一种量子点荧光免疫层析法肿瘤标志物（G3BP）试剂盒及其检测方法技术

本发明专利技术公开了一种量子点荧光免疫层析法肿瘤标志物(G3BP)试剂盒及其检测方法。本发明专利技术的定量检测G3BP荧光免疫层析方法是利用量子点的优良荧光特性，结合双色标记技术及免疫层析技术，在优化试纸条各组成部件基础上，实现的荧光定量检测。与常规胶体金免疫层析方法相比，本发明专利技术具有标记稳定性好、非特异性低、灵敏度高、线性范围宽以及定量准确的优势。本发明专利技术试剂盒对G3BP进行的定量检测，可同时检测全血、血清及血浆样品，适用于各级医院，特别有助于在基层医院及诊所的广泛推广。于在基层医院及诊所的广泛推广。于在基层医院及诊所的广泛推广。

【技术实现步骤摘要】
一种量子点荧光免疫层析法肿瘤标志物(G3BP)试剂盒及其检测方法


[0001]本专利技术涉及医学检验领域，特别涉及一种利用肿瘤标志物(G3BP)相关的免疫反应及荧光免疫层析技术，以早期、敏感、特异的定量检测炎症。

技术介绍

[0002]G3BP是1996年在法国RhonePoulencRorer实验室于由ParkerF等从生长状态的中国仓鼠肺成纤维细胞中首次克隆它是一种位于细胞质中RasGAPSH3结构域特异性结合蛋白。参与Ras下游信号通路有研究发现RASGAP的SH3结构域对于信号转导途径发挥作用是必不可少的，而且还能以RAS非依赖方式调节Rho介导的细胞骨架重建以及细胞凋亡。
[0003]G3BP是一种能够与Ras
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GAP结构域特异性结合的蛋白。RasGAP是Ras活性的负调控蛋白，同时又参与Ras信号的传递，与细胞增殖，迁移和凋亡相关。研究发现只有在增殖的细胞中才能免疫共沉淀得到G3BP与RasGAP复合物。该结果提示，当Ras处于活性状态时，G3BP与RasGAP结合。同样有研究发现只有在生长的细胞中才能免疫共沉淀得到G3BP与RasGAP，并且依赖于Ras的活化状态。这进一步提示G3BP可能通过GAP参与Ras活性调节，而且参与Ras的信号传导。基于以上认识，我们认为G3BP可能是一个潜在的肿瘤治疗靶点，阻断RasGAP与G3BP的结合可能是一个新的肿瘤治疗策略。同时，已有许多证据表明，G3BP参与多种细胞信号途径和RNA代谢；在多种肿瘤组织和细胞中过量表达。因此，G3BP可作为肿瘤标志物检测的重要指标之一。
[0004]重庆大学王贵学；李天函；邱菊辉申请了《一种G3bp2多肽疫苗及应用》专利，申请号：201910486071.X，申请日：2019.06.05。具体涉及一种G3bp2多肽疫苗及其应用。本专利技术提供了一种皮下免疫注射的G3bp2多肽疫苗，其可以刺激小鼠体内产生大量的抗G3bp2蛋白的特异性抗体，降低血液中炎症因子水平，能够有效抑制动脉粥样硬化的发展过程，为目前动脉粥样硬化的治疗提供新的靶标和途径。该专利所申请中涉及G3BP，但申请保护内容、方法均与本专利不同。
[0005]中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)孙英杰、丁铲、谭磊等人申请了《一种G3BP1重组慢病毒载体及其应用》，申请号：202010230130.X，申请日：202010230130.X。本专利技术提供了一种G3BP1重组慢病毒载体及其应用，所述重组慢病毒载体包括插入有外源G3BP1基因的慢病毒载体；所述慢病毒载体包括pLenti
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CMV
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GFP
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EF1a
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Puro。本专利技术基于人源G3BP1基因和载体pLenti
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CMV
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GFP
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EF1a
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Puro，扩增了人源G3BP1基因DNA序列，成功构建pLenti
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GFP
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G3BP1重组慢病毒载体，并利用慢病毒包装系统成功构建稳定表达GFP
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G3BP1蛋白的HeLa细胞系，在探究应激刺激调控SG形成机制方面具有重要意义。该专利所申请中涉及G3BP，但申请保护内容、方法均与本专利不同。
[0006]中国人民解放军军事科学院军事医学研究院张学敏、李涛、周涛等申请了《一种cGAMP生物合成方法》，申请号：201811338217.8，电请日：2018.11.12。本专利技术公开了一种
cGAMP生物合成方法。本专利技术提供了一种合成cGAMP的方法，为用核苷转移酶cGAS和蛋白G3BP1催化反应缓冲液中的ATP、GTP和DNA，收集反应产物，即得到合成的cGAMP；所述反应缓冲液包括ATP、GTP和DNA。本专利技术的实验证明，蛋白G3BP1能促进核苷转移酶cGAS催化ATP、GTP和DNA合成cGAMP，与已报道的cGAS催化ATP、GTP和DNA合成cGAMP方法相比，能够显著提高cGAMP的合成效率。该专利所申请中涉及G3BP，但申请保护内容、方法均与本专利不同。
[0007]阿文蒂斯药物股份有限公司F
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帕克尔、M
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肯戈斯博格、M
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杜啻斯尼、I
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巴拉特申请了《抗G3BP蛋白的单克隆抗体及应用，申请号：199807417.9电请日：1999.06.17。本专利技术涉及抗G3BP蛋白的单克隆抗体和产生它们的细胞系。本专利技术还涉及所述抗体或其衍生物在制备药物和诊断试剂中的应用。其中提出权利要求1“能在不同类型的肿瘤细胞中诱导细胞凋亡的抗G3BP蛋白的单克隆抗体，其能够识别位于G3BP蛋白22
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34位和42
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55位氨基酸的表位。”和权利要求8“1
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2之任一的抗体用于制备诊断试剂的应用。”。该专利所申请中涉及G3BP，尤其是G3B抗体的制备，但申请保护内容、方法均与本专利不同。其中限制G3BP在诊断试剂的应用，没有给出具体领域和方法，而我们申请的是应用量子点荧光免疫层析法来制备一种量子点荧光免疫层析法肿瘤标志物(G3BP)试剂盒及其检测方法。
[0008]目前，多采用化学发光法、酶联免疫吸附法及胶体金免疫层析法等测定血清中的待测物。但化学发光法对技术要求高，不易在临床实验室中进行常规开展；酶联免疫吸附法操作复杂，检测耗时长；胶体金免疫层析法虽然具有样品用量少，简便快速，便宜的优势，然而当遇到某些样品中目标分析物含量较低时，胶体金的颜色将很浅，很难用肉眼来判断结果，容易出现误判，灵敏度低。
[0009]量子点是一种纳米级别的半导体，通过对这种纳米半导体材料施加一定的电场或光压，它们便会发出特定频率的光，而发出的光的频率会随着这种半导体的尺寸的改变而变化，因而通过调节这种纳米半导体的尺寸就可以控制其发出的光的颜色，由于这种纳米半导体拥有限制电子和电子空穴(Electron hole)的特性，这一特性类似于自然界中的原子或分子，因而被称为量子点。
[0010]量子点具有如下特性：
[0011](1)量子点的发射光谱可以通过改变量子点的尺寸大小来控制。通过改变量子点的尺寸和它的化学组成可以使其发射光谱覆盖整个可见光区。以CdTe量子为例，当它的粒径从2.5nm生长到4.0nm时，它们的发射波长可以从510nm红移到660nm。而硅量子点等其他量子点的发光可以到近红外区。
[0012](2)量子点具有很好的光稳定性。量子点的荧光强度比最常用的有机荧光材料“罗丹明6G”高20倍，它的稳定性更是“罗丹明6G”的100倍以上。因此，量子点可以对标记的物体进行长时间的观察，这也为研究细胞中生物分子之间长期相互作用提供了有力的工具。一般来讲，共价键型的量子点(如硅量子点)比离子键型的量子点具有更好的光稳定性。
[0013](3)量子点具有宽的激发谱和窄的发射谱。使用同一激发本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种量子点荧光免疫层析法肿瘤标志物(G3BP)试剂盒及其检测方法，包括卡壳(12)、荧光免疫层析试纸条及缓冲液，其特征在于，所述卡壳(12)为荧光免疫层析试纸条的外部壳结构，包括上样孔(10)、视窗(11)、底板基垫(7)；所述荧光免疫层析试纸条包括样品垫(1)、标记垫(2)、层析膜(4)、吸水垫(5)、底板(6)和底板基垫(7)其中样品垫(1)、标记垫(2)、层析膜(4)和吸水垫(5)搭载于底板(6)之上，样品垫(1)位于上样孔(10)的下方，且连接于标记垫(2)，标记垫(2)连接于层析膜(4)，层析膜(4)上固定有两条质控带(9)和定量带(8)，且质控带(9)位于定量带(8)的两侧，层析膜(4)位于视窗(11)的下方，层析膜(4)连接于吸水垫(5)，底板基垫(7)位于底板(6)底部中上部(卡壳面视窗(11)方向端)；所述标记垫上固定有抗体修饰的量子点和质控分子修饰的量子点，所述抗体修饰的量子点按照以下方法制备：步骤1)静电吸引法或用化学交联或生物分子间特异性作用将肿瘤标志物(G3BP)的特异性抗体连接到量子点表面，得到抗体修饰的量子点，所述抗体修饰的量子点的发射波长范围为500～1500nm；步骤2)将步骤1)得到的抗体修饰的量子点固定在标记垫上，且标记垫上同时固定有质控分子修饰的量子点，所述质控分子修饰的量子点的发射波长与步骤1)得到的抗体修饰的量子点的发射波长不同，且波长范围为510～1500nm，在层析膜上分别设有定量带和质控带，其中质控带固定有能与所述质控分子特异性结合的生物分子，定量带固定有对应肿瘤标志物(G3BP)的与步骤1)所述特异性抗体不同抗原决定簇的特异性抗体；步骤3)以样品垫、标记垫、层析膜、吸水垫和底板构建成荧光免疫层析试纸条，其中所述层析膜为弱荧光层析膜，底板为弱或不含荧光特性；步骤4)试纸条免疫层析后，检测定量带和质控带的荧光信号强度，并以质控带荧光信号强度校正定量带的荧光信号强度，进而实现肿瘤标志物(G3BP)的定量检测。2.根据权利要求1所述质控分子修饰的量子点的发射波长与步骤1)得到的抗体修饰的量子点的发射波长不同，且波长范围为500～1500nm，在层析膜上分别设有定量带和质控带，其中质控带固定有能与所述质控分子特异性结合的生物分子，定量带固定有对应肿瘤标志物(G3BP)的与步...

【专利技术属性】
技术研发人员：温天文，张亚琼，巫军，张建业，袁学军，张旭雯，
申请(专利权)人：江苏科兴诺生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：