一种蜂王浆中活性蛋白和脂肪酸的分离提取方法技术

本发明专利技术公开了一种蜂王浆中活性蛋白和脂肪酸的分离提取方法，涉及保健品技术领域。本发明专利技术在提取活性蛋白和脂肪酸时，先将蜂王浆冻干粉和有机溶剂混合成分散液，进行二次过滤得到二次沉淀物和滤液，用异丙醇对二次沉淀物洗涤过滤并干燥制得活性蛋白，将滤液旋转蒸馏，再用乙醇重结晶制得10

【技术实现步骤摘要】
一种蜂王浆中活性蛋白和脂肪酸的分离提取方法


[0001]本专利技术涉及保健品
，具体为一种蜂王浆中活性蛋白和脂肪酸的分离提取方法。

技术介绍

[0002]蜂王浆是由6～12日龄工蜂头部的王浆腺(舌腺和鄂腺)分泌，用于喂养饲喂蜂王及幼虫的特殊乳浆状物质，又名蜂乳、皇浆。蜂王浆含有丰富的蛋白质，其中主要水溶性蛋白。此外，王浆含游离脂肪酸达26种以上，以10
‑
羟基
‑2‑
癸烯酸(10
‑
HDA)最为重要，也是王浆特有的成分。具有抗菌、抗病毒、抑制癌细胞生长等多种功效，是国际上长期以来评价王浆质量的重要指标。王浆对于更年期女性缓解更年期综合征具有良好的效果，但也有报道女性长期服用蜂王浆或蜂王浆冻干粉会导致女性子宫内膜增厚。随着社会经济的发展，现代女性的生育年龄呈现逐步增长的趋势，大龄和高龄产妇越来越多，生育障碍人群也越来越多，很多生育障碍与女性因为年龄增大子宫孕育能力下降有很大关系。通过对蜂王浆的加工和开发，如果能开发出对于更年期女性更适用，副作用更小；对于大龄和高龄女性生育有帮助作用的产品具有重要的市场价值和前景
[0003]传统的蜂王浆蛋白的纯化方法主要有透析、多种层析分离方法叠加组合等，不仅耗时、费力而且成本高、收率低，难以满足生物学研究所需，也不适合规模化生产。10
‑
HDA的提取方法主要有以乙醇、乙醚或乙酸乙酯为溶剂的传统提取法、溶液沉淀结晶法、醇中沉淀结晶法、高效液相色谱法及大孔树脂分离法等。其中，传统提取法，例如采用乙酸乙酯为溶剂的提取方法，工序繁琐，操作不易，通常需要耗时数个小时以上，提取率低。沉淀结晶法操作复杂，耗时长，整个提取过程通常需要20多个小时。高效液相色谱法成本高，不适合工业化生产。大孔树脂分离法所消耗溶剂量过大，并且提取过程通常需要10个小时以上，耗时长。在提取10
‑
HAD的方法中不可避免的会导致蛋白结构的改变而使得蛋白变性。
[0004]因此，现有分离蛋白的技术中无法分离10
‑
HDA，分离10
‑
HDA方法中蛋白结构被破坏导致活性蛋白变性，无法实现同时的分离提取，这是本领域技术人员亟待解决的问题。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种蜂王浆中活性蛋白和脂肪酸的分离提取方法，以解决现有技术中存在的问题。
[0006]一种蜂王浆中活性蛋白和脂肪酸的分离提取方法，其特征在于，主要包括以下分离提纯步骤：分散、二次过滤、活性蛋白的提取、脂肪酸的提取。
[0007]作为优化，包括以下提取步骤：
[0008](1)分散：将蜂王浆冻干粉和有机溶剂按质量比1：4～1：8混合均匀，在氮气氛围中，20～30℃，300～500r/min搅拌20～30min，制得分散液；
[0009](2)二次过滤：将步骤(1)制得的分散液用滤网过滤，取初次沉淀物，同时收集滤液，将初次沉淀物和有机溶剂按质量比1：4～1：8混合均匀，在氮气氛围中，20～30℃，300～
500r/min搅拌20～30min，再次用滤网过滤，得到二次沉淀物，同时收集合并滤液；
[0010](3)活性蛋白的提取：将步骤(2)获得的二次沉淀物加入二次沉淀物质量8～10倍的混合溶液中，在室温下，100～300r/min搅拌提取20～30min，将搅拌提取得到的提取液用滤网过滤，弃去滤液，上层固体重复用混合溶液洗涤3～5次，在1～10Pa，
‑
10～
‑
1℃的条件下干燥6～8h，制得活性蛋白；
[0011](4)脂肪酸的提取：将步骤(2)获得的滤液进行旋转蒸馏，得到蒸馏产物，将蒸馏产物和无水乙醇按质量比1：4～1：8混合均匀，在20～30℃，300～500r/min搅拌20～30min，在
‑
20～
‑
16℃静置1～2h，过滤，并在1～10Pa，
‑
10～
‑
1℃的条件下干燥6～8h，制得10
‑
羟基
‑2‑
癸烯酸。
[0012]作为优化，步骤(1)所述蜂王浆冻干粉是由新鲜蜂王浆冻干而成。
[0013]作为优化，步骤(1)、(2)所述有机溶剂为丙酮、乙酸乙酯、正己烷中的一种或多种混合。
[0014]作为优化，步骤(2)、(3)所述滤网为400～800目滤网。
[0015]作为优化，步骤(3)所述异丙醇水溶液为质量分数60～80％的异丙醇水溶液。
[0016]作为优化，步骤(4)所述旋转蒸馏的条件为：压力
‑
0.08～
‑
0.06MPa，温度45～50℃。
[0017]与现有技术相比，本专利技术所达到的有益效果是：
[0018]本专利技术在分离提取蜂王浆中活性蛋白和脂肪酸的时，先将蜂王浆冻干粉和有机溶剂混合成分散液，进行二次过滤得到二次沉淀物和滤液，用异丙醇对二次沉淀物洗涤过滤并干燥制得活性蛋白，将滤液旋转蒸馏，再用乙醇重结晶制得10
‑
羟基
‑2‑
癸烯酸。
[0019]首先，本申请提供一种使用王浆冻干粉作为提取原料从蜂王浆中提取10
‑
羟基
‑2‑
癸烯酸有机酸的方法，同时由于蛋白的二级结构外层亲水，内腔疏水的特性，在冻干的王浆干粉中所选择的有机溶剂不能溶解蛋白和进入蛋白内腔中，有效的保护了蛋白的结构不被破坏，在提取10
‑
HDA的同时保持了蛋白的活性。该方法实现了提取10
‑
HDA和保持王浆中蛋白活性，操作方便，成本低，大大缩短工艺周期。
附图说明
[0020]下面结合附图，通过对本申请的具体实施方式详细描述，将使本申请的技术方案及其它有益效果显而易见。
[0021]在附图中：
[0022]图1是不同药物对薄子宫内膜模型大鼠E2(A)、P4(B)水平的影响图。
具体实施方式
[0023]下面将结合图1和专利技术实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0024]为了更清楚的说明本专利技术提供的方法通过以下实施例进行详细说明，在以下实施例中制作的活性蛋白和脂肪酸的各指标测试方法如下：
[0025]薄型子宫大鼠模型动物实验
[0026]建立薄型子宫内膜大鼠模型，利用阴道细胞涂片法、放射免疫分析、HE染色、免疫组化等实验探究RJ、MRJ、10
‑
HDA对薄型子宫内膜大鼠模型的作用。
[0027]实验药物：戊酸雌二醇片、王浆冻干粉(RJ)、王浆蛋白产物(MRJ)、含癸烯酸脂溶性(HDA)。
[0028]实验动物：性成熟未交配雌性SD大鼠，8周本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种蜂王浆中活性蛋白和脂肪酸的分离提取方法，其特征在于，主要包括以下分离提纯步骤：分散、二次过滤、活性蛋白的提取、脂肪酸的提取。2.根据权利要求1所述的一种蜂王浆中活性蛋白和脂肪酸的分离提取方法，其特征在于，包括以下提取步骤：(1)分散：将蜂王浆冻干粉和有机溶剂按质量比1：4～1：8混合均匀，在氮气氛围中，20～30℃，300～500r/min搅拌20～30min，制得分散液；(2)二次过滤：将步骤(1)制得的分散液用滤网过滤，取初次沉淀物，同时收集滤液，将初次沉淀物和有机溶剂按质量比1：4～1：8混合均匀，在氮气氛围中，20～30℃，300～500r/min搅拌20～30min，再次用滤网过滤，得到二次沉淀物，同时收集合并滤液；(3)活性蛋白的提取：将步骤(2)获得的二次沉淀物加入二次沉淀物质量8～10倍的混合溶液中，在室温下，100～300r/min搅拌提取20～30min，将搅拌提取得到的提取液用滤网过滤，弃去滤液，上层固体重复用混合溶液洗涤3～5次，在1～10Pa，
‑
10～
‑
1℃的条件下干燥6～8h，制得活性蛋白；(4)脂肪酸的提取：将步骤(2)获得的滤液进行旋转蒸馏，得到蒸馏产物，将蒸馏产物和无水乙醇按质量比1：4～1：8混合均匀，在20～30℃，...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐锦忠，郭琦，张倩，王绪新，
申请(专利权)人：江苏道思麦生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：