一种基于ICT原理检测N2H4和Cu制造技术

本发明专利技术公开一种新型有效的用于双通道特异性识别内N2H4和Cu

【技术实现步骤摘要】
和Cu
2+
的双通道荧光探针，该荧光探针可区分 N2H4和Cu
2+
与其他分析物。
[0006]本专利技术要解决的第二个技术问题是提供一种可选择性N2H4和 Cu
2+
的双通道荧光探针的制备方法。
[0007]本专利技术要解决的第三个技术问题是提供上述可选择性N2H4和 Cu
2+
的双通道荧光探针的应用方法。
[0008]2.技术方案
[0009]为解决上述问题，本专利技术采取如下技术方案：
[0010]一种基于分子内电荷转移原理用于双通道特异性检测N2H4和 Cu
2+
的荧光探针，所述荧光探针为(E)
‑2‑
(3
‑
(4
‑
(二乙氨基) 苯基)丙烯酰)苯基吡啶甲酸酯，其化学结构式如式(I)所示：
[0011][0012]本专利技术还提供了上述荧光探针的制备方法，包括以下步骤：
[0013](1)(1)荧光母体(E)
‑3‑
(4
‑
(二乙氨基)苯基)
‑1‑
(2
‑ꢀ
羟基苯基)丙
‑2‑
烯
‑1‑
酮合成具体操作步骤如下：
[0014]①
将2，4
‑
二乙氨基苯甲醛和2
‑
羟基苯乙酮使用EtOH作溶剂混合均匀；
[0015]②
向步骤
①
所得的混合溶液中添加KOH水溶液，并在室温下搅拌24小时；
[0016]③
待步骤
②
中反应完成后用稀盐酸中和反应混合物，直到将 pH值调整到7.0；
[0017]④
将步骤
③
所得的混合物通过抽吸过滤收集沉淀，并用乙醇洗涤三次，所得到的残留物利用洗脱机通过硅胶层析进一步纯化，得到荧光基团(E)
‑3‑
(4
‑
(二乙氨基)苯基)
‑1‑
(2
‑
羟基苯基) 丙
‑2‑
烯
‑1‑
酮；
[0018](2)荧光探针(E)
‑2‑
(3
‑
(4
‑
(二乙氨基)苯基)丙烯酰) 苯基吡啶甲酸酯合成具体操作步骤如下：
[0019]①
使用二氯甲烷为溶剂将荧光基团(E)
‑3‑
(4
‑
(二乙氨基) 苯基)
‑1‑
(2
‑
羟基苯基)丙
‑2‑
烯
‑1‑
酮和2
‑
吡啶甲酸溶解并混合均匀；
[0020]②
向步骤
①
所得的混合溶液中加入4
‑
二甲氨基吡啶和1
‑
(3二甲氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺盐酸盐；
[0021]③
将步骤
②
中所得的混合溶液在室温下搅拌过夜，用旋转蒸发器除去溶剂，用硅胶柱纯化得到荧光探针(E)
‑2‑
(3
‑
(4
‑
(二乙氨基)苯基)丙烯酰)苯基吡啶甲酸酯。
[0022]本专利技术提供了上述荧光探针对Cu
2+
和N2H4的识别影响因素筛选方法，包括以下步骤：
[0023](1)将所述的荧光探针用不同溶剂配制成浓度为10μM的工作溶液，所述溶剂分别为二甲基亚砜、N，N
‑
二甲基甲酰胺、乙腈、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯和水；向不同溶剂配制
好的10μM的荧光探针溶液中分别对应加入200μM Cu
2+
和N2H4，每种溶液设置三个平行；反应完全，得到48份反应物，分别对48份反应物进行荧光强度测定；荧光探针检测Cu
2+
体系中使用乙腈效果最好；荧光探针检测N2H4体系中使用二甲基亚砜效果最好，最后选择乙腈为溶剂检测Cu
2+
，二甲基亚砜为溶剂检测N2H4；
[0024](2)将所述的荧光探针用不同比例的二甲基亚砜与4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸配制成浓度为10μM的荧光探针溶液，所述乙腈和二甲基亚砜比例分别为10％，20％，30％，40％，50％，60％，70％，80％，90％， 100％；向使用不同比例乙腈和二甲基亚砜配制好的10μM的荧光探针溶液中分别对应加入200μM Cu
2+
和N2H4，每种溶液设置三个平行；反应完全，得到60份反应物，分别对60份反应物进行荧光强度测定；结果表明荧光探针检测Cu
2+
体系中4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸与乙腈比例为3:7最佳，荧光探针检测N2H4体系中4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸与二甲基亚砜比例为2:8最佳；
[0025](3)将所述的荧光探针用缓冲液配制成浓度为10μM的荧光探针溶液，所述Cu
2+
检测体系工作液由体积比为3:7的4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸和乙腈配制成，N2H4检测体系工作液由体积比为2:8的4
‑ꢀ
羟乙基哌嗪乙磺酸和二甲基亚砜配制成；设置缓冲溶液pH为2，3， 4，5，6，6.5，7，7.4，8，9，10，11，12；向不同pH浓度为 10μM的近红外荧光探针溶液中分别对应加入100μM Hg
2+
，每种溶液设置三个平行；反应完全，得到78份反应物，分别对78份反应物进行荧光强度测定；结果表明N2H4和Cu
2+
检测体系的最适pH均在7.4附近。
[0026]本专利技术还提供了上述荧光探针的应用，上述荧光探针用于双通道特异性检测N2H4和Cu
2+
。
[0027]进一步地，所述的荧光探针用于环境溶液介质中N2H4和Cu
2+
特异性的检测方法，操作步骤如下：
[0028](1)将所述的荧光探针配制成浓度为10μM的4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸和二甲基亚砜缓冲液；所述缓冲液中4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸和二甲基亚砜的体积比为3:7，缓冲液的pH值为7.4；
[0029](2)向配制好的10μM的荧光探针溶液中分别加入200μM 的分析物溶液，包括生物体内常见氨基酸：半胱氨酸，天冬氨酸，色氨酸，酪氨酸，组氨酸，谷氨酸，苏氨酸；各种金属离子：碘化钾，氯化镍，硝酸钙，氟化钠，氯化镁，氯化钴，氯化锰，氯化钡，氯化铵和氯化银，反应完全后进行荧光强度测定；
[0030](3)通过对荧光强度变化的研究，表明该荧光探针可以与N2H4和Cu
2+
进行特异性反应产生显著的荧光变化，即所述荧光探针可以特异性双通道识别N2H4和Cu
2+
。
[0031]进一步地，所述的荧光探针用于检测人体宫颈癌组本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于分子内电荷转移原理用于双通道特异性检测N2H4和Cu
2+
的荧光探针，其特征在于：所述荧光探针为（E）
‑2‑
（3
‑
（4
‑
（二乙氨基）苯基）丙烯酰）苯基吡啶甲酸酯，其化学结构式如式（
І
）所示：式（
І
）。2.权利要求1所述的荧光探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）荧光母体（E）
‑3‑
（4
‑
（二乙氨基）苯基）
‑1‑
（2
‑
羟基苯基）丙
‑2‑
烯
‑1‑
酮合成具体操作步骤如下：
①
将2，4
‑
二乙氨基苯甲醛和2
‑
羟基苯乙酮使用EtOH作溶剂混合均匀；
②
向步骤
①
所得的混合溶液中添加KOH水溶液，并在室温下搅拌24小时；
③
待步骤
②
中反应完成后用稀盐酸中和反应混合物，直到将pH值调整到7.0；
④
将步骤
③
所得的混合物通过抽吸过滤收集沉淀，并用乙醇洗涤三次，所得到的残留物利用洗脱机通过硅胶层析进一步纯化，得到荧光基团（E）
‑3‑
（4
‑
（二乙氨基）苯基）
‑1‑
（2
‑
羟基苯基）丙
‑2‑
烯
‑1‑
酮；（2）荧光探针（E）
‑2‑
（3
‑
（4
‑
（二乙氨基）苯基）丙烯酰）苯基吡啶甲酸酯合成具体操作步骤如下：
①
使用二氯甲烷为溶剂将荧光基团（E）
‑3‑
（4
‑
（二乙氨基）苯基）
‑1‑
（2
‑
羟基苯基）丙
‑2‑
烯
‑1‑
酮和2
‑
吡啶甲酸溶解并混合均匀；
②
向步骤
①
所得的混合溶液中加入4
‑
二甲氨基吡啶和1
‑
（3 二甲氨基丙基）
‑3‑
乙基碳二亚胺盐酸盐；
③
将步骤
②
中所得的混合溶液在室温下搅拌过夜，用旋转蒸发器除去溶剂，用硅胶柱纯化得到荧光探针（E）
‑2‑
（3
‑
（4
‑
（二乙氨基）苯基）丙烯酰）苯基吡啶甲酸酯。3.权利要求1所述的荧光探针对Cu
2+
和N2H4识别影响因素的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将权利要求1所述的荧光探针用不同溶剂配制成浓度为10μM的工作溶液，所述溶剂分别为二甲基亚砜、N，N
‑
二甲基甲酰胺、乙腈、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯和水；向不同溶剂配制好的10μM的荧光探针溶液中分别对应加入200μM Cu
2+
和N2H4，每种溶液设置三个平行；反应完全，得到48份反应物，分别对48份反应物进行荧光强度测定；荧光探针检测Cu
2+
体系中使用乙腈效果最好；荧光探针检测N2H4体系中使用二甲基亚砜效果最好，最后选择乙腈为溶剂检测Cu
2+
，二甲基亚砜为溶剂检测N2H4；（2）将权利要求1所述的荧光探针用不同比例的二甲基亚砜与4
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羟乙基哌嗪乙磺酸配制成浓度为10μM的荧光探针溶液，所述乙腈和二甲基亚砜比例分别为10%，20%，30%，40%，50%，60%，70%，80%，90%，100%；向使用不同比例乙腈和二甲基亚砜配制好的10μM的荧光探针溶液中分别对应加入200μM Cu
2+
和N2H4，每种溶液设置三个平行；反应完全，得到60份反应
物，分别对60份反应物进行荧光强度测定；结果表明荧光探针检测Cu
2+
体系中4
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羟乙基哌嗪乙磺酸与乙腈比例为3:7最佳，荧光探针检测N2H4体系中4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸与二甲基亚砜比例为2:8最佳；（3）将权利要求1所述的荧光探针用缓冲液配制成浓度为10 μM的荧光探针溶液，所述Cu
2+
检测体系工作液由体积比为3:7的4
‑<...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱美庆，庞晓慧，赵立博，王毅，凡福港，刘喜娜，杨晓凡，万杰，
申请(专利权)人：安徽工程大学，
类型：发明
国别省市：