因子XII、激肽释放酶B、血浆夫列契因子1和激肽原1iRNA组合物及其使用方法技术

本发明专利技术涉及靶向激肽释放酶B、血浆(夫列契因子)1(KLKB1)基因、因子XII(哈格曼因子)(F12)基因、或激肽原1(KNG1)基因的RNAi剂，如双链RNAi剂，及使用这些RNAi剂来抑制KLKB1基因、F12基因、和/或KNG1基因的表达的方法以及治疗具有遗传性血管性水肿(HAE)和/或与接触活化途径相关病症的受试者的方法。活化途径相关病症的受试者的方法。活化途径相关病症的受试者的方法。

【技术实现步骤摘要】
因子XII、激肽释放酶B、血浆夫列契因子1和激肽原1 iRNA组合物及其使用方法
[0001]本申请是申请日为2016年5月5日和专利技术名称为“因子XII(哈格曼因子) (F12)、激肽释放酶B、血浆(夫列契因子)1(KLKB1)和激肽原1(KNG1)iRNA 组合物及其使用方法”的201680039784.6号中国专利技术专利申请的分案申请。
[0002]相关申请
[0003]本申请要求于2015年5月6日提交的美国专利临时申请第62/157,890号、于 2015年11月30日提交的美国专利临时申请第62/260,887号、及于2015年12月 14日提交的美国专利临时申请第62/266,958号的优先权。前述申请各自的整体内容是借由引用而并入本文。
[0004]序列表
[0005]本申请含有序列表，该序列表已经以ASCII格式经由电子版形式提交且借由引用而一起整体并入本文。于2016年5月3日创建的所述ASCII副本命名为 121301
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03120_SL.txt，其大小为721,827字节。

技术介绍

[0006]凝血系统对于止血是必不可少，其响应于血管损伤而于局部产生由纤维蛋白网及经活化的血小板形成的血块。凝血、凝血酶产生、及纤维蛋白形成可借由两种截然不同的途径起始，称为外源途径及内源途径。
[0007]该外源途径包括，于血管损伤的位点，将血浆因子VIIa(FVIIa)结合至血管外组织因子(TF)。
[0008]该内源途径是借由血浆因子XII(F12)在称为接触活化的过程中表面依赖性活化为F12a而起始。接触活化包括两种其他蛋白质，作为双分子复合物循环的前激肽释放酶及高分子量激肽原。总体上，此三种蛋白质，FXII、前激肽释放酶及HK，包含该“接触活化途径”，也称为“血管舒缓素激肽系统”。当借由将F12接合至荷负电的表面(或大分子)而起始该接触活化途径时，是诱发F12中的构形改变，导致活性F12(F12a)的形成。F12a裂解前激肽释放酶以产生活性激肽释放酶(α
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激肽释放酶)，其依次与F12相互活化以产生其他F12a。该活性激肽释放酶随后消化高分子量激肽原以释出缓激肽。借由接触活化产生的F12a还将因子XI(F11) 活化为F11a，触发一系列蛋白水解性裂解事件，使得凝血酶产生及纤维蛋白凝块形成达到顶点。
[0009]有趣的是，已经显示该接触系统并非为止血所需。缺乏接触活化蛋白质的人类及其他动物大都无症状，且同型组合的F12缺乏并不与任意疾病或病症相关。然而，于多种模型中已经显示，F12a的药理学抑制或F12或高分子量激肽原基因的缺损可保护小鼠不产生实验诱发的血栓形成，因此该接触系统在血栓形成性疾病中扮演重要角色。
[0010]在健康受试者体内，促凝血力与抗凝血及纤维溶解力之间存在恒定平衡。然而，多种遗传性、后天性、及环境性因子可使此平衡失衡，从而有利于凝血，造成血栓症，即血栓的病理学形成，触发致命性事件。举例而言，静脉内的血栓形成如深静脉血栓形成(DVT)，以及
动脉或心腔中的血栓形成，可导致诸如心肌梗塞或中风。血栓可阻碍其形成位点处的血流，或脱落并栓塞以阻断远处血管(如，肺栓塞或栓塞性中风)。
[0011]可导致病理性接触活化及接触途径介导的血栓形成的后天性/环境性因子包括多种牙科、外科及内科设置，如心房纤维性颤动、癌症治疗、固定化、中央静脉导管、移植物、及体外氧合作用。作为此类内科及外科设置的结果，组织损伤释放组织因子并面临接触途径的多种触发物，如活化该接触途径以导致血栓形成的DNA、 RNA、磷酸酯、胶原蛋白及层粘连蛋白。
[0012]使促凝血力与抗凝血及纤维溶解力之间的恒定平衡失衡的遗传性病症是遗传性血管性水肿(HAE)。HAE是罕见的常染色体显性病症，其对三分之一的患者造成四肢、面部、喉部、上呼吸道、腹部、躯干及生殖器的复发性水肿以及肿胀以及非瘙痒性疹子。未经治疗的HAE患者每月经历平均一至两次血管性水肿的侵袭，但发作的频次及严重性可显著改变。水肿性肿胀往往是损毁外观及机能，导致频繁就医，且患者有时需要精神科护理以治疗疾病相关性焦虑。腹部的侵袭可造成严重的疼痛、恶心及呕吐，且有时导致不适当的外科手术。此外，超过一半的HAE患者还于其生命中经历危及生命的喉部水肿，其可能需要紧急器气管造口术以预防窒息。据估计，HAE在美国影响不同族群的6,000至10,000人，并对患者造成经济损害，此类患者每年总计就医次数为15,000至30,000，且每年病假天数为20至100 天。
[0013]HAE是导致C1INH蛋白质缺乏的C1抑制剂(C1INH,SERPING1)基因突变的结果。已经显示超过250种不同的C1INH突变造成HAE临床表象。这些C1INH 突变典型是遗传性基因型突变，然而，高达25％的HAE病例是C1INH的新生突变的结果。I型HAE是借由C1INH突变所造成，该突变导致无效率分泌的截短型蛋白或错误折叠型蛋白的较低水平，且总计约占HAE病例的85％。II型HAE构成约 15％病例且是由邻近C1INH活性位点处的突变所造成，该突变导致正常水平的功能不良的C1INH蛋白。此外，因为凝血因子XII(F12)(哈格曼因子)中的官能获得性突变，出现III型HAE，这是该疾病的罕见的第三种形式。
[0014]C1抑制剂是丝氨酸蛋白酶抑制剂家族(serpin family)中的一种丝氨酸蛋白酶抑制剂，是补体及接触活化途径中的蛋白酶的主要抑制剂，且是纤维溶解性蛋白酶纤溶酶的次要抑制剂。这些血浆蛋白分解级联反应在HAE侵袭过程中活化，产生增加血管通透性的物质，如缓激肽。研究已经显示，该缓激肽活化使血管扩张并诱发中性粒细胞的趋化性的促炎性信号通路，且是借由接合于血管内皮细胞的缓激肽受体而提高HAE侵袭中血管通透性的主要物质。
[0015]典型地，C1INH抑制F12的自活化即F12a活化前激肽释放酶的能力、激肽释放酶对高分子量激肽原的活化、及激肽释放酶对F12的反馈活化。因此，造成C1INH 缺乏或F12官能获得的突变导致缓激肽的过量生成及HAE血管性水肿的发作。
[0016]目前，HAE可使用17α
‑
烷基化的雄激素进行预防性治疗以减低复发发作的可能性，或使用疾病特异性疗法以治疗急性侵袭。约70％的患有HAE的受试者是使用雄激素进行治疗或维持不治疗，且约30％接受治疗。雄激素是不适用于急性侵袭的短期治疗，因为其需几天时间才变得有效，且它们可能具有显著的副作用且可对生长及发育造成负面影响。结果，雄激素仅用于长期预防且典型不给药至孕妇或儿童。此外，目前用以治疗急性侵袭的治疗必须每周经静脉给药多次，或可能造成需要给药或后续留院观察的副作用，从而限制其用
以长期管理疾病的常规性预防用途。因此，由于缺少安全、有效、且以更便捷路径给药的方案及用以治疗包括孕妇及儿童的大比例患者的急性血管性水肿侵袭及预防性管理复发侵袭的方案，对于患有HAE的受试者的替代疗法存在需求。
[0017]因此本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种双链核糖核酸(dsRNA)剂，用于抑制因子XII(哈格曼因子)(F12)的表达，其中，该dsRNA剂包含正义链及反义链，其中，该正义链包含至少15个邻接核苷酸且与SEQ ID NO:9的核苷酸序列差异不超过3个核苷酸；并且该反义链包含至少15个邻接核苷酸且与SEQ ID NO:10的核苷酸序列差异不超过3个核苷酸。2.一种双链核糖核酸(dsRNA)剂，用于抑制因子XII(哈格曼因子)(F12)的表达，其中，该dsRNA剂包含正义链及反义链，该反义链包含互补区域，该互补区域包含至少15个邻接核苷酸且与表9、10、19C、19D、20、21、23、24、26、及27的任一者中所列的反义序列的任一者差异不超过3个核苷酸。3.一种双链核糖核酸(RNAi)剂，用于抑制因子XII(哈格曼因子)(F12)基因的表达，其中，该双链RNAi剂包含正义链及反义链，该反义链包含互补区域，该互补区域包含至少15个邻接核苷酸且与SEQ ID NO:9的核苷酸2000
‑
2060差异不超过3个核苷酸。4.一种双链核糖核酸(dsRNA)剂，用于抑制激肽释放酶B、血浆(夫列契因子)1(KLKB1)的表达，其中，该dsRNA剂包含正义链及反义链，其中，该正义链包含至少15个邻接核苷酸且与SEQ ID NO:1的核苷酸序列差异不超过3个核苷酸；并且该反义链包含至少15个邻接核苷酸且与SEQ ID NO:2的核苷酸序列差异不超过3个核苷酸。5.一种双链核糖核酸(dsRNA)剂，用于抑制激肽释放酶B、血浆(夫列契因子)1(KLKB1)的表达，其中，该dsRNA剂包含正义链及反义链，该反义链包含互补区域，该互补区域包含至少15个邻接核苷酸且与表3、4、19A、或19B任一者中所列的任一反义序列差异不超过3个核苷酸。6.一种双链核糖核酸(dsRNA)剂，用于抑制激肽原1(KNG1)的表达，其中，该dsRNA剂包含正义链及反义链，其中，该正义链包含至少15个邻接核苷酸且与SEQ ID NO:17的核苷酸序列差异不超过3个核苷酸；并且该反义链包含至少15个邻接核苷酸且与SEQ ID NO:18的核苷酸序列差异不超过3个核苷酸。7.一种双链核糖核酸(dsRNA)剂，用于抑制激肽原1(KNG1)的表达，其中，该dsRNA剂包含正义链及反义链，该反义链包含互补区域，该互补区域包含至少15个邻接核苷酸且与表15、16、19E、或19F任一者中所列的任一反义序列差异不超过3个核苷酸。8.如权利要求1至7中任一项所述的dsRNA剂，其中，该dsRNA剂包含至少一个经修饰的核苷酸。9.一种双链核糖核酸(dsRNA)剂，用于抑制因子XII(哈格曼因子)(F12)的表达，其中，该dsRNA剂包含形成双链区域的正义链及反义链，其中，该正义链包含至少15个邻接核苷酸且与SEQ ID NO:9的核苷酸序列差异不超过3个核苷酸；并且该反义链包含至少15个邻接核苷酸且与SEQ ID NO:10的核苷酸序列差异不超过3个核苷酸，其中，该正义链的实质上全部核苷酸及该反义链的实质上全部核苷酸是经修饰的核苷酸，并且其中，该正义链是接合至附接于3'末端的配体。10.一种双链核糖核酸(dsRNA)剂，用于抑制激肽释放酶B、血浆(夫列契因子)1(KLKB1)的表达，其中，该dsRNA剂包含形成双链区域的正义链及反义链，其中，该正义链包含至少15个邻接核苷酸且与SEQ ID NO:1的核苷酸序列差异不超过3
个核苷酸；并且该反义链包含至少15个邻接核苷酸且与SEQ ID NO:2的核苷酸序列差异不超过3个核苷酸，其中，该正义链的实质上全部核苷酸及该反义链的实质上全部核苷酸是经修饰的核苷酸，并且其中，该正义链是接合至附接于3'
‑
末端的配体。11.一种双链核糖核酸(dsRNA)剂，用于抑制激肽原1(KNG1)的表达，其中，该dsRNA剂包含形成双链区域的正义链及反义链，其中，该正义链包含至少15个邻接核苷酸且与SEQ ID NO:17的核苷酸序列差异不超过3个核苷酸；并且该反义链包含至少15个邻接核苷酸且与SEQ ID NO:18的核苷酸序列差异不超过3个核苷酸，其中，该正义链的实质上全部核苷酸及该反义链的实质上全部核苷酸是经修饰的核苷酸，并且其中，该正义链是接合至附接于3'
‑
末端的配体。12.如权利要求9至11中任一项所述的dsRNA剂，其中，该正义链的全部核苷酸及该反义链的全部核苷酸包含修饰。13.如权利要求8至12中任一项所述的dsRNA剂，其中，该经修饰的核苷酸的至少一个是选自下列所组成的组：脱氧核苷酸、3'
‑
末端脱氧胸腺嘧啶(dT)核苷酸、2'
‑
O
‑
甲基修饰的核苷酸、2'
‑
氟修饰的核苷酸、2'
‑
脱氧修饰的核苷酸、锁核苷酸、未锁核苷酸、构形限定的核苷酸、约束性乙基核苷酸、无碱基核苷酸、2
’‑
氨基修饰的核苷酸、2'
‑
O
‑
烯丙基修饰的核苷酸、2'
‑
C
‑
烷基修饰的核苷酸、2'
‑
羟基修饰的核苷酸、2'
‑
甲氧基乙基修饰的核苷酸、2'
‑
O
‑
烷基修饰的核苷酸、吗啉基核苷酸、氨基磷酸酯、包含非天然碱基的核苷酸、四氢吡喃修饰的核苷酸、1,5
‑
脱水己糖醇修饰的核苷酸、环己烯基修饰的核苷酸、包含硫代磷酸酯基的核苷酸、包含甲基磷酸酯基的核苷酸、包含5'
‑
磷酸酯的核苷酸、以及包含5'
‑
磷酸酯模拟物的核苷酸。14.如权利要求8至12中任一项所述的dsRNA剂，其中，该经修饰的核苷酸的至少一个是选自2'
‑
O
‑
甲基修饰及2'
‑
氟修饰所组成的组。15.如权利要求13或14所述的dsRNA剂，进一步包含至少一个硫代磷酸酯核苷酸间链联。16.如权利要求15所述的dsRNA剂，其中，该dsRNA剂包含6个至8个硫代磷酸酯核苷酸间链联。17.如权利要求1至7中任一项所述的dsRNA剂，其中，该互补区域的长度是至少17个核苷酸。18.如权利要求1至7中任一项所述的dsRNA剂，其中，该互补区域的长度是19至30个核苷酸。19.如权利要求18所述的dsRNA剂，其中，该互补区域的长度是21个核苷酸。20.如权利要求18所述的dsRNA剂，其中，该互补区域的长度是21至23个核苷酸。21.如权利要求18所述的dsRNA剂，其中，该互补区域的长度是19个核苷酸。22.如权利要求1至21中任一项所述的dsRNA剂，其中，每一条链的长度是不超过30个核苷酸。
23.如权利要求1至21中任一项所述的dsRNA剂，其中，每一条链的长度是独立为19至30个核苷酸。24.如权利要求1至20中任一项所述的dsRNA剂，其中，每一条链的长度是独立为19至25个核苷酸。25.如权利要求1至23中任一项所述的dsRNA剂，其中，至少一条链包含具有至少1个核苷酸的3
’
突出。26.如权利要求1至23中任一项所述的dsRNA剂，其中，至少一条链包含具有至少2个核苷酸的3
’
突出。27.如权利要求1至7中任一项所述的dsRNA剂，进一步包含配体。28.如权利要求27所述的dsRNA剂，其中，该配体是接合至该dsRNA剂的正义链的3
’
端。29.如权利要求9至11及28中任一项所述的dsRNA剂，其中，该配体是N
‑
乙酰基半乳糖胺(GalNAc)衍生物。30.如权利要求29项所述的dsRNA剂，其中，该配体是31.如权利要求30项所述的dsRNA剂，其中，该dsRNA剂是如下方案中所示的接合至该配体其中，X是O或S。
32.如权利要求31所述的dsRNA剂，其中，X是O。33.如权利要求1所述的dsRNA剂，其中，该剂是选自AD
‑
66170、AD
‑
66173、AD
‑
66176、AD
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66125、AD
‑
66172、AD
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66167、AD
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66165、AD
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66168、AD
‑
66163、AD
‑
66116、AD
‑
66126、及AD
‑
67244所组成的组。34.如权利要求4所述的dsRNA剂，其中，该剂是选自AD
‑
65077、AD
‑
65170、AD
‑
65103、AD
‑
65083、AD
‑
65087、AD
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65149、AD
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64652、AD
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65162、AD
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65153、AD
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65084、AD
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65099、及AD
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66948所组成的组。35.如权利要求6所述的dsRNA剂，其中，该剂是选自AD
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66259、AD
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66261、AD
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66262、AD
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66263、AD
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6634、及AD
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67344所组...

【专利技术属性】
技术研发人员：A，
申请(专利权)人：阿尔尼拉姆医药品有限公司，
类型：发明
国别省市：