适用于NK细胞的培养基组合物及培养方法技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，具体而言，涉及一种适用于NK细胞的培养基组合物及培养方法。该培养基组合物包含基础培养基、3v/v％～10v/v％的血清、IL2、IL18和非细胞因子类促炎因子。IL18和非细胞因子类促炎因子。IL18和非细胞因子类促炎因子。

【技术实现步骤摘要】
适用于NK细胞的培养基组合物及培养方法


[0001]本专利技术涉及生物
，具体而言，涉及一种适用于NK细胞的培养基组合物及培养方法。

技术介绍

[0002]自然杀伤细胞(natural killer cell，NK细胞)是重要的淋巴细胞亚群，在人体的先天免疫系统中起着重要的作用，人成熟NK纸胞的主要来源是外周血。早在70年代，科研人员就对它们进行了描述，但直到最近的15年，人们才逐渐了解NK细胞在帮助抗击癌症和其它疾病方面的复杂性和治疗潜力。由于NK细胞仅占外周血单个核细胞的5％～10％，因此NK细胞的纯化及体外扩增是对NK细胞基础与临床研究的重要方法学基础。
[0003]但是由于来源于外周血的NK细胞难以在体外大量扩增，而且从外周血中分离纯化NK细胞有一定的技术难度，难以避免淋巴细胞的污染，无法获取大量均一的NK细胞并达到临床所需的标准，故NK细胞还不能广泛应用于临床；另外，在有些病例中，NK细胞介导的抗肿瘤反应弱，可能与NK细胞杀伤能力、在体内存活能力差或向肿瘤部位迁移受限等因素有关。
[0004]因此，总得来说，目前NK细胞的纯化培养效果仍不够理想，不能满足实际应用。

技术实现思路

[0005]本专利技术提供一种适用于NK细胞的培养基组合物，包含基础培养基、3v/v％～10v/v％的血清、IL2、IL18和非细胞因子类促炎因子。
[0006]根据本专利技术的再一方面，还提供一种适用于NK细胞的培养基组合套件，其包括如上所述的适用于NK细胞的培养基组合物以及CD3抗体。
[0007]根据本专利技术的再一方面，还提供一种NK细胞培养方法，其包括如下步骤：
[0008]a)将单个核细胞接种含CD3抗体的容器中，并使用如上所述的NK细胞的培养基组合物培养3～5天；
[0009]b)在不含CD3抗体的容器中，使用如上所述的NK细胞的培养基组合物培养9～11天。
[0010]本专利技术所提供的培养基组合物，成分简单明确，培养得到的NK细胞纯度更高，且具有更快的增殖效率与很强的细胞杀伤能力，特别是本专利技术意外发现，添加了血清淀粉样蛋白A的组别能够显著提高NK细胞的杀伤能力。
附图说明
[0011]为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0012]图1为NK细胞培养的光镜代表图；A为实施例1；B为实施例2；C为对比例；
[0013]图2为本专利技术实施例1的流式细胞分析结果；
[0014]图3为本专利技术实施例2的流式细胞分析结果；
[0015]图4为对比例的流式细胞分析结果；
[0016]图5为不同实施方式所对应的细胞增殖曲线；
[0017]图6为不同实施方式所对应的NK细胞的杀伤能力检测。
具体实施方式
[0018]现将详细地提供本专利技术实施方式的参考，其一个或多个实例描述于下文。提供每一实例作为解释而非限制本专利技术。实际上，对本领域技术人员而言，显而易见的是，可以对本专利技术进行多种修改和变化而不背离本专利技术的范围或精神。例如，作为一个实施方式的部分而说明或描述的特征可以用于另一实施方式中，来产生更进一步的实施方式。
[0019]除非另有说明，用于披露本专利技术的所有术语(包括技术和科学术语)的意义与本专利技术所属领域普通技术人员所通常理解的相同。通过进一步的指导，随后的定义用于更好地理解本专利技术的教导。本文中在本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本专利技术。
[0020]本文所使用的术语“和/或”、“或/和”、“及/或”的选择范围包括两个或两个以上相关所列项目中任一个项目，也包括相关所列项目的任意的和所有的组合，所述任意的和所有的组合包括任意的两个相关所列项目、任意的更多个相关所列项目、或者全部相关所列项目的组合。需要说明的是，当用至少两个选自“和/或”、“或/和”、“及/或”的连词组合连接至少三个项目时，应当理解，在本申请中，该技术方案毫无疑问地包括均用“逻辑与”连接的技术方案，还毫无疑问地包括均用“逻辑或”连接的技术方案。比如，“A及/或B”包括A、B和A+B三种并列方案。又比如，“A，及/或，B，及/或，C，及/或，D”的技术方案，包括A、B、C、D中任一项(也即均用“逻辑或”连接的技术方案)，也包括A、B、C、D的任意的和所有的组合，也即包括A、B、C、D中任两项或任三项的组合，还包括A、B、C、D的四项组合(也即均用“逻辑与”连接的技术方案)。
[0021]本专利技术中所述的符号“％”，如未特别指明，对于总物料是固体时，一般是指重量/重量的百分比；对于总物料是液体时，一般是指重量/体积的百分比。当然，对于总物料是液体并且溶质是液体时，表征该液态溶质的百分比一般是指体积/体积的百分比。
[0022]本专利技术中所使用的术语“含有”、“包含”和“包括”是同义词，其是包容性或开放式的，不排除额外的、未被引述的成员、元素或方法步骤。
[0023]本专利技术中用端点表示的数值范围包括该范围内所包含的所有数值及分数，以及所引述的端点。
[0024]本专利技术中涉及浓度数值，其含义包括在一定范围内的波动。比如，可以在相应的精度范围内波动。比如2％，可以允许
±
0.1％范围内波动。对于数值较大或无需过于精细控制的数值，还允许其含义包括更大波动。比如100mM，可以允许
±
1％、
±
2％、
±
5％等范围内的波动。
[0025]本专利技术中，涉及“多个”、“多种”等描述，如无特别限定，指在数量上指大于等于2。
[0026]本专利技术中，以开放式描述的技术特征中，包括所列举特征组成的封闭式技术方案，
也包括包含所列举特征的开放式技术方案。
[0027]本专利技术中，“优选”、“更好”、“更佳”、“为宜”仅为描述效果更好的实施方式或实施例，应当理解，并不构成对本专利技术保护范围的限制。本专利技术中，“可选地”、“可选的”、“可选”，指可有可无，也即指选自“有”或“无”两种并列方案中的任一种。如果一个技术方案中出现多处“可选”，如无特别说明，且无矛盾之处或相互制约关系，则每项“可选”各自独立。
[0028]本专利技术的第一方面涉及适用于NK细胞的培养基组合物，其包含基础培养基、3v/v％～10v/v％的血清、IL2、IL18和非细胞因子类促炎因子。
[0029]本专利技术首次发现在NK细胞培养过程中，添加非细胞因子类促炎因子(特别是LPS和SSA)配合IL2、IL18和CD3抗体，能显著提升NK细胞的纯度和增殖能力，并提升NK细胞的杀伤能力。
[0030]在本专利技术中，培养基组合物可以以溶液的方式进行包装，也可以干粉组合物(例如冻干粉或喷雾干燥粉)的形式进行包装，使用时再进本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.适用于NK细胞的培养基组合物，其特征在于，包含基础培养基、3v/v％～10v/v％的血清、IL2、IL18和非细胞因子类促炎因子。2.根据权利要求1所述的适用于NK细胞的培养基组合物，其特征在于，所述非细胞因子类促炎因子包括脂多糖和/或血清淀粉样蛋白A。3.根据权利要求2所述的适用于NK细胞的培养基组合物，其特征在于，所述非细胞因子类促炎因子的添加量为0.1～1μg/mL。4.根据权利要求1～3任一项所述的适用于NK细胞的培养基组合物，其特征在于，所述IL2的添加量为500～1000U/mL。5.根据权利要求1～3任一项所述的适用于NK细胞的培养基组合物，其特征在于，所述IL18的添加量为200～600U/mL。6.根据权利要求1～3任一项所述的适用于NK细胞的培养基组合物，其特征在于，所述基础培养基选自X VIVO
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15、RPMI1640、AIM
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【专利技术属性】
技术研发人员：牟春琳，王秀娥，秦臻，李政楠，张雅楠，武嘉钊，
申请(专利权)人：天津华域药业有限公司华域生命科技天津有限公司，
类型：发明
国别省市：