PEG-scFv抗体在分离游离药物和PEG化载体药物中的用途以及分离方法技术

本发明专利技术公开了PEG

【技术实现步骤摘要】
PEG
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scFv抗体在分离游离药物和PEG化载体药物中的用途以及分离方法


[0001]本专利技术属于纳米药物分离技术，具体而言，涉及PEG
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scFv抗体在分离介质(生物/非生物样本)中游离药物和PEG化载体药物中的用途以及分离方法。

技术介绍

[0002]药物临床转化过程中，药监部门通常要求提供详尽的体内药物动力学数据，而纳米药物(如脂质体和聚合物胶束药物等)体内药物形式存在游离型(药物释放所致)和包载型，其中游离型药物因代谢快，通常较包载型药物比例低(非专利文献1：Ansar,Jiang等，2018)。分离血液中不同存在形式的药物并进行准确定量，对于评估纳米药物的质量、安全性以及载药能力极为关键，同时也具有较大的技术难度。目前常用的分离技术包括透析法、超滤法和固相萃取分离(SPE)。其中透析法在分离时纳米药物易粘连在透析膜上，从而导致分离效率降低。超滤法是利用分子粒径的差别，通过高速离心的方法，分离完整的载体药物和游离药物。超滤法测定的是游离药含量，一方面高速离心力带来的剪切力会引起纳米载体中药物泄漏，同时游离药物有一部分是蛋白结合型，不一定能通过有效超滤获得。固相萃取(SPE)是利用固体吸附剂选择性地将样品中的目标化合物吸附，达到分离的效果。SPE分离得到载体药物(占总药量比例高)，游离药的含量通过总药量减去载体药物计算得到。同时，SPE纯化过程中纳米载体经过疏水固定相，易产生结构破损和药物泄露，导致结果偏差较大(非专利文献2：Bellott,Pouna等，2001)。r/>[0003]目前最常用的分离载体药物和游离药物的方法是固相萃取法(SPE)。固相萃取通过固体填料吸附游离药物，载体药物不被截留，从而实现载体药物和游离药物的分离。该方法目前存在几个问题：(1)载体药物在与固体吸附剂的接触中，有可能会被破坏，导致载体药物泄漏并被截留(非专利文献3：Xie,Shao等，2018)；(2)游离药物含量通过总的药物含量减去洗脱下来的载体药物含量计算，得到的游离药含量误差大，特别是游离药物含量较低时(如95％的药物为包载型，测定95％药物的误差假设为5％，足以对游离药(仅含5％)产生将近一倍量的影响)；(3)操作繁琐(柱活化、饱和、多次洗脱和蛋白沉淀等多步骤)，且需要耗费大量的有机溶剂，高成本且环境友好度低；(4)难以截留高水溶性的小分子化合物。
[0004]现有技术
[0005]非专利文献
[0006]1.Ansar,S.M.,et al.(2018)."Direct quantification of unencapsulated doxorubicin in liposomal doxorubicin formulations using capillary electrophoresis."International journal of pharmaceutics 549(1
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2):109
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114.
[0007]2.Bellott,R.,et al.(2001)."Separation and determination of liposomal and non
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liposomal daunorubicin from the plasma of patients treated with Daunoxome."Journal of Chromatography B:Biomedical Sciences and Applications 757(2):257
‑
267.
[0008]3.Xie,Y.,et al.(2018)."Determination of non
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liposomal and liposomal doxorubicin in plasma by LC
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MS/MS coupled with an effective solid phase extraction:in comparison with ultrafiltration technique and application to a pharmacokinetic study."Journal of Chromatography B 1072:149
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1601570
‑
0232.

技术实现思路

[0009]本专利技术要解决的技术课题
[0010]开发高效的纳米药物分离技术，实现血液中游离药物和包载型药物的精准分离，检测药物体内的释放和代谢动力学，对于包载型药物的质控和临床开发至关重要。但是，如
技术介绍
所述，目前尚无能够高效、精确分离血液中纳米载体药物与游离药物的方法。
[0011]解决技术课题的技术方案
[0012]为了解决血液样本中纳米载体药物与游离药物的高效分离技术课题，专利技术人在PEG化载体药物的研究中，意外地发现，PEG
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scFv抗体在吸附到PEG化的纳米载体上形成抗原抗体结合物后形成沉淀，这种沉淀通过低速离心技术，可以完全分离出来，并且，PEG
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scFv抗体吸附到PEG化的纳米载体上不会对纳米载体造成破坏，药物不会泄露出来。
[0013]专利技术人基于上述发现，进一步研究出一种能够既能高效分离介质中PEG化纳米载体药物与游离药物、又能精确定量少量的游离药物含量的方法，而且，该方法在分离过程中不影响纳米载体药物的稳定性，保护药物不泄露。
[0014]本专利技术包括如下技术方案。
[0015]本专利技术提供PEG
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scFv抗体用于分离介质(生物/非生物样本)中游离药物和PEG化纳米载体药物的用途所述PEG
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scFv抗体能够与聚乙二醇(PEG)结合形成抗原抗体复合物。
[0016]本专利技术的PEG
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scFv抗体优选包含如下LCDR1、LCDR2、LCDR3所示的轻链可变区和HCDR1、HCDR2、HCDR3所示的重链可变区，或者与它们具有80％以上同一性的轻链可变区和重链可变区：
[0017]LCDR1:QSIVHSDGNTY
[0018]LCDR2:KVS
[0019]LCDR3:YRGSHVPYT
[0020]HCDR1:AITFKQAW
[0021]HCDR2:IRSKAKNHAI
[0022]HCDR3:VRGWYSYYFDY。
[0023]本专利技术的PEG
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scFv抗体与聚乙二醇(PEG)结合形成抗原抗体复合物。
[0024]本专利技术的PEG
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scFv抗体，优选包含与LCDR1、LCDR2、LCDR3、HCDR1、HCDR2、HCDR3所示的序列具有85％以上同一性的序列，更优选与它们具有90％以上同一性的序列，最优选包含LCDR1、LCDR2、LCDR3、HCDR1、HC本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.PEG
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scFv抗体用于分离游离药物和PEG化载体药物的用途，所述PEG
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scFv抗体能够与聚乙二醇(PEG)结合形成抗原抗体复合物。2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述PEG
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scFv抗体包含如下LCDR1、LCDR2、LCDR3所示的轻链可变区和HCDR1、HCDR2、HCDR3所示的重链可变区或者与它们具有80％以上同一性的轻链可变区和重链可变区：LCDR1:QSIVHSDGNTYLCDR2:KVSLCDR3:YRGSHVPYTHCDR1:AITFKQAWHCDR2:IRSKAKNHAIHCDR3:VRGWYSYYFDY。3.根据权利要求2所述的用途，所述PEG
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scFv抗体的序列为SEQ ID No.1所示的序列：DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSIVHSDGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCYRGSHVPYTFGGGTKLEIKGGGGSGGGGSGGGGSEVKFEESGGGLVQPGGSMKLSCAASAITFKQAWMDWVRQSPEKGLEWVAEIRSKAKNHAIYYAESVKGRFTISRDDSKSSVYLQMNSLRAEDTG...

【专利技术属性】
技术研发人员：占昌友，张醉，唐文婧，应天雷，李澄，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：