一种层析柱内气吹混匀填料的装填方法及其应用技术

本申请提供了一种提高柱效的层析柱填料装填方法，其特征在于所述方法包括气吹步骤，通过一个或多个气管向层析柱底部吹出空气，使层析柱内的填料充分混匀。使用本申请的装填方法能够提高装柱成功率，提升柱效，且所装填的层析柱适于抗体的分离。层析柱适于抗体的分离。层析柱适于抗体的分离。

【技术实现步骤摘要】
一种层析柱内气吹混匀填料的装填方法及其应用


[0001]本专利技术属于液相层析分离领域，具体涉及一种向层析柱中装填填料的方法及其在抗体纯化中的应用。

技术介绍

[0002]液相层析(Liquid Chromatograph,LC)又称液相色谱，为实验室及工业生产中常用的分析、分离和纯化手段。在液相层析技术中，液体流动相中待分离物质因为结构成分、大小、疏水性、电荷分布不同，在流经固定相(即层析柱中的填料)时与填料之间的相互作用存在差异，故待分离物质按照不同的保留时间顺序流出层析柱，从而达到分析分离的目的。液相层析根据分离的原理不同，可以分为吸附层析、分配层析、凝胶过滤层析、离子交换层析、亲和层析等。
[0003]适用于各种类型层析的填料(又称树脂、基质或介质)也多种多样，就其化学结构骨架而言，包括例如以硅胶、氧化铝、多孔玻璃基质等为代表的无机材料；以纤维素、葡聚糖、琼脂糖、交联多糖等为代表的天然多糖改性高分子；还有以聚丙烯酸酯、聚苯乙烯、聚丙烯酰胺等为代表的合成高分子聚合物。
[0004]层析柱中填料均匀紧实的状态，对于分离性能至关重要。如果填料压缩不均匀，存在气泡和/或断层，具体表现为填料高度远超预期值，且柱效(即理论塔板数，number of theoretical plate)低，则会导致待分离物质在层析柱中经历的分离过程不一致，保留时间与工艺规程中要求的不一致，从而造成其谱带展宽，影响层析柱的分离效率甚至是产品质量。在这种情况下，技术人员将不得不重新装柱，耗时耗力。
[0005]目前比较常用的装柱方法可以分为干法装填和湿法装填。
[0006]干法装填是将填料以固体粉末或颗粒的方式直接加入层析柱内，并利用自身的重力或外加压力来保证填料之间的紧密性。湿法装填则是先使填料与液体混合形成匀浆，再加入层析柱中，并在常压下或者借助外加压力，利用装柱液的冲洗作用，使填料相对于干法装柱更紧密。
[0007]专利申请CN102989198A公开了一种将固体填料分批次倒入制备柱中，每批均以棍子搅匀并以外加压力压实的干法装柱方法。该方法需要等前次加压装柱的柱内压力完全释放后，才能添加下批填料，然后再加压，再释压，再填料，如此循环，增大了工作强度，故操作起来耗时、耗力、耗财。
[0008]专利技术专利CN103487533B以碱盐缓冲液代替纯化水与凝胶配成悬液，在外加压力下借助碱盐缓冲液的冲洗进行湿法装柱。该方法使用碱盐缓冲液冲压柱子，且需要外加压力，装柱成本高。
[0009]技术专利CN205109614U公开了一种塔器填料气吹分布器及其应用，对干法装填的填料进行气吹，以取代人工平整实现自动进料和填料的均匀分布。该方法在填料之后需要先把气吹分布器从塔器中取出，才能启动塔器的运作，操作复杂。而且气吹使得干法装填的固有缺点更加突出，即填料颗粒之间本就存在摩擦作用，采用气源压力为0.1
‑
0.5MPa
(相当于1
‑
5bar，因为1MPa＝10bar)，会增大摩擦，且造成大量气泡，难免造成填料中的气泡和/或断层，实际装填效果存疑。此外，该技术专利文件未提示气吹在提高柱效中的作用，也未披露气管规格、气吹时间等气吹条件。
[0010]专利技术专利CN102077087B公开了一种分离介质浆料罐，对从多个储料罐传送到中间罐的不同种类和颗粒大小的分离介质进行气吹，使介质浆料变成均质混合物。然后根据需要对浆料进行脱气处理，才传送到分离柱中。该方法对中间罐中分离介质先通气、再脱气，然后才传送到分离柱中，步骤繁琐，且浆料传送过程中难免又引入气泡，实际装填效果存疑。此外，该专利文件未提示层析柱中气吹在提高柱效中的作用，也未披露气管规格、气吹压力、气吹时间等气吹条件。
[0011]因此，如何提高装柱成功率，把填料均匀、紧实地装填进层析柱，使填料高度达到预期值，提升柱效，一直是本领域亟待解决的技术问题。
[0012]专利技术概述
[0013]一方面，本专利技术提供了一种层析柱填料装填方法，其特征在于所述方法包括气吹步骤，通过一个或多个气管向层析柱底部吹出空气，使层析柱内的填料充分混匀。
[0014]在一些方案中，所述一个或多个气管连接在层析柱底部。
[0015]在一些方案中，所述气管为相对于层析柱底部中心圆点而言等距连接在层析柱底部的多个气管。
[0016]在一些方案中，所述气吹步骤中一个或多个气管通过层析柱顶端伸入层析柱内部靠近底部的位置。
[0017]在一些方案中，所述空气是压缩空气，例如0.3
‑
0.5bar，优选0.5bar的压缩空气。
[0018]在一些方案中，所述一个或多个，管连接在层析柱底部，所述空气为压缩空气，所述填料为填料匀浆。。
[0019]在一些方案中，所述填料匀浆浓度为50％
‑
60％，优选50％。
[0020]在一些方案中，所述气管为硬质气管，规格为6#，8#或10#，优选10#气管。
[0021]在一些方案中，所述气吹时间为10
‑
30分钟，优选30分钟。
[0022]在一些方案中，所述气吹步骤之前还包括搅拌打散层析柱中沉降的填料的步骤。
[0023]在一些方案中，所述填料为无机材料或合成高分子聚合物材料，例如选自硅胶、氧化铝、多孔玻璃基质的无机填料。
[0024]在一些方案中，所述多孔玻璃基质为系列基质，优选Ultra Plus或vA系列基质。
[0025]在一些方案中，所述填料为Ultra Plus，匀浆浓度为50％、气吹压力为0.5bar、气管规格为10#，且气吹时间为30分钟。
[0026]另一方面，本专利技术涉及用前述方法装填的层析柱在抗体分离中的应用。示例性的抗体包括阿达木单抗(Adalimumab)、阿利西尤单抗(Alirocumab)、Benmelstobart单抗、贝伐珠单抗(Bevacizumab)、比美吉珠单抗(Bimekizumab)、达雷妥尤单抗(Daratumumab)、地舒单抗(Denosumab)、依洛尤单抗(Evolocumab)、古塞奇尤单抗(Guselkumab)、伊匹木单抗(Ipilimumab)、依奇珠单抗(Ixekizumab)、美泊利珠单抗(mepolizumab)、纳武利尤单抗(Nivolumab)、奥妥珠单抗(Obinutuzumab)、帕博利珠单抗(Pembrolizumab)、帕妥珠单抗(Pertuzumab)、雷莫芦单抗(Ramucirumab)、利妥昔单抗(Rituximab)、洛莫索珠单抗
(Romosozumab)、司库奇尤单抗(Secukinumab)、曲妥珠单抗(Trastuzumab)或乌司奴单抗(Ustekinumab)。
[0027]专利技术详述
[0028]本专利技术提供了一种层析柱填料装填方法，其特征在于所述方法包括气吹步骤，通过一个或多个气管向层析柱底部吹出空气，使层析柱内的填料充分混匀。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种层析柱填料装填方法，其特征在于所述方法包括气吹步骤，通过一个或多个气管向层析柱底部吹出空气，使层析柱内的填料充分混匀。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述一个或多个气管连接在层析柱底部，例如为相对于层析柱底部中心圆点而言等距连接在层析柱底部的多个气管。3.根据权利要求1
‑
2任一项所述的方法，其中所述填料匀浆浓度为50％
‑
60％，优选50％。4.根据权利要求1
‑
3任一项所述的方法，其中所述空气为压缩空气，气吹的压力为0.3
‑
0.5bar，优选0.5bar。5.根据权利要求1
‑
4任一项所述的方法，其中所述气管为硬质气管，规格为6#，8#或10#，优选10#气管。6.根据权利要求1
‑
5任一项所述的方法，其中所述气吹时间为10
‑
30分钟，优选30分钟。7.根据权利要求1
‑
6任一项所述的方法，其中气吹步骤之前还包括搅拌打散层析柱中沉降的填料的步骤。8.根据权利要求1
‑
7任一项所述的方法，其中所述填料为无机材料或合成高分子聚合物材料，例如选自硅胶、氧化铝、多孔玻璃基质的无机填料，例如蛋白A亲和层析多孔玻璃基质。...

【专利技术属性】
技术研发人员：陆建胜，王金伟，薛殿堂，陈玄，胡伟伟，陈萌，余金辉，
申请(专利权)人：珠海市麦迪科技有限公司，
类型：发明
国别省市：