一种栎叶槲蕨匍匐茎组织培养方法技术

本发明专利技术公开了一种栎叶槲蕨匍匐茎组织培养方法，包括如下步骤：获得外植体并消毒；外植体接种，萌芽后转入启动诱导培养基培养，团块增多，将团块分小，接入增殖扩繁培养基中培养；将上一步所得团块进行壮苗生根培养，达到出货标准。本发明专利技术的优点包括：采用匍匐茎作为外植体，能够高效量产栎叶槲蕨组培苗，成活率高，组培苗出货标准好。培苗出货标准好。培苗出货标准好。

【技术实现步骤摘要】
一种栎叶槲蕨匍匐茎组织培养方法


[0001]本专利技术涉及一种植物组织培养
，尤其涉及栎叶槲蕨的组织培养技术。

技术介绍

[0002]栎叶槲蕨Drynaria quercifolia，槲蕨科槲蕨属，多年生附生草本植物，根状茎粗壮有绒毛，长而横走，具有狭翅的叶柄，叶片羽状深裂，裂片互生，阔披针形，厚纸质，无毛，暗绿色，孢子囊群覆盖在叶背，成小圆状。栎叶槲蕨附生于树上、石壁上，性喜温暖阴湿环境，抗旱能力强。
[0003]栎叶槲蕨繁殖方式一般是分株繁殖，选取栎叶槲蕨健壮的根状茎，每20
‑
30厘米左右截断作为一个繁殖条，繁殖条要保留健康正常的叶片，一般情况下，切口无需任何消毒处理。然后用铁线或其他东西直接将繁殖条绑缚在树干或岩石上即可，注意绑缚力度适中，松紧适度，待植株完全贴附在附主后可解开。此种繁殖方式不适合量产。因此，研发一种栎叶槲蕨组织培养方法对实现栎叶槲蕨量产是具有意义的。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种栎叶槲蕨匍匐茎组织培养方法，以解决现有技术中栎叶槲蕨不能量产的问题。
[0005]为了达到上述目的本专利技术采用如下技术方案：
[0006]一种栎叶槲蕨匍匐茎组织培养方法，包括如下步骤：
[0007](1)获得外植体并消毒；
[0008](2)外植体接种，其接种培养基成分包含：MS、3.0mg/L 6
‑
BA、30g/L蔗糖、6.0g/L卡拉胶，pH值为6.0
‑
6.2；/>[0009](3)萌芽后转入启动诱导培养基培养，团块增多，启动诱导培养基成分包括：MS、1.0
‑
3.0mg/L BA、30g/L蔗糖，6.0g/L卡拉胶，pH值为6.0
‑
6.2；
[0010](4)将上一步得到的愈伤团块分小，接入增殖扩繁培养基中培养，增殖扩繁培养基成分包括：MS、0.2
‑
0.5mg/L NAA、30g/L蔗糖，6.0g/L卡拉胶，pH值6.0
‑
6.2，
[0011]或，增殖扩繁培养基成分包括：MS、0.2
‑
0.5mg/L IBA、30g/L蔗糖，6.0g/L卡拉胶，pH值6.0
‑
6.2；
[0012](5)将上一步所得团块进行壮苗成苗培养，使用壮苗成苗培养基1进行培养，或交替使用壮苗成苗培养基1和壮苗成苗培养基2进行培养，
[0013]壮苗成苗培养基1的成分包括：MS、0.2g/L AC、30g/L蔗糖，6.0g/L卡拉胶，pH调至6.0
‑
6.2；
[0014]壮苗成苗培养基2的成分包括；1/2MS、1.0g/L AC、30g/L蔗糖，6.0g/L卡拉胶，pH调至6.0
‑
6.2；
[0015](6)生根培养，达到出货标准，使用生根培养基1进行生根培养，或交替使用生根培养基1和生根培养基2进行培养，
[0016]生根培养基1成分包括：MS、0.2
‑
1.0g/L AC、30g/L蔗糖，6.0g/L卡拉胶，pH调至6.0
‑
6.2；
[0017]生根培养基2成分包括：1/2MS、1.0g/L AC、30g/L蔗糖，6.0g/L卡拉胶，pH调至6.0
‑
6.2。
[0018]进一步地，所述步骤(1)中获得外植体过程包括：
[0019]首先选择生长健壮、无病虫害、遗传性状纯正的母株，并使植物表面干爽；切下匍匐茎作外植体，去除匍匐茎表面的绒毛；
[0020]外植体消毒过程包括：
[0021]外植体为匍匐茎，将其切成2
‑
3厘米长的小段，75％酒精浸泡25
‑
35S，升汞8
‑
10分钟，冲洗5
‑
6遍无菌水。
[0022]进一步地，所述步骤(2)中，培养条件是22
‑
28℃，1000
‑
3000lx，12h光/12h暗，培养30
‑
40天。
[0023]进一步地，所述步骤(3)中，培养条件是22
‑
28℃，光照1000
‑
3000LX，12h光/12h暗，转接培养周期是40
‑
60天，连续转接培养使愈伤团块增多。
[0024]进一步地，所述步骤(4)中，增殖扩繁培养基成分包含：MS、0.2mg/L NAA、30g/L蔗糖，6.0g/L卡拉胶，pH值6.0
‑
6.2，培养条件是25
±
1℃，光照1000
‑
3000LX，12h光/12h暗；转接周期42天；
[0025]转接时的切割要求：
[0026]将长成颗粒状的、浅绿色的团块分小，接入新鲜的增殖扩繁培养基中，重复上述步骤培养，
[0027]在此阶段，可视生产需要挑选长成薄片状的、深绿色的团块和/或一部分颗粒状的、浅绿色的团块往组培苗方向培养，转接新鲜的增殖扩繁培养基进行培养，直到成为丛生芽，再接入壮苗成苗的培养基；另一部分颗粒状的、浅绿色的团块留作库存，转接新鲜的增殖扩繁培养基进行培养，转接时的切割要求是长成薄片状的、深绿色的团块淘汰掉，将长成颗粒状的、浅绿色的团块分小，接入新鲜的增殖扩繁培养基中，重复上述步骤培养。
[0028]进一步地，所述步骤(4)中，增殖扩繁培养基成分包含：MS、0.2
‑
0.5mg/L NAA、30g/L蔗糖，6.0g/L卡拉胶，pH值6.0
‑
6.2，或者增殖扩繁培养基成分包含：MS、0.2
‑
0.5mg/L IBA、30g/L蔗糖，6.0g/L卡拉胶，pH值6.0
‑
6.2，培养条件是：22
‑
26℃，光照1000
‑
3000lx，12h光/12h暗，期间需要转接新鲜增殖扩繁培养基，转接周期：42天。
[0029]进一步地，所述步骤(5)中，将增殖扩繁培养后得到的团芽分小，使用壮苗成苗培养基1进行培养，或交替使用壮苗成苗培养基1和壮苗成苗培养基2进行培养，
[0030]培养条件：25
±
1℃，光照1000
‑
3000LX，12h光/12h暗；
[0031]转接周期：30
‑
60天。
[0032]进一步地，所述步骤(6)中，挑选株高在2厘米以上的团块，将团块切成直径1
‑
1.2厘米的大小，去掉枯叶，使用生根培养基1进行生根培养，或交替使用生根培养基1和生根培养基2进行培养；
[0033]培养条件：25
±
1℃，光照1000
‑
3000LX，12h光/12h暗；
[0034]转接周期：20
‑
60本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种栎叶槲蕨匍匐茎组织培养方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)获得外植体并消毒；(2)外植体接种，其接种培养基成分包含：MS、3.0mg/L 6
‑
BA、30g/L蔗糖、6.0g/L卡拉胶，pH值为6.0
‑
6.2；(3)萌芽后转入启动诱导培养基培养，团块增多，启动诱导培养基成分包括：MS、1.0
‑
3.0mg/LBA、30g/L蔗糖，6.0g/L卡拉胶，pH值为6.0
‑
6.2；(4)将上一步得到的愈伤团块分小，接入增殖扩繁培养基中培养，增殖扩繁培养基成分包括：MS、0.2
‑
0.5mg/LNAA、30g/L蔗糖，6.0g/L卡拉胶，pH值6.0
‑
6.2，或，增殖扩繁培养基成分包括：MS、0.2
‑
0.5mg/L IBA、30g/L蔗糖，6.0g/L卡拉胶，pH值6.0
‑
6.2；(5)将上一步所得团块进行壮苗成苗培养，使用壮苗成苗培养基1进行培养，或交替使用壮苗成苗培养基1和壮苗成苗培养基2进行培养，壮苗成苗培养基1的成分包括：MS、0.2g/LAC、30g/L蔗糖，6.0g/L卡拉胶，pH调至6.0
‑
6.2；壮苗成苗培养基2的成分包括；1/2MS、1.0g/LAC、30g/L蔗糖，6.0g/L卡拉胶，pH调至6.0
‑
6.2；(6)生根培养，达到出货标准，使用生根培养基1进行生根培养，或交替使用生根培养基1和生根培养基2进行培养，生根培养基1成分包括：MS、0.2
‑
1.0g/LAC、30g/L蔗糖，6.0g/L卡拉胶，pH调至6.0
‑
6.2；生根培养基2成分包括：1/2MS、1.0g/LAC、30g/L蔗糖，6.0g/L卡拉胶，pH调至6.0
‑
6.2。2.根据权利要求1所述的一种栎叶槲蕨匍匐茎组织培养方法，其特征在于：所述步骤(1)中获得外植体过程包括：首先选择生长健壮、无病虫害、遗传性状纯正的母株，并使植物表面干爽；切下匍匐茎作外植体，去除匍匐茎表面的绒毛；外植体消毒过程包括：外植体为匍匐茎，将其切成2
‑
3厘米长的小段，75％酒精浸泡25
‑
35S，升汞8
‑
10分钟，冲洗5
‑
6遍无菌水。3.根据权利要求1所述的一种栎叶槲蕨匍匐茎组织培养方法，其特征在于：所述步骤(2)中，培养条件是22
‑
28℃，1000
‑
3000lx，12h光/12h暗，培养30
‑
40天。4.根据权利要求1所述的一种栎叶槲蕨匍匐茎组织培养方法，其特征在于：所述步骤(3)中，培养条件是22
‑
28℃，光照1000
‑
3000LX，12h光/12h暗，转接培养周期是40
‑
60天，连续转接培养使愈伤团块增多。5.根据权利要求1所述的一种栎叶槲蕨匍匐茎组织培养方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋雄辉，黎东均，蔡桂奇，詹启成，毛祥美，
申请(专利权)人：广州百德园艺有限公司，
类型：发明
国别省市：