一种鉴别油菜蜂王浆的方法与应用技术

本发明专利技术涉及蜂王浆品种鉴别技术领域，具体公开了一种鉴别油菜蜂王浆的方法与应用。本发明专利技术研究发现S

【技术实现步骤摘要】
一种鉴别油菜蜂王浆的方法与应用


[0001]本专利技术涉及蜂王浆品种鉴别
，具体地说，涉及一种鉴别油菜蜂王浆的方法与应用。

技术介绍

[0002]蜂王浆是年轻工蜂出生后第5天至第14天之间的头腺系统（下咽腺和下颌腺）分泌产生的一种黄白色的酸性分泌物，有蜜蜂产生的轻微刺鼻的刺鼻气味和味道，含有人体所需的几乎所有营养物质，包括多种人体必需氨基酸、维生素、王浆酸、微量元素和乙酰胆碱等营养成分。蜂王浆具有抗菌、抗炎、抗氧化、抗肿瘤、免疫力调节、降压、降胆固醇以及调节血糖稳态和保护神经系统等功能特性，深受消费者的喜爱。蜜蜂通过采集花粉混合蜂蜜酿造成蜂粮，为蜜蜂自身活动提供蛋白质，为哺育蜂分泌、合成蜂王浆提供原料，因不同的蜜源植物花粉成分不同，哺育蜂食用不同的蜂花粉后分泌的蜂王浆质量也存在差异。
[0003]目前，蜂王浆可按照花期分为油菜王浆、荆条王浆、芝麻王浆等，按照季节分为春浆、夏浆、秋浆，也可根据国标分为优等品和合格品。由于蜜源植物的不同，不同品种蜂王浆的生物活性存在差异，其质量和价格也存在差异，进而影响消费者的购买行为。油菜是重要的油料作物，其种植规模、种植业产值高，能为蜂王浆的生产提供足量的天然蜜粉源。从春季开始各地油菜花陆续开放，充足的蜜粉源为蜂群春繁及蜂王浆的生产提供了条件，在油菜花期生产的蜂王浆则称为油菜蜂王浆，而且油菜蜂王浆在春季生产又被称为春浆，此时生产的蜂王浆王浆酸含量较高，一般认为是最好的王浆。但油菜蜂王浆生产受花期因素的影响其产量是有限的，而市场需求高，存在人为追求经济利益将其他品质一般的蜂王浆冒充油菜王浆，破坏蜂产品消费市场竞争秩序，损害消费者合法权益的情况。因此，寻找一种技术方法实现油菜蜂王浆的品种鉴别具有重要意义。
[0004]目前，有关标准规定了蜂王浆的色泽、水分、蛋白质、10
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羟基
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(2)癸烯酸等指标，但这些基础指标只能用于判断蜂王浆质量好坏而不能达到区分鉴别蜂王浆品种的目的，使得蜂王浆的真实性问题得不到有效解决。随着仪器分析方法的应用，越来越多的仪器分析方法用于蜂王浆真实性研究，如中国专利202210221269.7、201510013272.x分别报道了稳定同位素质谱分析法和气相色谱
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质谱法用于不同来源蜂王浆的识别技术和成分差异研究，还有研究利用红外光谱（杨心浩. 基于红外光谱分析蜂王浆品质及鉴别麦卢卡蜂蜜掺假的方法研究[D].暨南大学,2020.）、拉曼光谱（陈繁等.基于拉曼光谱技术的蜂王浆品质定量模型研究[J].光谱学与光谱分析,2019,39(02):471
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476.）等技术对蜂王浆质量进行快速鉴别。但是这些方法都存在一定缺陷，无法对来自不同蜜源植物的蜂王浆进行鉴别，且检出时间耗时长，对数据处理后建立的判别模型存在一定误差，准确性有待提高，因此建立一种快速、准确且稳定的化学分析方法是十分必要的。
[0005]近年来，超高效液相色谱
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高分辨质谱因其超高分离度、超高速度、超高灵敏度等特点，可以对样品中的小分子化学物质进行更精确地检测，使结果更可靠，更有信服力。此外结合非靶向代谢组学分析数据获得样品中代谢产物，通过寻找代谢差异物质或特征标志
物开始逐渐用于食品真实性和溯源等相关领域方向。Chuan Ma利用非靶向代谢组学研究了迁徙养蜂过程中在不同花期产生的蜂王浆的组成变化，其结果表明不同花期蜂王浆中代谢物质存在显著差异，并可根据差异代谢物（包括单糖和寡糖）可作为区分不同蜜源蜂王浆的依据（Ma C, Ma B, Li J, et al. Changes in chemical composition and antioxidant activity of royal jelly produced at different floral periods during migratory beekeeping[J]. Food Research International, 2022, 155: 111091），具体依据代谢差异物建立的OPLS
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DA模型，运用偏最小二乘回归建立代谢物表达量和样本类别之间的关系模型，来实现对样本类别的预测，但是本领域公知蜂王浆化学成分含量受到多种因素的影响，在化学成分相对含量改变的情况下将可能会直接影响模型预测的准确性，无法达到理想的区分效果。目前没有发现研究不同蜜源植物的蜂王浆特征标志物的相关报道，也尚未发现有利用超高效液相色谱
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高分辨质谱技术筛选特征标志物实现油菜蜂王浆品种鉴别的方法和应用。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供一种新的鉴别油菜蜂王浆的方法与应用。
[0007]为了实现该目的，本专利技术的技术方案如下：S
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甲基
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L
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半胱氨酸亚砜在鉴别油菜蜂王浆中的应用。
[0008]本专利技术提供了S
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甲基
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L
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半胱氨酸亚砜（SMCS）作为油菜蜂王浆特征性标志物的应用，通过检测样品中是否存在S
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甲基
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L
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半胱氨酸亚砜，能快速鉴定油菜蜂王浆的真实性，为蜂王浆的真实性研究提供一种新的思路和方法。
[0009]特征标志物的鉴定一般通过靶标技术，对潜在特征标志物定性定量分析，此方式操作过程繁琐，工作量大，而本专利技术采用非靶向代谢组学和超高效液相色谱
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高分辨质谱的方式在全谱图上寻找特征标志物，更加快速准确，可靠地对更多化合物进行鉴定、定量测定和确认，实现了对蜂王浆更理想的鉴别区分。
[0010]具体地，本专利技术通过超高效液相色谱
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高分辨质谱（UHPLC
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Q
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Exactive Orbitrap
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MS）在正模式下对油菜蜂王浆样品和其他类别蜂王浆样品（荆条蜂王浆、葡萄蜂王浆和芝麻蜂王浆）扫描分析获得了全质量原始.raw数据，将原始.raw数据导入Compound Discover 3.3软件，使用非靶向代谢组学工作流程模板进行处理，蜂王浆样品的原始.raw数据通过Compound discoverer 3.3软件进行碎片离子搜索、质量亏损过滤、数据归一化及借助ChemSpider、mzCloud、mzVault和Mass Lists数据库等功能完成了化合物定性鉴定，之后对定性结果再进行查找，找寻能区分油菜蜂王浆和其他类别蜂王浆的特征标志物，最终本专利技术发现了一种只在油菜蜂王浆中存在物质峰m/z 152.03724，经过上述四个数据库检索定性，将样品的二级质谱图与标准品的二级质谱图（见图1）进行比对，并结合软件中Predicted Compositions结果进行分析，得出该物质峰对应的化合物为S
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甲基
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L
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半胱氨酸亚砜，属于氨基酸类衍生物，存在于十字花科植物中本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.S
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甲基
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L
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半胱氨酸亚砜在鉴别油菜蜂王浆中的应用。2.一种鉴别油菜蜂王浆的方法，其特征在于，以S
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甲基
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L
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半胱氨酸亚砜作为特征标志物，当在待测蜂王浆中检测到所述特征标志物时，则判断待测蜂王浆为油菜蜂王浆。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，包括：（1）待测蜂王浆样品前处理；（2）UHPLC
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Q
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Exactive Orbitrap
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MS数据采集；（3）通过数据定性鉴别分析，对待测蜂王浆样品中的化合物进行定性鉴定；（4）从定性鉴定结果中，定向查找待测蜂王浆样品中是否存在S
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甲基
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L
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半胱氨酸亚砜。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤（2）的数据采集时的色谱条件中，流动相的A相为0.1％甲酸水溶液；B相为甲醇；梯度洗脱程序如下：。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤（2）的数据采集时的色谱条件中，色谱柱为Agilent Eclipse Plus C18；柱温为40
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45℃；进样体积为2
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5 μL；流速为0.3 mL/min；和/或，步骤（2）的数据采集时的质谱条件为：扫描模式：Full MS/dd
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MS2，正离子模式；扫描范围：70
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1000 m/z；分辨率：Full MS模式下为70000，dd
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MS2模式下为17500；喷雾电压：3.5 kv；...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈兰珍，乔栋，黎洪霞，刘肇龙，彭文君，
申请(专利权)人：中国农业科学院蜜蜂研究所，
类型：发明
国别省市：