一种脂肪间充质干细胞复苏培养液及复苏方法技术

本发明专利技术公开了一种脂肪间充质干细胞复苏培养液，包括基础培养基，与添加在基础培养基中的各组分：胰岛素、黄芪多糖、乙内酰脲、普利醇、荆芥内酯、L

【技术实现步骤摘要】
一种脂肪间充质干细胞复苏培养液及复苏方法


[0001]本专利技术涉及一种培养液，尤其涉及一种脂肪间充质干细胞复苏培养液及复苏方法。

技术介绍

[0002]间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)是一群具有多能性的细胞，可从包括脂肪、骨髓、脐带在内的各种组织中分离得到。因为它们具有可塑性，这些细胞具有巨大的临床和基础研究的吸引力。脂肪间充质干细胞是间充质干细胞的一种，是从脂肪组织提取的一种成体干细胞，具有向软骨、骨、脂肪等多种组织分化的潜能。脂肪组织通过脂肪抽吸术或外科手术容易获取，对供者创伤较小且不涉及伦理问题。而且，脂肪间充质干细胞在人和动物体内相对分布广泛、易于分离，且可以在体外条件下大量扩增和培养，现已是医学和组织工程领域最受欢迎的干细胞之一。
[0003]脂肪间充质干细胞在体外经过连续传代培养和冻存复苏后仍具有多向分化潜能，因此在液氮环境下超低温冻存已成为长期保存脂肪间充质干细胞的手段。脂肪间充质干细胞的冻存需要将处于对数生长期的细胞收集起来，加入含有特定成分的细胞冻存保护液制成单细胞悬液，分装于冻存管中置于液氮中进行长期冻存。冻存后的脂肪间充质干细胞需要经过复苏后才能恢复活性，正常使用。复苏率的高低会影响细胞的数量，并且部分细胞经复苏后增殖活性下降，不能满足要求。有必要研究一种用于脂肪间充质干细胞复苏的培养液，提高细胞的复苏率和活性。

技术实现思路

[0004]为了克服现有技术的不足，本专利技术的目的之一在于提供一种脂肪间充质干细胞复苏培养液，解决了冻存后的脂肪间充质干细胞复苏率低，活性差的问题。
[0005]本专利技术的目的之二在于提供一种脂肪间充质干细胞的复苏方法。
[0006]本专利技术的目的之一采用如下技术方案实现：
[0007]一种脂肪间充质干细胞复苏培养液，包括基础培养基，与添加在基础培养基中的各组分：胰岛素、黄芪多糖、乙内酰脲、普利醇、荆芥内酯、L
‑
谷氨酰胺、维生素C。
[0008]优先地，所述基础培养基为DMEM/F12培养基。
[0009]优先地，各组分在基础培养基中的终浓度为：胰岛素20
‑
30μg/mL、黄芪多糖25
‑
35μg/mL、乙内酰脲6.5
‑
9.5ng/mL、普利醇10
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15ng/mL、荆芥内酯3.5
‑
5.5ng/mL、L
‑
谷氨酰胺15
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20ug/mL、维生素C10
‑
20 ng/mL。
[0010]优先地，各组分在基础培养基中的终浓度为：胰岛素25μg/mL、黄芪多糖30μg/mL、乙内酰脲8.5ng/mL、普利醇12ng/mL、荆芥内酯4.5ng/mL、L
‑
谷氨酰胺18ug/mL、维生素C15 ng/mL。
[0011]本专利技术的目的之二采用如下技术方案实现：
[0012]一种脂肪间充质干细胞的复苏方法，采用上述复苏培养液进行复苏。
[0013]优先地，所述脂肪间充质干细胞的复苏方法，包括以下步骤：
[0014](1)向基础培养基中加入胰岛素、黄芪多糖、乙内酰脲、普利醇、荆芥内酯、L
‑
谷氨酰胺、维生素C，混合均匀后过滤除菌得到复苏液，备用；
[0015](2)取冻存的脂肪间充质干细胞在37
‑
40℃条件下快速复苏，加入复苏液稀释后离心收集脂肪间充质干细胞；
[0016](3)向步骤(2)的细胞中加入复苏液重悬，在37℃，5％CO2条件下复苏培养10
‑
12h，即完成。
[0017]优先地，步骤(3)复苏液中脂肪间充质干细胞的浓度为5
‑8×
104个/mL。
[0018]优先地，采用0.22μm的滤菌膜过滤除菌。
[0019]相比现有技术，本专利技术的有益效果在于：本专利技术提供一种脂肪间充质干细胞的复苏培养液，复苏液中添加了胰岛素、黄芪多糖、乙内酰脲、普利醇、荆芥内酯、L
‑
谷氨酰胺、维生素C，提高了脂肪间充质干细胞的复苏率和增殖活性。其中的乙内酰脲、普利醇对提高脂肪间充质干细胞的复苏率效果明显。荆芥内酯可以提高复苏后脂肪间充质干细胞的增殖活性。复苏液中的各组分协同作用，为脂肪间充质干细胞冻存后活细胞数量和活性提供保障。
[0020]本专利技术还提供了一种脂肪间充质干细胞的复苏方法，采用本专利技术提供的复苏液，操作简便，经过短时间的复苏培养后，脂肪间充质干细胞具有良好的活性，可正常用于常规扩增或其他临床用途。
具体实施方式
[0021]下面，结合具体实施方式，对本专利技术做进一步描述，需要说明的是，在不相冲突的前提下，以下描述的各实施例之间或各技术特征之间可以任意组合形成新的实施例。
[0022]实施例1
[0023]一种脂肪间充质干细胞复苏培养液，由DMEM/F12培养基，和添加在培养基中的以下各组分组成：胰岛素、黄芪多糖、乙内酰脲、普利醇、荆芥内酯、L
‑
谷氨酰胺、维生素C；各组分在培养基中的终浓度为：胰岛素25μg/mL、黄芪多糖30μg/mL、乙内酰脲8.5ng/mL、普利醇12ng/mL、荆芥内酯4.5ng/mL、L
‑
谷氨酰胺18ug/mL、维生素C15 ng/mL。
[0024]一种脂肪间充质干细胞的复苏方法，包括以下步骤：
[0025](1)向DMEM/F12培养基中加入胰岛素、黄芪多糖、乙内酰脲、普利醇、荆芥内酯、L
‑
谷氨酰胺、维生素C，混合均匀后用0.22μm的滤菌膜过滤除菌，得到复苏液，备用；
[0026](2)将在液氮中冻存2个月传代培养得到处于对数生长期的P2代脂肪间充质干细胞的冻存管在37℃的水浴锅中快速复苏，加入复苏液稀释后离心收集脂肪间充质干细胞；
[0027](3)向步骤(2)的细胞中加入复苏液重悬接种在T25培养瓶中，细胞的浓度为6
×
104个/mL，在37℃，5％CO2条件下复苏培养10h，即完成。
[0028]实施例2
[0029]一种脂肪间充质干细胞复苏培养液，由DMEM/F12培养基，和添加在培养基中的以下各组分组成：胰岛素、黄芪多糖、乙内酰脲、普利醇、荆芥内酯、L
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谷氨酰胺、维生素C；各组分在培养基中的终浓度为：胰岛素20μg/mL、黄芪多糖25μg/mL、乙内酰脲6.5ng/mL、普利醇10ng/mL、荆芥内酯3.5ng/mL、L
‑
谷氨酰胺15ug/mL、维生素C10 ng/mL。
[0030]一种脂肪间充质干细胞的复苏方法，包括以下步骤：
[0031](1)向DMEM/F12培养基中加入胰岛素、黄芪多糖、乙内酰脲、普利醇、荆芥内酯、L
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谷氨酰胺、维生素C，混合均匀后用0.22μm的滤菌膜过滤除菌，得到复苏液本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种脂肪间充质干细胞复苏培养液，其特征在于，包括基础培养基，与添加在基础培养基中的各组分：胰岛素、黄芪多糖、乙内酰脲、普利醇、荆芥内酯、L
‑
谷氨酰胺、维生素C。2.根据权利要求1所述脂肪间充质干细胞复苏培养液，其特征在于，所述基础培养基为DMEM/F12培养基。3.根据权利要求1所述脂肪间充质干细胞复苏培养液，其特征在于，各组分在基础培养基中的终浓度为：胰岛素20
‑
30μg/mL、黄芪多糖25
‑
35μg/mL、乙内酰脲6.5
‑
9.5ng/mL、普利醇10
‑
15ng/mL、荆芥内酯3.5
‑
5.5ng/mL、L
‑
谷氨酰胺15
‑
20ug/mL、维生素C10
‑
20 ng/mL。4.根据权利要求1所述脂肪间充质干细胞复苏培养液，其特征在于，各组分在基础培养基中的终浓度为：胰岛素25μg/mL、黄芪多糖30μg/mL、乙内酰脲8.5ng...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐营奎，朱芳芳，
申请(专利权)人：徐营奎，
类型：发明
国别省市：