一种肝脏淋巴管内皮细胞的分选方法、应用及试剂盒技术

本申请提供了一种肝脏淋巴管内皮细胞的分选方法、应用及试剂盒，方法包括：通过静脉向肝脏注射未标记的LYVE

【技术实现步骤摘要】
一种肝脏淋巴管内皮细胞的分选方法、应用及试剂盒


[0001]本申请涉及细胞分选
，尤其涉及一种肝脏淋巴管内皮细胞的分选方法、应用及试剂盒。

技术介绍

[0002]与其他器官相比，肝脏中的淋巴系统的研究明显滞后。目前没有肝脏淋巴管内皮细胞特异的分子标志物或者标记方法。因为淋巴管显微成像的标志物LYVE
‑
1(lymphatic vessel endothelial hyaluronan receptor 1)和Prox1(Prospero Homeobox 1)分别在肝血窦内皮细胞和肝实质细胞中表达，由于缺少肝脏淋巴管内皮细胞特异性标记方法，难以分选肝脏淋巴管细胞进行功能和状态研究。
[0003]其中，Matthew A.Burchill等人用CD45
‑
CD31
+
PDPN
+
CD146
‑
/low
抗体组合标记小鼠肝脏淋巴管内皮细胞并分选，但这种方法获得的淋巴管内皮细胞在所有细胞中的比例只有96.7％
×
0.4％
×
1.85％＝0.0072％。目前，缺少一种可以高效对肝脏淋巴管内皮细胞进行分选的方法。

技术实现思路

[0004]本申请提供了一种肝脏淋巴管内皮细胞的分选方法、应用及试剂盒，以至少解决现有技术中存在的以上技术问题。
[0005]根据本申请实施例的第一方面，提供了一种肝脏淋巴管内皮细胞分选方法，所述方法包括：通过静脉向肝脏注射未标记的LYVE
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1抗体溶液，使所述未标记的LYVE
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1抗体与肝血窦内皮细胞的LYVE
‑
1抗原结合；从胆总管向所述肝脏高压注射已标记的LYVE
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1抗体溶液，所述已标记的LYVE
‑
1抗体溶液冲破胆管末端，使所述已标记的LYVE
‑
1抗体与肝脏淋巴管内皮细胞的LYVE
‑
1抗原结合；基于所述已标记的LYVE
‑
1抗体对所述肝脏进行细胞分选，获得所述肝脏淋巴管内皮细胞。
[0006]在一可实施方式中，所述高压注射的强度控制在每100～300微升在2～5秒之间完成注射。
[0007]在一可实施方式中，所述基于所述已标记的LYVE
‑
1抗体对所述肝脏进行细胞分选，获得所述肝脏淋巴管内皮细胞，包括：对所述肝脏进行处理，获得单细胞悬液；对所述单细胞悬液进行细胞分选，获得所述肝脏淋巴管内皮细胞。
[0008]在一可实施方式中，所述LYVE
‑
1抗体通过磁珠进行偶联。
[0009]在一可实施方式中，所述对所述单细胞悬液进行细胞分选，获得所述肝脏淋巴管内皮细胞，包括：通过磁力架对所述单细胞悬液进行细胞分选，获得所述肝脏淋巴管内皮细胞。
[0010]在一可实施方式中，所述LYVE
‑
1抗体通过荧光分子进行标记。
[0011]在一可实施方式中，所述对所述单细胞悬液进行细胞分选，获得所述肝脏淋巴管内皮细胞，包括：向所述单细胞悬液加入荧光分子标记的指定抗体，获得抗体标记的单细胞
悬液；对所述抗体标记的单细胞悬液进行细胞分选，获得所述肝脏淋巴管内皮细胞；其中，所述指定抗体包括CD45、CD31和CD146，任意两抗体标记的荧光分子不同。
[0012]在一可实施方式中，在对所述单细胞悬液进行流式细胞分选，获得所述肝脏淋巴管内皮细胞之前，所述方法还包括：向所述单细胞悬液中加入死细胞染料，对单细胞悬液中的死细胞进行标记；利用死细胞染料对所述单细胞悬液进行细胞分选，筛除单细胞悬液中的死细胞。
[0013]在一可实施方式中，所述对所述肝脏进行处理，获得单细胞悬液，包括：对所述肝脏的肝被膜和肝实质进行去除，获得肝脏脉管；利用胶原酶、蛋白酶和DNA酶的混合液对所述肝脏脉管进行消化，获得单细胞悬液。
[0014]在一可实施方式中，所述利用胶原酶、蛋白酶和DNA酶的混合液对所述肝脏脉管进行消化，获得单细胞悬液，包括：将胶原酶I、胶原酶Ⅳ、中性蛋白酶和DNaseⅠ按照质量比5～15：1～5：2～8：0.1～0.5进行混合，获得混合液；将所述肝脏脉管分段加入所述混合液中，30～40℃水浴加热消化10～30分钟，对吹打细胞至肝脏脉管完全消化；将肝脏脉管完全消化后的混合液依次进行过滤、离心和重悬处理，获得所述单细胞悬液。
[0015]根据本申请实施例的第二方面，提供了一种根据上述可实施方式中任一项所述的方法制备的肝脏淋巴管内皮细胞。
[0016]根据本申请实施例的第三方面，提供了一种根据上述可实施方式中任一项所述的肝脏淋巴管内皮细胞在肝脏淋巴管内皮细胞功能性研究中的应用。
[0017]根据本申请实施例的第四方面，提供了一种用于分选肝脏淋巴管内皮细胞的试剂盒，所述试剂盒包括LYVE
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1抗体，所述试剂盒用于实施上述可实施方式中任一项所述的方法。
[0018]本申请实施例提供的肝脏淋巴管内皮细胞的分选方法、应用及试剂盒，通过静脉注射未标记的LYVE
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1抗体溶液，然后再利用胆总管向肝脏高压注射已标记的LYVE
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1抗体溶液，使未标记的LYVE
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1抗体与肝血窦内皮细胞结合，使已标记的LYVE
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1抗体与肝脏淋巴管内皮细胞结合，获得特异性标记的肝脏淋巴管，应用这种方式对肝脏淋巴管内皮细胞进行分选，具有细胞得率高的特点。
[0019]应当理解，本部分所描述的内容并非旨在标识本申请的实施例的关键或重要特征，也不用于限制本申请的范围。本申请的其它特征将通过以下的说明书而变得容易理解。
附图说明
[0020]通过参考附图阅读下文的详细描述，本申请示例性实施方式的上述以及其他目的、特征和优点将变得易于理解。在附图中，以示例性而非限制性的方式示出了本申请的若干实施方式，其中：
[0021]在附图中，相同或对应的标号表示相同或对应的部分。
[0022]图1示出了本申请实施例一种肝脏淋巴管内皮细胞的分选方法的实现流程示意图。
具体实施方式
[0023]为使本申请的目的、特征、优点能够更加的明显和易懂，下面将结合本申请实施例
中的附图，对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而非全部实施例。基于本申请中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。
[0024]图1示出了本申请实施例一种肝脏淋巴管内皮细胞的分选方法的实现流程示意图。
[0025]参见图1，根据本申请实施例的第一方面，提供了一种肝脏淋巴管内皮细胞的分选方法，方法包括：操作101，通过静脉向肝脏注射未标记的LYVE
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1抗体溶液，使未标记的LYVE
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种肝脏淋巴管内皮细胞分选方法，其特征在于，所述方法包括：通过静脉向肝脏注射未标记的LYVE
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1抗体溶液，使所述未标记的LYVE
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1抗体与肝血窦内皮细胞的LYVE
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1抗原结合；从胆总管向所述肝脏高压注射已标记的LYVE
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1抗体溶液，所述已标记的LYVE
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1抗体溶液冲破胆管末端，使所述已标记的LYVE
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1抗体与肝脏淋巴管内皮细胞的LYVE
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1抗原结合；基于所述已标记的LYVE
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1抗体对所述肝脏进行细胞分选，获得所述肝脏淋巴管内皮细胞。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述高压注射的强度控制在每100～300微升在2～5秒之间完成注射。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述基于所述已标记的LYVE
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1抗体对所述肝脏进行细胞分选，获得所述肝脏淋巴管内皮细胞，包括：对所述肝脏进行处理，获得单细胞悬液；对所述单细胞悬液进行细胞分选，获得所述肝脏淋巴管内皮细胞。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述LYVE
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1抗体通过磁珠进行偶联。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述对所述单细胞悬液进行细胞分选，获得所述肝脏淋巴管内皮细胞，包括：通过磁力架对所述单细胞悬液进行细胞分选...

【专利技术属性】
技术研发人员：张智红，黄松林，骆清铭，
申请(专利权)人：华中科技大学，
类型：发明
国别省市：