一种电镜法观测浮游植物的样品处理方法技术

本发明专利技术公开了一种电镜法观测浮游植物的样品处理方法，包括以下步骤，步骤一，样品离心，并用固定剂固定；步骤二，根据浮游植物细胞大小，选择合适孔径的滤膜和与滤膜直径匹配的过滤器；步骤三，拧开过滤器，在结合部放入滤膜，之后拧紧过滤器，确保过滤器密闭性好；步骤四，接上注射泵，根据需求设定流速；步骤五，利用步骤四的装置方法对样品逐级梯度脱水；步骤六，样品进行CO2临界点干燥，喷金待观察。在本发明专利技术与现有技术对比，先前实验需要两个及以上实验人员才能完成操作，此方案可一个人单独完成；没重复过类似实验操作的实验人员，用现有方法所完成的实验样品，成功率远大于原先方法。法。

【技术实现步骤摘要】
一种电镜法观测浮游植物的样品处理方法


[0001]本专利技术属于浮游生物检测
，具体为一种电镜法观测浮游植物的样品处理方法。

技术介绍

[0002]浮游植物是一类生活在淡水和海水中的微小生物，其个体大多介于2
‑
200μm，大多作为初级生产者，能将太阳能转化为化学能，产生有机物，为更高级别的生物提供能量。因其个体微小，需要放大到超高倍率才能对其特征进行有效识别，扫描电镜可将物体放大到5000倍以上，因此是用来进行小型浮游生物鉴定的不二之选。
[0003]浮游生物在用扫描电镜进行观察前，为保持其形态与活物相比不发生改变，需要进行前期处理。一般需要依次经历固定、脱盐(海水浮游植物)、脱水、干燥和喷金5个步骤。干燥和喷金都有比较成熟和固定化的流程，但固定、脱盐和脱水三个步骤目前还没有成熟的方案，若处理不当，浮游植物细胞会破损、皱缩，从而观察不到原始状态，导致浮游植物形态鉴定失真，很多科研人员都要经过多次试错才能取得比较满意的结果。
[0004]从已有方法来看，在进行脱盐和脱水两个步骤时，不能精准定量和定时，使得后期难于界定是哪一步骤出现问题，极大浪费了时间和精力。另一方面，需要靠人全程参与，并根据实际情况及时做出调整，对实验人员技术要求较高，增加了行业壁垒。

技术实现思路

[0005]针对上述情况，为克服现有技术的缺陷，本专利技术提供一种电镜法观测浮游植物样品的处理方法，有效的解决了
技术介绍
中的问题。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种电镜法观测浮游植物的样品处理方法，包括以下步骤，
[0007]步骤一，样品离心，并用固定剂固定；
[0008]步骤二，根据浮游植物细胞大小，选择合适孔径的滤膜和与滤膜直径匹配的过滤器；
[0009]步骤三，拧开过滤器，在结合部放入合适孔径的滤膜，之后拧紧过滤器；
[0010]步骤四，使用注射器吸，根据需求设定流速，吸取带有浮游植物的液体；
[0011]步骤五，拔下注射器针头，装上带有滤膜的过滤器，将注射器中的液体注入到过滤器中；
[0012]步骤六，换新的注射器，注射器中吸入脱盐、脱水的试剂，进行脱盐、脱水操作；
[0013]步骤七，将新的注射器和带有浮游植物细胞的过滤器组合到一起，安装到注射泵上；
[0014]步骤八，根据实验要求，在注射泵上设置好试剂剂量和时间，注射泵将匀速进行注射。
[0015]步骤九，样品进行CO2临界点干燥，喷金待观察。
[0016]优选的，步骤五中使用PBS、乙醇、丙酮与乙酸异戊酯试剂。
[0017]优选的，脱盐脱水的具体操作步骤为，
[0018]第一步，使用PBS洗涤样品，
[0019]第二步，使用不同浓度的乙醇对样品进行脱水，
[0020]第三步，最后用丙酮、乙酸异戊酯对样品进行最后冲洗。
[0021]优选的，稀释后的乙醇溶液其浓度梯度为10％、30％、50％、70％、90％和100％。
[0022]优选的，所述丙酮和乙酸异戊酯的浓度为100％。
[0023]优选的，所述第三步中冲洗时长为10
‑
15min。
[0024]优选的，在样品固定时加入鲁格试剂、4％甲醛或2.5％戊二醛。
[0025]优选的，所述鲁格试剂、甲醛与戊二醛所占样品的体积视样品大小及数量而定，需完全覆盖样品。
[0026]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
[0027]先前实验需要两个及以上实验人员才能完成操作，此方案可一个人单独完成；没重复过类似实验操作的实验人员，用现有方法所完成的实验样品，成功率远大于原先方法。
具体实施方式
[0028]下面将结合本专利技术的实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例；基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0029]本专利技术公开了一种电镜法观测浮游植物的样品处理方法，包括以下步骤，
[0030]步骤一，样品离心，并用固定剂固定；
[0031]步骤二，根据浮游植物细胞大小，选择合适孔径的滤膜和与滤膜直径匹配的过滤器；
[0032]步骤三，拧开过滤器，在结合部放入合适孔径的滤膜，之后拧紧过滤器；
[0033]步骤四，使用注射器吸，根据需求设定流速，吸取带有浮游植物的液体；
[0034]步骤五，拔下注射器针头，装上带有滤膜的过滤器，将注射器中的液体注入到过滤器中；利用步骤四的装置方法对样品逐级梯度脱水；
[0035]步骤六，换新的注射器，注射器中吸入脱盐、脱水的试剂，进行脱盐、脱水操作；
[0036]步骤七，将新的注射器和带有浮游植物细胞的过滤器组合到一起，安装到注射泵上；
[0037]步骤八，根据实验要求，在注射泵上设置好试剂剂量和时间，注射泵将匀速进行注射。
[0038]步骤九，样品进行CO2临界点干燥，喷金待观察。
[0039]以上步骤，通过一人即可实现操作，有效减少了现有技术中对于人员的需求，而且使用上述方法能够提高成功率。
[0040]步骤五中使用PBS、乙醇、丙酮与乙酸异戊酯试剂。
[0041]脱盐脱水的具体操作步骤为，
[0042]第一步，使用PBS洗涤样品，
[0043]第二步，使用不同浓度的乙醇对样品进行脱水，
[0044]第三步，最后用丙酮、乙酸异戊酯对样品进行最后冲洗。
[0045]稀释后的乙醇溶液其浓度梯度为10％、30％、50％、70％、90％和100％。
[0046]丙酮和乙酸异戊酯的浓度为100％。
[0047]第三步中冲洗时长为10
‑
15min。
[0048]在样品固定时加入鲁格试剂、4％甲醛或2.5％戊二醛。
[0049]鲁格试剂、甲醛与戊二醛所占样品的体积视样品大小及数量而定，需完全覆盖样品。
[0050]需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
[0051]尽管已经示出和描述了本专利技术的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本专利技术的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本专利技术的范围由所附权利要求及其等同物限定。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种电镜法观测浮游植物的样品处理方法，其特征在于：包括以下步骤，步骤一，样品离心，并用固定剂固定；步骤二，根据浮游植物细胞大小，选择合适孔径的滤膜和与滤膜直径匹配的过滤器；步骤三，拧开过滤器，在结合部放入合适孔径的滤膜，之后拧紧过滤器；步骤四，使用注射器吸，根据需求设定流速，吸取带有浮游植物的液体；步骤五，拔下注射器针头，装上带有滤膜的过滤器，将注射器中的液体注入到过滤器中；步骤六，换新的注射器，注射器中吸入脱盐、脱水的试剂，进行脱盐、脱水操作；步骤七，将新的注射器和带有浮游植物细胞的过滤器组合到一起，安装到注射泵上；步骤八，根据实验要求，在注射泵上设置好试剂剂量和时间，注射泵将匀速进行注射。步骤九，样品进行CO2临界点干燥，喷金待观察。2.根据权利要求1所述的一种电镜法观测浮游植物的样品处理方法，其特征在于：步骤五中使用PBS、乙醇、丙酮与乙酸异戊酯试剂。3.根据权利要求1所述的一种电镜法观测浮游植物的样品处理方法，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：戴鑫烽，冷天泽，陆斗定，郭卓然，
申请(专利权)人：自然资源部第二海洋研究所，
类型：发明
国别省市：