一种新冠疫苗载体及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种新冠疫苗载体及其应用。由SARS

【技术实现步骤摘要】
一种新冠疫苗载体及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，特别涉及一种新冠疫苗载体及其应用。

技术介绍

[0002]Omicron在受体结合结构域(RBD)中包含15个氨基酸突变，导致大多数 治疗性单克隆抗体和临床可用的疫苗无法使用。因此，迫切需要开发针对广泛 的SARS
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CoV
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2变体的通用且持久的疫苗。
[0003]SARS
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Cov
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2是有包膜的正链RNA病毒，周围环绕着刺突(S)蛋白三聚 体，在外表面形成特征性的球茎状冠状晕圈。S蛋白包含两个亚基：S1和 S2。S1亚基通过RBD和人血管紧张素转换酶2(hACE2)的结合介导识别和进 入人体细胞。随后，S蛋白发生构象变化，参与病毒包膜和细胞膜的融合。迄 今为止，大多数临床COVID
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19疫苗都是针对S蛋白或RBD设计的。血清学 研究表明，COVID
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19恢复期血清中的大部分中和活性是由RBD产生的。由于 一些RBD特异性人类中和单克隆抗体对SARS
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CoV
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2变体表现出广泛的保护 作用，因此RBD被证明是开发广谱疫苗的一个有趣目标。
[0004]佐剂被认为是诱导抗原特异性细胞免疫的有效工具。铝疫苗佐剂因其安全 性而被广泛使用。铝已显示优先诱导抗体产生的Th2反应。然而，需要激活病 毒特异性T细胞反应来加强对omicron和其他VOC的广泛保护。因此，迫切 需要能够引发针对SARS<br/>‑
CoV
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2和OVC的有效T细胞反应的疫苗。在过去的 几十年中，已经开发出几种模式识别受体(PRR)的小分子激动剂作为有效的佐 剂来激活细胞免疫反应并优化疫苗的功效。在这些分子中，干扰素基因刺激剂(STING)激动剂已被报道为诱导I型干扰素(IFN
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I)反应和炎性细胞因子的有吸 引力的佐剂。除了产生保护性抗体和刺激宿主对SARS
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CoV
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2的免疫反应外， 最近，STING激动剂已被证明可以抑制SARS
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CoV
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2在肺上皮细胞中的复制。 尽管有这些优势，但在体内直接利用STING激动剂仍面临许多挑战。COVID
‑ꢀ
19的广泛传播为STING激动剂开发安全有效的递送平台的迫切需要，该平台 以延长半衰期和提高稳定性的免疫诱导位点为目标，以诱导体内持久的免疫记 忆。
[0005]将抗原递送至树突状细胞(DC)为引发抗原特异性细胞免疫提供了有利的 策略。DC作为最强大的抗原呈递细胞(APC)，通过靶向用于摄取、加工和引 发T细胞反应的抗原，将先天免疫反应与适应性免疫反应联系起来。作为酿酒 酵母的天然提取物，酵母β
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葡聚糖颗粒(GP)形成2
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4μm大小的颗粒，可被吞 噬细胞吸收。GPs作为病原体相关分子模式(PAMP)被PRR Dectin
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1特异性识 别，PRR Dectin
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1主要在单核细胞/巨噬细胞表面表达。在被DC内化和交叉呈 递后，GP已被证明可以促进成熟DC刺激，并驱动T细胞克隆扩增。此外， 由于GP的安全性已获得FDA的批准，GP可被设计为STING激动剂的理想递 送平台。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种新冠疫苗载体。
[0007]本专利技术的另一目的在于，提供上述新冠疫苗载体的应用。
[0008]本专利技术的目的通过下述技术方案实现：
[0009]一种新冠疫苗载体，包括抗原蛋白、多糖以及干扰素基因刺激因子 (STING)激动剂。
[0010]所述的抗原蛋白、多糖以及干扰素基因刺激因子激动剂通过偶联结合在一 起。
[0011]所述的抗原蛋白和干扰素基因刺激因子激动剂被包裹偶联在多糖组成的颗 粒中。
[0012]所述的抗原蛋白包括但不限于：新型冠状病毒RBD(SARS
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COV
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2SpikeProtein RBD)、新型冠状病毒delta变种RBD(SARS
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COV
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2Spike ProteinRBD
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delta)、新型冠状病毒gamma变种RBD(SARS
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COV
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2Spike ProteinRBD
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gamma)、新型冠状病毒omicron变种RBD(SARS
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COV
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2Spike ProteinRBD
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omicron)。
[0013]所述的多糖优选为酵母β
‑
葡聚糖(GP)。
[0014]所述的干扰素基因刺激因子激动剂优选为diABZI。
[0015]所述的新冠疫苗载体的制备方法，优选包括如下步骤：
[0016](1)制备多糖微球；
[0017](2)将步骤(1)得到的多糖微球浸泡在含有干扰素基因刺激因子激动剂 和抗原蛋白的水溶液中，离心去上清，所得沉淀再悬浮，之后再次离心，将得 到的沉淀再次悬浮在交联剂中交联，交联完成后洗涤即得新冠疫苗载体。
[0018]步骤(1)中所述的多糖微球优选为酵母β
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葡聚糖颗粒(GP)微球，具体 制备步骤如下：
[0019]将酿酒酵母用水洗涤，将洗涤后的酵母悬浮在碱溶液中并加热搅拌，然后 离心，将沉淀物用水重新悬浮，然后使用酸溶液调节pH，孵育，再进行离 心，用水洗涤、异丙醇洗涤、丙酮洗涤后干燥得到酵母β
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葡聚糖颗粒微球。
[0020]步骤(1)中所述的加热搅拌为加热到85～95℃搅拌0.5～2小时。
[0021]所述的多糖微球和抗原蛋白的质量比优选为20:1～30:1。
[0022]所述的干扰素基因刺激因子激动剂和抗原蛋白的质量比优选为1:1～3:1。
[0023]步骤(2)中所述的浸泡的时间为浸泡1～3小时。
[0024]步骤(2)中所述的离心的条件为2000～4000rpm，10～30分钟。
[0025]步骤(2)中所述的再悬浮的条件为使用0.1～0.3％质量浓度的壳聚糖溶液 在室温下再悬浮0.5～2小时。
[0026]步骤(2)中所述的再次离心的条件为2000～4000rpm，10～30分钟。
[0027]步骤(2)中所述的交联的条件为使用0.05～0.2％质量浓度的京尼平交联 溶液悬浮交联0.5～2小时。
[0028]步骤(2)中所述的洗涤为使用PBS洗涤1～3次。
[0029]所述的新冠疫苗载体在制备新冠疫苗中的应用。
[0030]本专利技术相对于现有技术具有如下的优点及效果：
[0031]本专利技术提供了一种新冠疫苗载体及其应用。该载体由S本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种新冠疫苗载体，其特征在于：包括抗原蛋白、多糖以及干扰素基因刺激因子激动剂。2.根据权利要求1所述的新冠疫苗载体，其特征在于：所述的抗原蛋白、多糖以及干扰素基因刺激因子激动剂通过偶联结合在一起。3.根据权利要求1所述的新冠疫苗载体，其特征在于：所述的抗原蛋白和干扰素基因刺激因子激动剂被包裹偶联在多糖组成的颗粒中。4.根据权利要求1所述的新冠疫苗载体，其特征在于所述的抗原蛋白包括但不限于：新型冠状病毒RBD、新型冠状病毒delta变种RBD、新型冠状病毒gamma变种RBD、新型冠状病毒omicron变种RBD。5.根据权利要求1所述的新冠疫苗载体，其特征在于：所述的多糖为酵母β
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葡聚糖。6.根据权利要求1所述的新冠疫苗载体，其特征在于：所述的干扰素基因刺激因子激动剂为diABZI。7.权利要求1～6任一项所述的新冠疫苗载体的制备方法，其特征在于包括如下步骤：(1)制备多糖微球；(2)将步骤(1)得到的多糖微球浸泡在含有干扰素基因刺激因子激动剂和抗原蛋白的水溶液中，离心去上清，所得沉淀再悬浮，之后再次离心，将得到的沉淀再次悬浮在交联剂中交联，交联完成后洗涤即得新冠疫苗载体。8.根据权利要求7所述的新冠疫苗载体的制备方法，其特征在于步骤(1)中...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴建国，雷志伟，陈欣，祝乐清，潘攀，张其威，肖珩，李永奎，罗震，阮志慧，葛威威，谷雨，
申请(专利权)人：暨南大学，
类型：发明
国别省市：