一种无核酸扩增的单分子RNA定量检测方法及系统技术方案

本发明专利技术提供了一种无核酸扩增的单分子RNA定量检测方法及系统，包括：S1：制备单链RNA荧光报告探针功能化修饰的微球；S2：设计靶标RNA特异性的crRNA；S3：将已知浓度的靶标RNA、crRNA、Cas13蛋白、反应缓冲溶液和S1制备微球在适宜的温度下共同孵育；S4：将S3孵育后的微球进行荧光成像，建立微球荧光强度和RNA浓度之间线性对应关系；S5：利用S4建立的线性对应关系对样品中RNA定量检测。本发明专利技术所述的RNA检测方法可实现单分子水平RNA定量分析，无需逆转录及核酸预扩增步骤，检测条件温且操作步骤简单，为RNA诊断分析提供了一种高灵敏度简便、通用新策略。通用新策略。通用新策略。

【技术实现步骤摘要】
一种无核酸扩增的单分子RNA定量检测方法及系统


[0001]本专利技术涉及分子诊断与生化分析方法研究领域，尤其涉及一种无核酸扩增的单分子RNA定量检测方法及系统。

技术介绍

[0002]作为重要的遗传物质，RNA各个生物过程中的发挥至关重要作用，从基础生物学研究到分子生物学探索再到临床诊断分析，高灵敏度、高特异性的RNA检测显得越来越重要。例如，基于新型冠状病毒 (SRAS
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CoV
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2)基因组RNA的核酸检测，作为新型冠状病毒病(COVID
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19) 诊断的金标准，在COVID
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19的预防和控制中发挥着至关重要的作用；再如，由染色体重排所形成的融合基因转录本RNA，被国家综合癌症网络肿瘤学临床实践指南(National Comprehensive Cancer NetworkClinical Practice in Guidelines in Oncology，NCCN指南)和世界卫生组织蓝皮书(WHO Blue Books)作为各类癌症分类、诊断、治疗、预后本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种无核酸扩增的单分子RNA定量检测方法，所述RNA定量检测方法包括以下步骤：S1：制备单链RNA荧光报告探针功能化修饰的微球；S2：设计合成靶标RNA特异性的crRNA；S3：将已知浓度的靶标RNA、crRNA、Cas13蛋白、反应缓冲溶液和S1制备微球在适宜的温度下共同孵育；S4：对S3孵育后的微球进行荧光成像，建立微球荧光强度和RNA浓度之间线性对应关系；S5：利用S4建立的线性对应关系，对样品中RNA定量检测。2.根据权利要求1所述的定量检测方法，其特征在于，所述S1具体包括：S11：利用显微镜筛选出尺寸相同的链霉亲和素修饰的单微球；S12：设计合成生物素、荧光基团和猝灭基团标记的单链RNA报告探针；S13：通过生物素
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链霉亲和素免疫反应将单链RNA报告探针固定在S11单微球表面。3.根据权利要求2所述的定量检测方法，其特征在于，所述S11中单微球包括但不限于链霉亲和素修饰的琼脂糖磁性微球，尺寸1
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1000微米。4.根据权利要求2所述的定量检测方法，其特征在于，所述S12中单链RNA报告探针包括但不限于具有生物素修饰的报告探针。5.根据权利要求2所述的定量检测方法，其特征在于，所述S13中，单链RNA报告探针的固定方式还包括：微球表面修饰抗FITC抗体，单链RNA报告探针不修饰。6.根据权利要求2所述的定量检测方法，其特征在于，所述S13中，链霉亲和素和生物素反应在磷酸盐缓冲溶液进行，反应时间大于30分钟，反应温度为20
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40℃。7.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：王辉，李正平，陈德胜，王洪红，梁源文，
申请(专利权)人：北京科技大学，
类型：发明
国别省市：