本发明专利技术属于食品安全检测领域，本发明专利技术公开了一种结合QuEChERS和柱前衍生前处理测定烟叶中抗蚜威农药残留的方法，具体是烟叶经过提取和QuEChERS净化后，进行柱前衍生，取衍生化合物用液相色谱检验检测，对于复杂基质的抗干扰能力强，方法灵敏度高，准确性和重复性好，前处理更便捷的检测方法。处理更便捷的检测方法。处理更便捷的检测方法。
【技术实现步骤摘要】
一种结合QuEChERS和柱前衍生前处理测定烟叶中抗蚜威农药残留的方法
[0001]本专利技术属于食品安全检测领域，涉及一种结合QuEChERS和柱前衍生前处理测定烟叶中抗蚜威农药残留的方法。
技术介绍
[0002]抗蚜威农药是以甲酸酯为前体化合物合成从而得到的一种农药，灭虫原理是抑制乙酰胆碱酯酶在昆虫体内的活性从而降低昆虫的神经传导功能的一种神经内毒素，具有一定的遗传毒性和细胞毒性。其广泛应用于农业生产，具有灭虫效果明显、选择性高、和残留期短等特点，但是若大量使用而不加以控制，其残留物则会转移到食品中，造成人和动物的中毒，从而危害人类健康和环境污染，因此，国家标准GB2763
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2019《食品安全国家标准食品中农药最大残留限量》对不同蔬菜中抗蚜威农药的限量有相应的规定。
[0003]目前我国对于抗蚜威农药残留量的测定方法主要有：气相色谱法、气相色谱
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质谱法、高效液相色谱－质谱法、柱后衍生－荧光检测器的高效液相色谱法、超临界流体色谱法,其中液质和气质联用仪价格昂贵，在各级地方实验室不适合普及实验成本过高，而气相色谱法由于需要在高温高压的条件下将目标物质气化在进入色谱柱进行分离，而抗蚜威农药有一定的热不稳定性，在高温的碱性条件下会分解，所以气相色谱法也有一定的局限性，现在主流的检测方法和我国现行国家标准GB23200.112
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2018针对植物源性食品中9种氨基甲酸酯类农药及其代谢物残留的测定采用的都是液相色谱
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柱后衍生化法，但是柱后衍生化法由于色谱柱到检测器的过程中还增加了衍生器，所以待测物质还要通过漫长的通路才会进入荧光检测器进行检测，所以会导致仪器死体积过大，进而导致样品扩散致使色谱峰容易变宽及峰型变差，影响对目标物质的定性和定量。而且柱后衍生一般需要衍生试剂大量过载，从而保证充分的衍生反应才能确保定量结果的准确性。还存在衍生试剂大量浪费的情况。
[0004]在前处理方面，常用的有固相萃取法，液
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液萃取法，凝胶渗透色谱法，固相微萃取法等，这些前处理方法和QuEChERS(Quick，Easy，Cheap，Effective，Rugged，Safe)法即为“快速、简易、廉价、有效、稳定、安全”的萃取方法相比存在前处理效率低，耗时，实验成本过高的问题。
[0005]本文通过对平时日常实验的经验总结，结合大量文献的查阅，创新的建立了一种QuEChERS前处理法和柱前衍生法结合高效液相色谱分析烟叶中抗蚜威农药的检测方法。该方法创新的使用柱前衍生法替代以往普遍使用的柱后衍生法，从而不用使用柱后衍生仪，色谱柱也可以使用普通的C18色谱柱，大大降低了实验成本，并且结合QuEChERS前处理，降低了实验难度，减少了实验时间，大大提高工作效率。目前QuEChERS前处理
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柱前衍生法结合高效液相色谱测定烟叶中抗蚜威农药还未见报道，本文着眼于此点开发了此方法。
技术实现思路
[0006](1)拟解决的问题
[0007]本专利技术的目的在于提供一种结合QuEChERS和柱前衍生前处理测定烟叶中抗蚜威农药残留的方法，该方法创新的使用柱前衍生法替代以往普遍使用的柱后衍生法，从而不用使用柱后衍生仪，色谱柱也可以使用普通的C18色谱柱，大大降低了实验成本，并且结合QuEChERS前处理，降低了实验难度，减少了实验时间，大大提高工作效率，前处理简单，方法灵敏度高，重复性好。
[0008](2)本专利技术采用如下技术方案实现
[0009]本专利技术创新的结合了柱前衍生、液相色谱分离理论和荧光检测技术实现了烟叶中抗蚜威农药残留含量的稳定、准确测定。
[0010]具体而言，本专利技术测定烟叶中抗蚜威农药残留含量的方法，包括以下步骤：
[0011]1)烟叶样品震荡提取
[0012]称取10.00g均质完毕样品(市售烟叶)于50ml离心管中，加入1％(v/v)乙酸乙腈溶液10ml和2
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3g NaCl后，振荡提取10min后，于9500r/min离心5min。
[0013]2)QuEChERS净化：
[0014]取上层清液5mL于预先加有200mg PSA和900mg无水硫酸镁(MgSO4)的离心管中，涡旋提取15s，在9500r/min离心5min，取上层提取液2.0ml于试管中，氮气浓缩至近干。
[0015]3)柱前衍生过程：
[0016]取净化好的前处理液，加入(pH＝3)酸化水溶液500μl、250μlOPA/2
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巯基乙醇溶液和250μl0.05 mol/L氢氧化钠水溶液涡旋1min溶解，经0.2μm微孔膜过滤于进样小瓶中,用(pH＝3)酸化水溶液定容1ml，80℃避光水浴加热30min后，衍生完成。
[0017]4)高效液相色谱
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荧光检测器(HPLC
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FLD)分析检测。
[0018]上述步骤1中，所述的震荡提取方法，包括：提取液通过以下方法制备得到：取1ml乙酸溶于100ml乙腈中得到1％(v/v)乙酸乙腈溶液，Nacl的添加量为2
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3g。
[0019]上述步骤2中，所述的QuEChERS净化，包括：QuEChERS净化包的吸附剂填料种类和比例为：PSA 200mg+MgSO4 900 mg作为净化吸附剂。
[0020]上述步骤3中，所述的柱前衍生过程，包括：
[0021](1)(pH＝3)酸化水溶液通过以下方法制备得到：用HCl将500ml净水酸化到pH＝3，并用已校正的pH计进行测定。
[0022](2)0.05mol/L硼酸钠水溶液通过以下方法制备得到：称取19.1g Na2B4O7·
10H2O，完全溶解于1L水中。溶解过程可能会将近1小时。
[0023](3)氢氧化钠水溶液通过以下方法制备得：称取片状NaOH 1g于500mL容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，混合均匀。用0.45μm的滤膜过滤并脱气，滤液储存于棕色瓶中。
[0024](4)OPA/2
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巯基乙醇溶液通过以下方法制备得：取50mg OPA试剂于5mL甲醇中，缓慢旋转使其完全溶解后，转移至一个500mL的容量瓶中，用硼酸钠溶液稀释到刻度并混合均匀，用0.45μm的滤膜过滤并脱气。然后，加入0.5mL 2－巯基乙醇，缓慢旋转直至混合均匀。一旦2
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巯基乙醇加入后，切勿再将溶液脱气，将此溶液置于一个密闭的棕色玻璃储液瓶中，用铝箔包裹避光保存。
[0025](5)氢氧化钠水溶液的添加量为250ul
[0026](6)OPA/2
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巯基乙醇溶液的添加量为250ul
[0027](7)衍生化温度和时间为80℃避光水浴加热30min后
[0028]上述步骤4中，所述的仪器准备为调整各项参数至工作状态：色谱条件EXTEND
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C18色谱柱(本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种结合QuEChERS和柱前衍生前处理测定烟叶中抗蚜威农药残留的方法，其特征在于：先将烟叶样品用1％(v/v)乙酸乙腈溶液震荡提取后，通过QuEChERS前处理除去杂质，取除杂后的前处理液在高温强碱(NAOH)条件下水解，样品水解后与.OPA/2
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巯基乙醇溶液发生衍生化反应，生成具有强荧光吸收的异氮(杂)茚基衍生物，使用高效液相色谱仪
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荧光检测器检测。具体包括以下步骤：步骤1：烟叶样品震荡提取：称取10.00g均质完毕样品(市售烟叶)于50ml离心管中，加入1％(v/v)乙酸乙腈溶液10ml和2
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3g NaCl后，振荡提取10min后，于9500r/min离心5min。步骤2：QuEChERS净化：取上层清液5mL于预先加有200mg PSA和900mg无水硫酸镁(MgSO4)的离心管中，涡旋提取15s，在9500r/min离心5min，取上层提取液2.0ml于试管中，氮气浓缩至近干。步骤3：柱前衍生过程：取净化好的前处理液，分别加入(pH＝3)酸化水溶液500μl、250μlOPA/2
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巯基乙醇溶液和250μl0.05 mol/L氢氧化钠水溶液涡旋1min溶解，经0.2μm微孔膜过滤于进样小瓶中,用(pH＝3)酸化水溶液定容1ml，80℃避光水浴加热30min后，衍生完成。步骤4、高效液相色谱
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荧光检测器(HPLC
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FLD)分析检测。2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，步骤1中，所述的震荡提取方法，包括：提取液通过以下方法制备得到：取1ml乙酸溶于100ml乙腈中得到1％(v/v)乙酸乙腈溶液，Nacl的添加量为2
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3g。3.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，步骤2中，所述的QuEChERS净化，包括：QuEChERS净化包的吸附剂填料种类和比例为：PSA 200mg+MgSO4900 mg作为净化吸附剂。4.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，步骤3中，所述的柱前衍生过程包括：(pH＝3)酸化水溶液通过以下方法制备得到：用HCl将500ml净水酸化到pH＝3，并用已校正的pH计进行测定。5.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，步骤3中，所述的柱前衍生过程包括：0.05mol/L硼酸钠水溶液通过以下方法制备得到：称取19.1g Na2B4O7·
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【专利技术属性】
技术研发人员：王焕琦，王正强，杨金川，
申请(专利权)人：贵州省产品质量检验检测院，
类型：发明
国别省市：
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