一种皂角的鉴别模型及其建立方法应用技术

本发明专利技术属于农作物品种鉴定技术领域，具体涉及一种皂角的鉴别模型及其建立方法应用。本发明专利技术采用甲醇提取皂角米具有较好的提取效果，能够提取鉴别得到14种活性成分，进一步将甲醇提取所得活性成分的LC

【技术实现步骤摘要】
一种皂角的鉴别模型及其建立方法应用


[0001]本专利技术属于农作物品种鉴定
更具体地，涉及一种皂角的鉴别模型及其建立方法应用。

技术介绍

[0002]皂角(Gleditsia sinensis Lain)，别名皂荚，属于豆科皂荚属落叶乔木，全世界约16种，多生长在热带和温带地区，其中我国常见的皂荚属植物有皂荚(Gleditsia sinensis Lam.)、华南皂荚(Gleditsia fera(Lour.)Merr.)、野皂荚(Gleditsia microphylla GordonexY.T.Lee)、山皂荚(也称为日本皂荚，Gleditsia japonica Miq.)和滇皂荚(Gleditsia japonica Miq.var.delavayi(Franch.)L.C.Li)等。皂荚种类较多，目前对于鉴别皂荚、山皂荚品种的鉴别方法较少。中国专利申请公开了一种源自皂荚的三种药材的鉴别方法及其应用，其采用反相超高效液相色谱与四级杆飞行时间质谱联用的技术，实现对皂荚属三种中药大皂角、猪牙皂和皂角刺的精准分析与鉴别，其虽然可以鉴别皂荚属中的大皂角、猪牙皂和皂角刺，但其并不能精准鉴别出皂荚和山皂荚的品种。

技术实现思路

[0003]本专利技术要解决的技术问题是克服现有缺乏鉴别皂荚和山皂荚品种方法的缺陷，提供一种能简便、准确、有效地鉴别皂角中皂荚和山皂荚品种的方法。
[0004]本专利技术的另一目的是提供一种鉴别皂角品种的模型。
[0005]本专利技术的另一目的是提供一种鉴别皂角品种模型的建立方法。
[0006]本专利技术的另一目的是提供一种鉴别皂角品种的方法和模型在鉴别皂角品种中的应用。
[0007]本专利技术的上述目通过以下技术方案实现：
[0008]本专利技术保护一种鉴别皂角品种模型的建立方法，包括如下步骤：
[0009]先将皂角前处理所得皂角米用甲醇摇床提取10～30min，将提取物用LC
‑
Q
‑
TOF/MS进行检测得到每个成分的色谱峰面积，再用OPLS
‑
DA对色谱峰面积分析得到VIP值，用VIP值大于1对应成分的色谱峰面积用SPSS26软件建立模型，过程为：将皂角米的品种作为分组变量，分组变量的范围为1～3，VIP值大于1对应的成分及其峰面积数据作为自变量，描述设置为平均值、单变量ANOVA和Box
’
s M三项，矩阵设置为组内相关性和组内协方差，函数系数设置为Fisher；在分类选项中，先验概率设置为所有组相等，使用协方差矩阵设置为分组；最终通过预测组成员和判别得分，得到分类函数系数表，将函数系数表整理成方程即得鉴别皂角品种的模型。
[0010]优选地，所述LC
‑
Q
‑
TOF/MS中液相色谱的条件为：
[0011]色谱柱：Waters BEH C18：
[0012]流动相：流动相A为0.1～0.15％V/V甲酸，流动相B为乙腈；
[0013]梯度洗脱：0～20min，5％～90％B；20～25min，90％～100％B；25～43min，100％B；
43～44min，100％～5％B；44～50min，5％B或0～10min 5％～90％B，10～13min 90％
‑
～100％B，13～17min 100％B，17～17.5min 100％～5％B，17.5～20min 5％B。
[0014]流速：0.2～0.8mL/min；
[0015]进样量：4～6μL；
[0016]柱温38～45℃。
[0017]优选地，所述LC
‑
Q
‑
TOF/MS中四级杆飞行时间质谱的条件为：
[0018]正离子模式进样量4～6μL；
[0019]负离子模式进样量15～25μL；
[0020]柱温35～45℃；
[0021]接口方式：ESI和APCI复合源；
[0022]一级TOF
‑
MS扫描准确质量范围50～2500Da，数据采集时间80～100ms；
[0023]二级IDA
‑
MS扫描准确质量范围50～2500Da，高灵敏模式，数据采集时间40～60ms；
[0024]信号阈值：80～100cps。
[0025]优选地，所述提取物用LC
‑
Q
‑
TOF/MS进行检测前还包括将提取物离心，取上清液过有机滤膜分离至试管中，用氮气吹干，加1～2mL甲醇复溶，涡旋混匀1～2min，过有机滤膜。
[0026]更优选地，所述离心的转速为10000～15000r/min。
[0027]优选地，所述VIP值大于1所对应成分的色谱峰面积为Triacanthine的色谱峰面积，Locustoside A的色谱峰面积，Locustoside B的色谱峰面积。
[0028]优选地，所述皂角米与甲醇的质量体积比为：0.1g:(1～2)ml。
[0029]更优选地，所述皂角米与甲醇的质量体积比为：0.1g:(1～1.5)ml。
[0030]优选地，所述摇床提取的时间为10～20min。
[0031]优选地，所述前处理的方法包括：将不同品种的皂角籽经过三轮人工分拣，保留完好健康的种子，用热水溶胀处理，在洁净工作区手工剥离，得到皂角米，于55℃烘干，粉碎过60目筛网密封。
[0032]本专利技术进一步保护一种鉴别皂角品种的模型，由上述方法得到。
[0033]优选地，所述模型如下：
[0034]y
GS
＝
‑
0.005*X1‑
9.733*10
‑5*X2‑
28.077
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
(1)
[0035]y
GJ
‑
d
＝0.113*X1+0.003*X2‑
0.001X3‑
459.274
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
(2)
[0036]y
GJ
＝1.050*X1+0.005*X2‑
0.003*X3‑
4045.087
ꢀꢀꢀꢀꢀ
(3)
[0037]其中GS为皂荚，GJ
‑
d为山皂荚变种，GJ为山皂荚，X1为Triacanthine的色谱峰面积，X2为Locustoside A的色谱峰面积，X3为Locustoside B的色谱峰面积。
[0038]本专利技术进一步保护一种鉴别皂角品种的方法，包括如下步骤：
[0039]将待测皂角用质谱进行检测，得到Triacanthine的色谱峰面积，Locustoside A的色谱峰面积，Locustoside B的色谱峰面积，将其代入上述模型中计算，所得最大数值对应的y就是该类皂角米。
[0040]本专利技术进一步本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种鉴别皂角品种模型的建立方法，其特征在于，包括如下步骤：先将皂角前处理所得皂角米用甲醇摇床提取10～30min，将提取物用LC
‑
Q
‑
TOF/MS进行检测得到每个成分的色谱峰面积，再用OPLS
‑
DA对色谱峰面积分析得到VIP值，用VIP值大于1对应成分的色谱峰面积用SPSS26软件建立模型，过程为：将皂角米的品种作为分组变量，分组变量的范围为1～3，VIP值大于1对应的成分及其峰面积数据作为自变量，描述设置为平均值、单变量ANOVA和Box
’
s M三项，矩阵设置为组内相关性和组内协方差，函数系数设置为Fisher；在分类选项中，先验概率设置为所有组相等，使用协方差矩阵设置为分组；最终通过预测组成员和判别得分，得到分类函数系数表，将函数系数表整理成方程即得鉴别皂角品种的模型。2.根据权利要求1所述建立方法，其特征在于，所述LC
‑
Q
‑
TOF/MS中液相色谱的条件为：色谱柱：Waters BEH C18：流动相：流动相A为0.1～0.15％V/V甲酸，流动相B为乙腈；梯度洗脱：0～20min，5％～90％B；20～25min，90％～100％B；25～43min，100％B；43～44min，100％～5％B；44～50min，5％B或0～10min 5％～90％B，10～13min 90％
‑
～100％B，13～17min 100％B，17～17.5min 100％～5％B，17.5～20min 5％B。流速：0.2～0.8mL/min；进样量：4～6μL；柱温38～45℃。3.根据权利要求1所述建立方法，其特征在于，所述LC
‑
Q
‑
TOF/MS中四级杆飞行时间质谱的条件为：正离子模式进样量4～6μL；负离子模式进样量15～25μL；柱温35～45℃；接口方式：ESI和APCI复合源；一级TOF
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MS扫描准确质量范围50～2500Da，数据采集时间80～100ms；二级IDA
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【专利技术属性】
技术研发人员：韦晓群，孙琳媛，王志元，曾广丰，邱健，陈敏丹，雷红涛，孙远明，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：