【技术实现步骤摘要】
一种可3D打印的可见光交联胶原蛋白生物墨水材料的制备方法
[0001]本专利技术涉及胶原蛋白生物墨水材料
，具体涉及一种可3D打印的可见光交联胶原蛋白生物墨水材料的制备方法。
技术介绍
[0002]机在修复重建外科领域，过去几十年中已经开发了一系列具有生物活性和生物可吸收性的复合材料，如聚乙醇酸(PGA)、聚乳酸(PLA)、聚己内酯(PCL)、壳聚糖、胶原蛋白和明胶等用于科研和临床工作。但它们较差的力学性能、有限的生物功能和较高的细胞毒性仍是外科应用的挑战。在这些材料中，胶原蛋白因其是人体组织如骨骼、皮肤、血管、韧带、软骨等的天然组成成分，应用范围广而受到广泛的关注和研究，在组织工程应用中被广泛用于构建基质。
[0003]I型胶原蛋白是胶原蛋白家族中的一员，在人体中占总蛋白质的三分之一，占皮肤干重的四分之三，是细胞外基质中最普遍的成分，具有良好的可生物降解性、弱抗原性和优异的生物相容性。I型胶原蛋白由三个多肽链在空间中组成三螺旋结构，每条链的组成是Gly
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Y序列，其中...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种可3D打印的可见光交联胶原蛋白生物墨水材料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤(1)、取新鲜或冰冻牛肌腱用水洗净，切成1
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1mm小块；将所得牛肌腱小块用75％乙醇浸泡15分钟无菌化处理；然后倒去乙醇，加入无菌水润洗三次以洗净残留乙醇。步骤(2)、将步骤(1)中处理好的无菌牛肌腱小块加入到脱脂剂中，在摇床上过夜脱脂。步骤(3)、将步骤(2)脱脂后的肌腱加入到含有胃蛋白酶的PH2.5的酸性溶液中，以搅拌速率200rpm～800rpm机械搅拌12h～72h，酶解提取消化产物。步骤(4)、将步骤(3)消化产物以3000rpm离心15min～20min；收集含有I型胶原蛋白的粘稠上清液，弃去不溶物及未消化牛肌腱颗粒。步骤(5)、I型胶原蛋白的初步纯化：将步骤(4)清液滴加NaOH调节PH值至7.0，静置15min～30min，见清液逐渐凝胶化析出；收集析出的凝胶状物，置于离心管中以3000rpm离心15min～20min；收集含有I型胶原蛋白的凝胶状沉淀，弃去上清液。步骤(6)、将步骤(5)凝胶状沉淀重新溶解于酸性溶液中，得到初步纯化后的含有I型胶原蛋白的溶液。步骤(7)、I型胶原蛋白的进一步纯化：将步骤(6)溶液置于带有分子质量截止值100kDa的滤芯的离心管中，3500rpm离心30min；分子质量低于100kDa的杂蛋白和肽链碎片被过滤至下方的废液管中，弃去；分子质量高于100kDa的I型胶原蛋白溶液则被截留于上方的收集管中；收集I型胶原蛋白溶液。步骤(8)、将步骤(7)I型胶原蛋白溶液冷冻干燥24h～48h后得到高纯度I型胶原蛋白冻干粉。步骤(9)、I型胶原蛋白的MA改性：将步骤(8)冻干粉加入酸性溶液，并以300rpm磁力搅拌过夜，配制0.5mg/mLI型胶原蛋白溶液。步骤(10)、将MA(平均摩尔质量700g/mol)按体积比1：100逐滴加入步骤(9)溶液中，在室温20℃～25℃条件下以500rpm磁力搅拌24h～48h。步骤(11)、将步骤(10)溶液置于带有分子质量截止值100kDa的滤芯的离心管中，3500rpm离心30min，过量的小分子MA及反应副产物被过滤至滤芯下方的废液管中，弃去；分子质量高于100kDa的ColMA则被截留于上方的收集管中；收集ColMA溶液。步骤(12)、将步骤(11)溶液冷冻干燥24h～48h后得到高纯度ColMA冻干粉。步骤(13)、将步骤(12)冻干粉加入酸性溶液，并以300rpm磁力搅拌过夜，配制0.5mg/mL～0.6...
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