一种基于CBA法的MOG-IgG自身抗体的检测材料及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种基于CBA法的MOG

【技术实现步骤摘要】
一种基于CBA法的MOG
‑
IgG自身抗体的检测材料及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于抗体检测
，具体涉及一种基于CBA法的MOG
‑
IgG自身抗体的检测材料及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(myelin oligodendrocyte glycoprotein,MOG)是一种特异性表达于中枢神经系统(central nervous system，CNS)少突胶质细胞上的髓鞘糖蛋白，定位于CNS髓鞘最外层，由于这种定位，它成为参与免疫介导脱髓鞘的主要靶抗原，可能参与髓鞘的完整和维持以及细胞间的通讯。另外，编码不同亚型的剪接转录变体也已被鉴定，包括alpha1、alpha2、alpha3、alpha5、alpha6、beta1、beta2、beta3、beta5和10，其中IgG反应最强的MOG亚型为alpha1(简称为MOGα1，目前用于MOG
‑
IgG的标准检测)和beta1，而其他亚型被识别的频率较低；新发现的转录变体10代表最长的转录本，并翻译最长的亚型MOG10。
[0003]据2018年MOG脑炎国际专家共识研究表明，MOG
‑
IgG具有直接的致病性影响，MOG
‑
IgG现在被认为是一种疾病本身，不同于经典的MS和AQP4
‑
IgG阳性的视神经脊髓炎谱系障碍(NMOSD)，现在通常被称为MOG
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IgG相关性脑脊髓炎(MOG
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IgG
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associated encephalo myel
‑
itis，MOG
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EM)。该专家共识针对MOG
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IgG抗体的检测和MOG
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EM的诊断进行了详细的推荐，将通过使用全长的人MOG蛋白作为靶抗原，用基于细胞的检测方法(cell
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Based assay，CBA)检测到的MOG
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IgG血清阳性作为MOG脑炎的诊断标准之一。
[0004]目前CBA法也是检测MOG
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IgG的金标准，但使用CBA法检测抗体目前仍存在产品保质期有限、灵敏度不高，非特异性染色等缺陷。

技术实现思路

[0005]为了克服上述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种基于CBA法的MOG
‑
IgG自身抗体的检测材料及其制备方法和应用，能够有效解决现有技术中检测MOG
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IgG出现的保质期短、灵敏度不高以及非特异性染色的技术问题。
[0006]为了达到上述目的，本专利技术采用以下技术方案予以实现：
[0007]本专利技术公开了一种基于CBA法的MOG
‑
IgG自身抗体的检测材料，该检测材料是能够同时过表达MOGα1和MOG10的检测材料。
[0008]优选地，该检测材料是将MOGα1基因的重组载体和MOG10基因的重组载体共转进细胞后获得的。
[0009]优选的，所述MOGα1基因的序列号为NM_206809.4。
[0010]进一步优选地，所述的MOGα1基因的重组载体为PCDNA3.1
‑
MOGα1，还可以是17T2A
‑
MOGα1。
[0011]优选的，所述MOG10基因的序列号为NM_001363610.2。
[0012]优选地，所述的MOG10基因的重组载体为PCDNA3.1
‑
MOG10，还可以是17T2A
‑
MOG10。
[0013]进一步优选地，所述细胞为HEK293T细胞。
[0014]优选的，所述PCDNA3.1
‑
MOGα1与PCDNA3.1
‑
MOG10共转时的质量总和可以为2
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10ug，重组载体质量总和与PEI的质量比≤1；
[0015]进一步优选的，PCDNA3.1
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MOGα1和PCDNA3.1
‑
MOG10共转时的质量比为1：(1～3)。
[0016]进一步优选地，所述检测材料为细胞爬片。
[0017]本专利技术公开了基于CBA法的MOG
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IgG自身抗体的检测材料的制备方法，该方法是转染细胞的间接免疫荧光法，是将MOGα1基因的重组载体与MOG10基因的重组载体共转进细胞中，得到同时过表达MOGα1和MOG10的细胞，将转染的细胞固定后洗涤，加入抗原修复液进行终止处理，然后将洗涤后的爬片干燥后保存，即获得检测MOG
‑
IgG自身抗体的细胞爬片(命名为MOGα1+10)。
[0018]上述加入抗原修复液进行终止处理，可以参考中国专利CN202111021983.3公开的一种抗原修复液及采用其制备的细胞爬片、以及细胞爬片的制备方法和应用，按照其中的方法进行操作、处理。
[0019]优选的，所述转染所用细胞为HEK293T细胞。
[0020]优选的，在制备过程中，细胞培养皿可以为任意规格适用于细胞培养的皿或孔板；所述的爬片为经过多聚赖氨酸处理的任意尺寸无菌爬片。
[0021]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0022]本专利技术将用于MOG
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IgG标准检测的亚型MOGα1重组载体与最长的亚型MOG10重组载体共转，得到能够同时过表达MOGα1和MOG10的细胞爬片(命名为MOGα1+10)用于CBA法检测MOG
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IgG，延长了爬片保质期，提高了检测灵敏度，同时在部分MOG
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IgG样品中阳性信号的特异性荧光染色形态更易与非特异性染色区别，这些特点有助于临床样品中MOG
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IgG的检测以及对应疾病的诊断、治疗和预后。
附图说明
[0023]图1为本专利技术实施例1制备的MOGα1+10细胞爬片的保质期验证染色结果图；
[0024]图2为对比例1制备的MOGα1细胞爬片的保质期验证染色结果图；
[0025]图3为对比例2制备的MOG10细胞爬片的保质期验证染色结果图；
[0026]图4为对比例3制备的MOG10MOG10细胞爬片的保质期验证染色结果图；
[0027]图5为用MOGα1+10、MOGα1、MOG10、MOG10MOG10细胞爬片分别对比阳性样本检测灵敏度的染色结果图；
[0028]图6为用MOGα1+10、MOGα1、MOG10、MOG10MOG10细胞爬片分别检测阳性样本的特异性荧光染色形态的染色结果图。
具体实施方式
[0029]为了使本
的人员更好地理解本专利技术方案，下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分的实施例，而不是全部的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于CBA法的MOG
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IgG自身抗体的检测材料，其特征在于，该检测材料是能够同时过表达MOGα1和MOG10的检测材料。2.根据权利要求1所述的基于CBA法的MOG
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IgG自身抗体的检测材料，其特征在于，该检测材料是将MOGα1基因的重组载体和MOG10基因的重组载体共转进细胞后获得的。3.根据权利要求2所述的基于CBA法的MOG
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IgG自身抗体的检测材料，其特征在于，所述MOGα1基因的重组载体为PCDNA3.1
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MOGα1或17T2A
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MOGα1；所述MOG10基因的重组载体为PCDNA3.1
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MOG10或17T2A
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MOG10；所述细胞为HEK293T细胞。4.根据权利要求2所述的基于CBA法的MOG
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IgG自身抗体的检测材料，其特征在于，所述MOGα1基因的重组载体与MOG10基因的重组载体共转的质量总和为2～10μg；共转时，重组载体的质量总和与聚乙烯亚胺的质量比≤1。5.根据权利要求2中任意一项所述的基于CBA法的MOG
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IgG自身抗体的检测材料，其特征在于，MOGα1基因的重组载体和MOG10基因的重组载体的质量比为1：(1～3)。6.根据权利要求1～5中任意一项所述的基于CBA法的MOG
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IgG自身抗体的检测材料，其特征在于，该检测材料为细胞爬片。7.权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：李科，闫亚平，黄秀丽，李娜，张婷婷，
申请(专利权)人：陕西脉元生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：