一种人AD7c-NTP胶体金检测试纸条及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种人AD7c

【技术实现步骤摘要】
一种人AD7c
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NTP胶体金检测试纸条及其制备方法与应用


[0001]本专利技术涉及体外诊断
，具体来说，涉及一种人AD7c
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NTP胶体金检测试纸条及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]阿尔茨海默病相关神经丝蛋白(Alzheimer
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associated neuronal thread protein,AD7c
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NTP)是一种在神经元胞体中表达的跨膜磷蛋白。1996年，研究人员首次从AD患者脑内分离出AD7c
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NTP cDNA，检测临床标本发现早期AD患者脑脊液AD7c
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NTP浓度显著高于对照组以及非AD神经系统疾病对照组，这一研究成果引起了对AD7c
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NTP作为一项潜在AD生物标志物的广泛关注。到现在，已有大量研究表明AD7c
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NTP是一项在AD患者脑组织、脑脊液和尿液中表达量特异性升高的AD生物标志物，并且尿液与脑脊液AD7c
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NTP检测结果具有相似的特异性和灵敏度，尿液与脑脊液中AD7c
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NTP的水平与痴呆的严重程度呈正相关。
[0003]AD7c
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NTP为跨膜蛋白，可轻易透过细胞屏障；分子量仅为41KDa，可通过肾进入尿液；等电点9.89，为碱性蛋白，在血浆中与大多酸性的血浆蛋白紧密结合，到了肾脏后，由于肾小球基底膜上有一层带负电的粘性糖蛋白，带正电荷的AD7c
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NTP经超滤集中到了原尿中。在电荷和浓度的双重平衡体系下，尿液中AD7c
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NTP蛋白含量稳定，检测相对准确可靠。
[0004]目前人尿液AD7c
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NTP蛋白的检测方法以ELISA检测法为主，但ELISA方法操作时间较长，需要温育震荡仪、酶标仪等设备，不适用于现场快速检测。因此，建立一种快速、简便的检测方法很有必要。

技术实现思路

[0005]针对相关技术中的上述技术问题，本专利技术提出一种人AD7c
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NTP胶体金检测试纸条及其制备方法与应用，能够克服现有技术的上述不足。
[0006]为实现上述技术目的，本专利技术的技术方案是这样实现的：
[0007]一种人AD7c
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NTP胶体金检测试纸条，包括PVC底板和吸附层，所述吸附层由样品垫、玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜和吸水垫依次搭接组成，所述玻璃纤维膜上含有胶体金标记的AD7c
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NTP蛋白单克隆抗体A，所述硝酸纤维素膜上设置有质控线C和检测线T，所述质控线C上包被有羊抗鼠IgG的抗体，所述检测线T上包被有AD7c
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NTP蛋白单克隆抗体B。
[0008]优选地，所述人AD7c
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NTP胶体金检测试纸条还包括外包装壳，所述外包装壳包括上壳和下壳，所述上壳与下壳卡接固定，所述下壳内设置有固定扣，所述PVC底板和吸附层通过所述固定扣与所述下壳连接，所述上壳对应于硝酸纤维膜的位置设有质控线C和检测线T的观察窗，所述上壳对应于样品垫的位置设有加样孔。
[0009]优选地，所述外包装壳由聚氯乙烯材料制成。
[0010]优选地，所述吸水垫由纸质材料制成。
[0011]优选地，所述硝酸纤维素膜的侧面涂覆有胶黏剂。
[0012]根据本专利技术的另一方面，提供了一种人AD7c
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NTP胶体金检测试纸条的制备方法，
该方法包括如下步骤：
[0013]S1采用柠檬酸钠还原法制备胶体金溶液：向100mL去离子水中加入1mL l％氯金酸，加热至沸腾，迅速加入10mL l％柠檬酸三钠，继续煮沸15min，冷却后用去离子水补齐至原体积，得到胶体金溶液；
[0014]S2在pH值为8.0、AD7c
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NTP蛋白单克隆抗体A浓度为20μg/mL的条件下对AD7c
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NTP蛋白单克隆抗体A进行胶体金标记：取胶体金溶液10mL，加入lmL、0.lM K2CO3溶液，搅拌30min，加入200μg AD7c
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NTP蛋白单克隆抗体A，搅拌30min，加入lmL 10％BSA，搅拌30min，4℃10000g条件下离心30min，去除上清液，用0.01M磷酸钠缓冲液重悬沉淀，得到胶体金颗粒标记的AD7c
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NTP蛋白单克隆抗体A；
[0015]S3将玻璃纤维素膜浸泡、喷涂、干燥，得到标记物结合的玻璃纤维膜；
[0016]S4将AD7c
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NTP蛋白单克隆抗体B和羊抗鼠IgG分别喷涂在硝酸纤维素膜上，干燥，得到包被有检测线T和质控线C的硝酸纤维素膜；
[0017]S5在PVC底板上粘贴样品垫、玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述样品垫、玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜和吸水垫依次搭接。
[0018]本专利技术还提供了所述人AD7c
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NTP胶体金检测试纸条在非诊断目的检测尿液AD7c
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NTP蛋白中的应用。
[0019]本专利技术的有益效果：本专利技术的人AD7c
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NTP胶体金检测试纸条通过选择AD7c
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NTP蛋白单克隆抗体A、B及羊抗鼠IgG，能够实现人AD7c
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NTP蛋白的快速简便检测，敏感性和特异性较高，检测线性范围为10ng/ml～2000ng/ml，具有方便快捷、操作简单、结果准确等优点，适于临床快速检测。
附图说明
[0020]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0021]图1是根据本专利技术实施例所述的试纸条的结构示意图，其中：1、样品垫，2、玻璃纤维膜，3、硝酸纤维素膜，4、吸水垫，5、PVC底板，6、检测线T，7、质控线C；
[0022]图2是根据本专利技术实施例所述的试纸条的理论检测结果示意图；
[0023]图3是根据本专利技术实施例所述的AD7c
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NTP抗原标准品半定量实验结果；
[0024]图4是根据本专利技术实施例所述的临床尿液标本半定量实验结果。
具体实施方式
[0025]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0026]实施例1
[0027]如图1所示，根据本专利技术实施例所述的一种人AD7c
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NTP胶体金检测试纸条，包括
PVC底板5和吸附层，所述吸附层本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1. 一种人AD7c
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NTP胶体金检测试纸条，其特征在于，包括PVC底板和吸附层，所述吸附层由样品垫、玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜和吸水垫依次搭接组成，所述玻璃纤维膜上含有胶体金标记的AD7c
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NTP蛋白单克隆抗体A，所述硝酸纤维素膜上设置有质控线C和检测线T，所述质控线C上包被有羊抗鼠 IgG的抗体，所述检测线T上包被有AD7c
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NTP蛋白单克隆抗体B。2.根据权利要求1所述的人AD7c
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NTP胶体金检测试纸条，其特征在于，还包括外包装壳，所述外包装壳包括上壳和下壳，所述上壳与下壳卡接固定，所述下壳内设置有固定扣，所述PVC底板和吸附层通过所述固定扣与所述下壳连接，所述上壳对应于硝酸纤维膜的位置设有质控线C和检测线T的观察窗，所述上壳对应于样品垫的位置设有加样孔。3.根据权利要求2所述的人AD7c
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NTP胶体金检测试纸条，其特征在于，所述外包装壳由聚氯乙烯材料制成。4.根据权利要求1所述的人AD7c
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NTP胶体金检测试纸条，其特征在于，所述吸水垫由纸质材料制成。5.根据权利要求1所述的人AD7c
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NTP胶体金检测试纸条，其特征在于，所述硝酸纤维素膜的侧面涂覆有胶黏剂。6.一种如权利要求1
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5任意一项所述的人AD7c
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NTP胶体金检测试纸条的制备方法，其特征在于，包括如下步...

【专利技术属性】
技术研发人员：苟默，靳舒弈，赵立明，
申请(专利权)人：北京华瑞康源生物科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：