比约4.60％；氨基酸及其衍生物类占比约6.24％；萜类占比约3.20％；醌类占比约0.25％。
[0017]需要说明的是，桑枝叶提取物分为桑枝叶醇提取物(M4)和桑枝叶水提取物(M3)，均由无血清DMEM培养基溶解而成；上述应用和上述药物以及上述抑制伪狂犬病毒复制的方法中，桑枝叶醇提取物(M4)是按照本领域所已知的醇提取方法对桑枝叶提取而得；同样地，桑枝叶水提取物(M3)也是按照本领域所已知的水提取方法对桑枝叶提取而得。
[0018]需要说明的是，上述应用和药物中以及上述抑制伪狂犬病毒复制的方法中，上述提取物的有效浓度为0.5mg/ml
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4mg/ml；应当理解的是，有效浓度指的是能够预防或治疗伪狂犬病毒感染的浓度；或能够抑制伪狂犬病毒复制的浓度；或可以阻断伪狂犬病毒对宿主细胞侵染的浓度；qPCR和蛋白免疫印迹分析也表明0.5mg/ml
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4mg/ml的M4对PRV的DNA复制和gE蛋白的表达均有抑制作用，M4对PRV的抑制效果与浓度成正相关，4mg/mL时抑制效果最强。
[0019]需要说明的是，上述药物中，除了包含桑枝叶提取物外，还可以包括一些药用的辅料或稀释剂，药用辅料或稀释剂可以将药物制成各种剂型的药物，比如片剂、乳剂或者颗粒剂型等，可以根据具体需要进行添加辅料或稀释剂。
[0020]需要说明的是，上述抑制伪狂犬病毒复制的方法中，除了将M4和病毒先共孵育后再一起加入细胞的方式可以抑制伪狂犬病毒复制外，还可以是先加入M4后感染PRV和M4和PRV先共孵育再加入细胞的方式；通过IFA检测和qPCR测定发现M4的三种加入方式均不同程度的抑制了PRV的增殖并且降低了PRVgE蛋白的表达，其中，对PRV复制抑制效果最明显的方式是M4和病毒先共孵育后再一起加入细胞，抑制率约为99.42％。
[0021]本专利技术有益效果至少包括：桑枝叶醇提物(M4)在有效安全浓度之下(≤4mg/ml)可以抑制伪狂犬病毒感染引起的细胞病变和死亡，对病毒DNA增殖的抑制倍数可以达到1000倍；且对gE蛋白的表达也有显著的抑制作用。
附图说明
[0022]图1为桑枝叶提取物溶液M3不同浓度对细胞活性影响的实验结果图；
[0023]图2为桑枝叶提取物溶液M4不同浓度对细胞活性影响的实验结果图；
[0024]图3为桑枝叶提取物溶液M3和M4在抑制PRV复制48h后在显微镜下对细胞CPE的观察结果图；
[0025]图4为桑枝叶提取物溶液M3在不同时间点PRVDNA拷贝数；
[0026]图5为桑枝叶提取物溶液M4在不同时间点PRVDNA拷贝数；
[0027]图6为桑枝叶醇提物溶液M4不同浓度PRVDNA拷贝数；
[0028]图7为桑枝叶醇提物溶液M4不同浓度PRVgE蛋白表达量；
[0029]图8是PRV
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M4加入方式PRVDNA拷贝数；
[0030]图9为M4
→
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.桑枝叶提取物在作为或制备用于预防或治疗伪狂犬病毒感染药物中的应用。2.桑枝叶提取物在作为或制备用于抑制伪狂犬病毒复制的药物中的应用。3.桑枝叶提取物在作为或制备用于阻断伪狂犬病毒对宿主细胞侵染的药物中的应用。4.根据权利要求1至3中任一所述的应用，其特征在于，桑枝叶提取物为桑枝叶醇提取物。5.用于预防或治疗伪狂犬病毒感染药物，其特征在于，包括桑枝叶提取...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏文康，杨建，刘凡，张晓爱，姚春鹏，廖森泰，贝锦龙，王蕾，
申请(专利权)人：广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所，
类型：发明
国别省市：