一种APE1响应型靶向药物递送载体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种APE1响应型靶向药物递送载体及其制备方法和应用，所述制备方法包括以下步骤：S1.将药物溶液与双链结构的AP

【技术实现步骤摘要】
一种APE1响应型靶向药物递送载体及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及纳米材料与肿瘤学
，具体涉及一种APE1响应型靶向药物递送载体及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]肿瘤微环境是由多种细胞类型组成的复杂组织，包括血管内皮细胞、肿瘤相关成纤维细胞、免疫细胞、肿瘤干细、周细胞以及非细胞成分，如细胞外基质和分泌的细胞外分子。肿瘤微环境与正常细胞有很大不同，如由于肿瘤细胞快速增殖而血管来不及生长导致的血管异常；肿瘤深部血管疏松缺乏足够的氧气导致的缺氧环境，促进糖酵解产生乳酸，形成较低pH的细胞环境。同时，致密而紊乱的细胞也会导致细胞间质压增强，促进药物外排而产生耐药性，如何有效治疗肿瘤依旧为世纪难题。
[0003]传统抗癌药物临床毒副作用大、依从性差，治疗效果也非常有限。酶作为一种具有代表性的内源性刺激，参与多种关键的生理过程，在许多疾病相关的微环境中表现出不同的表达水平。与其他类型的刺激相比，利用酶作为刺激具有许多优点。酶是内源性的，不需要添加外部刺激，如磁场、超声或光，这提供了固有的生物相容性和生物安全的优点。此外，大多数酶反应快速、高效，反应条件温和(温和温度、pH和水溶液)。酶也可以对其底物表现出非凡的特异性和选择性，从而可以产生可控的化学反应和生物反应。到目前为止，蛋白酶、酯酶、磷酸酶、激酶和氧化还原酶是报道最广泛的酶类刺激物。随着对酶活性的深入了解，许多酶被用作肿瘤诊断或预后的生物标志物。诊断探针可以通过将酶识别底物与成像剂连接来设计，通过酶对底物进行特异性酶处理后，探针可以恢复其信号，从“关闭”到“打开”状态。在另一个重要的应用中，探索酶敏感的前药，以实现治疗药物在靶组织中的选择性激活，同时减少毒性副作用。
[0004]无嘌呤无嘧啶核酸内切酶1(Apurinic/apyrimidinic endonuclease 1,APE1)是一种具有DNA修复和转录调节功能的多功能蛋白质，在控制细胞对氧化应激反应方面具有多重作用，是真核细胞中主要的无嘌呤无嘧啶核酸内切酶，在所有DNA损伤的碱基切除修复(BER)通路中起关键作用。APE1能特异性识别和水解5'端附近的DNA无嘌呤无嘧啶(AP)位点，产生一个带有3'
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羟基和5'
‑
脱氧核糖磷酸基的缺口，或通过其氧化还原功能激活某些转录因子的DNA结合活性。在正常细胞中，APE1主要存在于细胞核中。在大多数肿瘤细胞中，由于旺盛的复制转录活动，不仅是细胞核，细胞质中也会有较高的酶浓度，且浓度是正常细胞内的数倍。近年来的研究表明，APE1的表达量及其在细胞内分布的变化与癌细胞的增殖、分化和凋亡等密切相关，如乳腺癌，非小细胞肺癌，前列腺癌。且APE1在血清中的含量也会随着人体的病变发生变化，因此APE1可以作为肿瘤检测的生物标志物。现有技术公开了一种磁性复合纳米颗粒，该磁性复合纳米颗粒表面通过亲和素
‑
生物素连接的含脱碱基位点DNA双链可被目标蛋白脱碱基核酸内切酶I特异性地识别和切割；虽然改专利记载可与将其内的荧光基团替换成抗癌药物，但是如何将药物替换上去，替换何种药物可以更好的发挥靶向递药的作用，仍需进一步研究。

技术实现思路

[0005]本专利技术要解决的技术问题是克服现有靶向递药载体的不足，提供一种APE1响应型靶向药物递送载体及其制备方法和应用。
[0006]本专利技术的目的在于提供一种APE1响应型靶向药物递送载体的制备方法。
[0007]本专利技术的目的在于提供所述制备方法制备的APE1响应型靶向药物递送载体。
[0008]本专利技术的目的在于提供所述APE1响应型靶向药物递送载体在制备抗肿瘤药物中的应用。
[0009]本专利技术的上述目的通过以下技术手段实现：
[0010]一种APE1响应型靶向药物递送载体的制备方法，包括以下步骤：
[0011]S1.将药物溶液与双链结构的AP
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DNA溶液混合，室温避光孵育0.5～1.5h，制备得到载药AP
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DNA复合物；
[0012]S2.将步骤S1制备得到的载药AP
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DNA复合物与亲和素修饰的磁性纳米材料的溶液混合，室温充分反应，洗涤，即得APE1响应型靶向药物递送载体。
[0013]本专利技术所述载药AP
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DNA复合物是指DNA双链碱基对之间插入有目标药物的双链结构的AP
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DNA；所述AP
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DNA是指具有AP位点的双链DNA。
[0014]本专利技术所述APE1响应型靶向药物递送载体是所述载药AP
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DNA复合物的双链结构的AP
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DNA与亲和素修饰的磁性纳米材料连接。
[0015]本专利技术所述双链结构的AP
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DNA包括第一单链和所述第二单链，所述第一单链/或第二单链的序列中含有AP位点，第一单链或第二单链上可含有1个或1个以上的AP位点；含有1个以上的AP位点的AP位点数目：可每隔10个碱基存在1个AP位点，CG含量没有特殊要求，不形成G四联体的情况下越高越好。
[0016]优选地，步骤S1中所述孵育为：10～30℃避光孵育1～1.5h。
[0017]进一步优选地，步骤S1中所述孵育为：10～30℃避光孵育1h。
[0018]优选地，步骤S1中所述药物溶液与双链结构的AP
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DNA溶液以摩尔比为25：1～6混合。
[0019]进一步优选地，步骤S1中所述药物溶液与双链结构的AP
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DNA溶液以摩尔比为25：1～5混合。
[0020]更进一步优选地，步骤S1中所述药物溶液与双链结构的AP
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DNA溶液以摩尔比为25：5混合。
[0021]优选地，步骤S2中所述室温充分反应为：5～30℃反应1min～3h。
[0022]优选地，步骤S2中所述室温充分反应为：5～30℃反应3h。
[0023]优选地，步骤S1中所述双链结构的AP
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DNA包括第一单链和第二单链，所述第一单链或第二单链的序列长度为30～100bp。
[0024]优选地，所述第一单链为序列为5
’‑
TGAGCTCAAGXCGTAACC
‑3’
的DNA
‑
18，其中，X代表AP位点；所述第二单链为序列为5
’‑
GGTTACGACTTGAGCTCACTCAAGCAGTTGATCCTTTGGAAAAAAA
‑3’
的DNA
‑
46。
[0025]优选地，所述第一单链和第二单链混合的摩尔比为1：0.5～1.5。
[0026]进一步优选地，所述第一单链和第二单链混合的摩尔比为1：1。
[0027]优选地，所述步骤S1中所述药物溶液中的药物为阿霉素或铂类药物。
[0028]进一步优选地，所述铂类药物为顺铂、卡本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种APE1响应型靶向药物递送载体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.将药物溶液与双链结构的AP
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DNA溶液混合，室温避光孵育0.5～1.5h，制备得到载药AP
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DNA复合物；S2.将步骤S1制备得到的载药AP
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DNA复合物与亲和素修饰的磁性纳米材料的溶液混合，室温充分反应，洗涤，即得APE1响应型靶向药物递送载体。2.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤S1中所述药物溶液与双链结构的AP
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DNA溶液以摩尔比为25：1～6混合。3.根据权利要求2所述制备方法，其特征在于，步骤S1中所述药物溶液与双链结构的AP
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DNA溶液以摩尔比为25：1～5混合。4.根据权利要求3所述制备方法，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：翟筠秋，彭卓，梁光忠，宁科妮，
申请(专利权)人：广州中医药大学广州中医药研究院，
类型：发明
国别省市：