糖化血红蛋白的快速聚焦电泳定量分析方法技术

本发明专利技术涉及一种糖化血红蛋白的快速聚焦电泳定量分析方法，包括以下步骤：S1：分离目标样品中血红蛋白及其对应糖化血红蛋白，得到对应特征条带，测定血红蛋白及其对应糖化血红蛋白含量；S2：计算各条带i所对应糖化血红蛋白相对含量gHb

【技术实现步骤摘要】
糖化血红蛋白的快速聚焦电泳定量分析方法


[0001]本专利技术涉及一种糖化血红蛋白含量测定计量领域，尤其是涉及一种糖化血红蛋白的快速聚焦电泳定量分析方法。

技术介绍

[0002]糖化血红蛋白是血红蛋白的一种重要的存在形式，是血液红细胞中血红蛋白与葡萄糖结合的产物。其中，HbA1c是血红蛋白HbA0中β链N端缬氨酸与己糖相连构成的糖蛋白。在红细胞120天左右的生命周期内，HbA0不断转变为HbA1c，因而HbA1c含量水平能够反映人体红细胞生命周期(2
‑
3个月)内血糖平均浓度，同时也是血糖控制好坏的关键参数。
[0003]目前，糖化血红蛋白检测技术主要有硼酸亲和层析、抗原
‑
抗体免疫学方法、高效液相色谱(HPLC)、毛细管电泳和质谱技术等。这些方法在分离HbA1c和HbA0的前提下，将HbA1c(％)定义为：
[0004][0005]即HbA0所对应糖化血红蛋白条带HbA1c在该同系物中的比例。
[0006]但有研究报道，存在含有某些异常血红蛋白，导致HbA1c无法被分离检测到的情况(蒋伏松.云南基诺族成人糖尿病患病率调查及便携式糖化血红蛋白仪在该人群的应用价值探讨[D].苏州大学,2015.)，如图1所示。此时，现有技术对HbA1c的测量是不准确甚至是错误的，无法准确反应个体2
‑
3月平均血糖浓度。因而，在此情况下，需要一种替代方案去测量糖化血红蛋白。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种糖化血红蛋白的快速聚焦电泳定量分析方法。其中通过微阵列等电聚焦电泳对人体血样中血红蛋白进行电泳分离，在聚焦完成后，再确定不同条带对应血红蛋白或糖化血红蛋白后，分别求得不同种血红蛋白相对含量。
[0008]当糖化血红蛋白HbA1c不存在时，本方法所测得的数值能够作为HbA1c(％)较好的替代，是对已有方法良好的补充。与现有的方法和技术相比，本专利技术具有分辨率高、抗干扰性强和检测计算简单等优点，并适用于绝大多数场景，具有较好的普适性。
[0009]本专利技术的目的可以通过以下技术方案来实现：
[0010]本专利技术的目的是提供一种糖化血红蛋白的快速聚焦电泳定量分析方法，包括以下步骤：
[0011]S1：分离目标样品中血红蛋白及其对应糖化血红蛋白，得到对应特征条带，测定血红蛋白及其对应糖化血红蛋白含量；
[0012]S2：计算各条带i所对应糖化血红蛋白相对含量gHb
i
(％)，其中：
[0013][0014]进一步地，S1中，所述血红蛋白及其对应糖化血红蛋白含量为同一时刻在血液中的相对浓度或者绝对浓度。
[0015]进一步地，S1中，利用微阵列等电聚焦分离血红蛋白，获得血红蛋白及其对应糖化血红蛋白特征条带。
[0016]进一步地，S1中，所述血红蛋白及其对应糖化血红蛋白的种类包括A0,A2,C,E,F,H,J,K,S中的一种或多种。
[0017]进一步地，S1中，目标糖化血红蛋白特征条带的等电点低于未糖化条带，在聚焦完成后，目标糖化血红蛋白特征条带的等电点处于未糖化条带的靠阳极侧。
[0018]进一步地，S1中，通过等电聚焦电泳聚焦完成后，对应的糖化血红蛋白与未糖化血红蛋白条带的位置关系，以此快速辨别和区分各个血红蛋白糖化条带。
[0019]进一步地，S1中，在聚焦完成分离后，切除目标糖化血红蛋白特征条带，并经生物质谱测序，确定所述糖化血红蛋白特征条带为对应的糖化血红蛋白条带。
[0020]进一步地，S2中，各条带i所对应糖化血红蛋白相对含量gHb
i
(％)等于k
i
[G]t，其中t为红细胞在血循环系统中存活时间。
[0021]进一步地，S2中，不同类糖化血红蛋白比例与其反应速率常数的关系为：
[0022][0023]即反应速率比值能够由糖化血红蛋白比例比值进行确定。
[0024]进一步地，当不存在HbA1c或是HbA1c与其他物质的保留时间存在重叠时，根据其他的糖化血红蛋白比例来反应平均血糖和血糖控制水平。
[0025]与现有技术相比，本专利技术具有以下技术优势：
[0026]1.分辨率高。因微阵列等电聚焦的高分辨率，本技术和方法能分离检测到多种糖化血红蛋白，从而能分别对其定量，而HPLC和毛细管电泳无法检测到；
[0027]2.抗干扰性强。当不存在HbA1c或是HbA1c与其他物质的保留时间存在重叠时，HPLC仍会输出HbA1c(％)信息，这个数值是不准确的甚至是错误的。而本方法在能同时检测分离到多种糖化血红蛋白，即使在HbA1c不存在的情况下，还能根据其他的糖化血红蛋白比例来反应平均血糖和血糖控制水平，适用于绝大多数场景，具有较好的普适性；
[0028]3.检测计算简单。本方法和技术推理出的方程十分简单明了，方程(12)也阐述了不同种血红蛋白含量之比和其反应速率常数之间的关系。若能求得等电聚焦后不同种糖化血红蛋白含量之比，即可求得其对应反应速率常数，当其一反应速率常数已知时，便能简单估算另一反应速率常数；反之，当反应速率常数之比已知，便能直接求得两者糖化血红蛋白含量之比。
附图说明
[0029]图1为引用文献的附图；
[0030]图2为实施例1中分离柱图和对应吸收谱图；
[0031]图3为实施例2中分离柱图和对应吸收谱图。
具体实施方式
[0032]本方法和技术首先通过微阵列等电聚焦电泳对人体血样中血红蛋白进行电泳分离；在聚焦完成后，再确定不同条带对应血红蛋白或糖化血红蛋白后，分别求得不同种血红蛋白相对含量。
[0033]通常来说，糖化普遍可以发生在各类蛋白上，其修饰位点也各有不同。对在血循环系统中存活时间为t的单一红细胞，不同类血红蛋白能与葡萄糖反应，生成对应糖化血红蛋白，反应如下所示：
[0034][0035]其中Hbi为未糖化血红蛋白，G为葡萄糖，gHbi为该类血红蛋白对应糖化血红蛋白，ki为该化学反应的反应速率常数。
[0036]由反应(A)可得：
[0037][0038]假设单个细胞生命周期内该类血红蛋白总量Hbti保持不变且平均葡萄糖含量保持相对恒定，其[G]和[Hbti]设为恒定值。由反应(A)又得：
[0039][Hbti]＝[gHb
i
]+[Hbi]ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
(3)
[0040]将方程(3)带入方程(1)可得：
[0041][0042]方程(4)积分可得:
[0043][0044]因ki<6
×
10
‑5dL mg
‑1d
‑1，[G]<200mg/dL且t<150d，即ki[G]t<0.18，因而
[0045]方程(5)可以近似简化为：
[0046][gHb
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种糖化血红蛋白的快速聚焦电泳定量分析方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：分离目标样品中血红蛋白及其对应糖化血红蛋白，得到对应特征条带，测定血红蛋白及其对应糖化血红蛋白含量；S2：计算各条带i所对应糖化血红蛋白相对含量gHb
i
(％)，其中：2.根据权利要求1所述的一种糖化血红蛋白的快速聚焦电泳定量分析方法，其特征在于，S1中，所述血红蛋白及其对应糖化血红蛋白含量为同一时刻在血液中的相对浓度或者绝对浓度。3.根据权利要求1所述的一种糖化血红蛋白的快速聚焦电泳定量分析方法，其特征在于，S1中，利用微阵列等电聚焦分离血红蛋白，获得血红蛋白及其对应糖化血红蛋白特征条带。4.根据权利要求1所述的一种糖化血红蛋白的快速聚焦电泳定量分析方法，其特征在于，S1中，所述血红蛋白及其对应糖化血红蛋白的种类包括A0,A2,C,E,F,H,J,K,S中的一种或多种。5.根据权利要求1所述的一种糖化血红蛋白的快速聚焦电泳定量分析方法，其特征在于，S1中，目标糖化血红蛋白特征条带的等电点低于未糖化条带，在聚焦完成后，目标糖化血红蛋白特征条带的等电点处于未糖化条带的靠阳极侧。6.根据权利要求5所述的一种糖化血...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹成喜，田佑吏，
申请(专利权)人：达碧清诊断技术上海有限公司，
类型：发明
国别省市：