筛选血清外泌体LncRNAHULC作为肝癌早期标记物的方法及其制备试剂盒的用途技术

本发明专利技术公开了一种筛选血清外泌体LncRNA HULC作为肝癌早期标记物的方法及其制备试剂盒的用途。该筛选方法是通过定量RT

【技术实现步骤摘要】
筛选血清外泌体LncRNA HULC作为肝癌早期标记物的方法及其制备试剂盒的用途


[0001]本专利技术涉及一种生物医学领域的用于肝癌早期诊断的标记物及其制备试剂盒的方法与用途，具体地，涉及一种筛选血清外泌体LncRNA HULC作为肝癌早期标记物的方法及其制备试剂盒的用途。

技术介绍

[0002]肝癌的恶性程度极高，被称为“癌中之王”。肝癌的早期症状很不典型，往往很容易被忽视，等出现明显的症状已是中晚期。目前临床肝癌诊疗中存在着早期诊断难、治疗缺乏针对性等问题。因此，对早期肝癌及肝癌标记物的研究和确定，特别是利用其制备灵敏有效的试剂盒，就尤为重要和迫切。
[0003]目前，国内外临床上常用的肝癌诊断标记物为甲胎蛋白(AFP)，但AFP诊断肝癌的敏感度和特异度并不十分理想。γ
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谷氨酰转肽酶同工酶Ⅱ(GGTⅡ)在肝癌患者血清中明显升高，而在健康人体内几乎检测不到，曾被认为是HCC(肝细胞癌，hepatocellular carcinoma)的特异性标志物，但用于诊断HCC的敏感性仅为43.8％，后续研究证实GGTⅡ在不同肝脏疾病中均有表达，特异性不强，限制了其临床应用。超声检查通常难以发现、确认小于3cm的肿块，且超声医师个体诊断水平的差异对诊断结果有很大影响。CT诊断费用较高，产生的辐射对患者具有一定影响，难以作为定期筛查方式推广应用。而MRI的诊断费用更高，目前也没有成为常规定期筛查方式。
[0004]因此，寻找诊断肝癌特别是早期肝癌的分子标记物，成为目前研究的重点和难点。早期诊断对肝癌患者的治疗、预后意义重大。在肝癌进展的不同阶段，肿瘤标志物的种类、数量和含量均发生变化，随着相关研究的深入，新的肝癌标志物不断被发现，而寻找灵敏、准确的肝癌标志物，制备使用方便的试剂盒，对于早期肝癌进行定性定量检测是十分必要的。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种用于肝癌早期诊断的标记物及其制备试剂盒的方法与用途，可以解决现有技术中存在的问题，得到简便、快速、敏感性与特异性强的标记物和试剂盒，能够用于肝癌早期诊断，提高肝癌患者的生存率，并且易于推广应用。
[0006]为了达到上述目的，本专利技术提供了一种筛选出血清外泌体LncRNA HULC作为肝癌早期标记物的方法，其中，该方法包含：步骤1，分离正常人及肝癌患者血清外泌体，并分别检测正常人血清和早期肝癌患者血清外泌体LncRNA的表达；步骤2，对正常人血清和早期肝癌患者血清外泌体LncRNA中差异表达的基因进行聚类分析，找到在肝癌患者血清外泌体LnCRNA中差异表达非常明显的基因，作为新的肝癌标志物的候选LncRNA；步骤3，对肝癌标志物的候选LncRNA在基因水平上进行鉴定，找到若干特异性和敏感性强的诊断基因，包括HULC；步骤4，对正常人群和肝癌患者血清进行检测，观察外泌体LnCRNA作为肝癌早期标记
物的敏感性和特异性；步骤5，确定血清外泌体LncRNA HULC为肝癌早期标记物。
[0007]上述的筛选出血清外泌体LncRNA HULC作为肝癌早期标记物的方法，其中，所述的步骤1中，利用超高速离心分离正常人及肝癌患者血清外泌体。
[0008]上述的筛选出血清外泌体LncRNA HULC作为肝癌早期标记物的方法，其中，所述的步骤3中，利用荧光实时定量qRT
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PCR和原位杂交，对肝癌标志物的候选LncRNA在基因水平上进行鉴定。
[0009]上述的筛选出血清外泌体LncRNA HULC作为肝癌早期标记物的方法，其中，所述的步骤4中，利用荧光实时定量qRT
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PCR，对正常人群和肝癌患者血清进行检测。
[0010]本专利技术还提供了一种上述的血清外泌体LncRNA HULC作为肝癌早期标记物的用途，其中，所述的标记物用于制备试剂盒。
[0011]本专利技术也提供了一种利用上述的血清外泌体LncRNA HULC作为肝癌早期标记物制备的试剂盒，其中，所述的试剂盒是包含HULC引物对的PCR试剂盒。
[0012]上述的利用血清外泌体LncRNA HULC作为肝癌早期标记物制备的试剂盒，其中，所述的HULC引物对包括上游引物和下游引物；上游引物序列为：5
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GGGGTGGAACTCATGATGGAATTGG
‑3’
；下游引物序列为：5
’‑
GCCAGGAAACTTCTTGCTTGATGC
‑3’
。
[0013]上述的利用血清外泌体LncRNA HULC作为肝癌早期标记物制备的试剂盒，其中，所述的试剂盒，在进行荧光实时定量PCR反应扩增时，PCR反应体系为：50℃，2min；95℃，15s，60℃，1min；35个循环；95℃，10min。
[0014]本专利技术提供的筛选血清外泌体LncRNA HULC作为肝癌早期标记物的方法及其制备试剂盒的用途具有以下优点：
[0015]本专利技术研究了血清外泌体LncRNA HULC作为肝癌早期诊断标记物的价值，并研发了肝癌早期诊断试剂盒。通过定量RT
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PCR从基因水平的联合检测血清外泌体LncRNA HULC在早期肝癌患者血清中的变化，探讨血清外泌体LncRNA HULC波动规律与早期肝癌分期、分级的相关性，实现肝癌的早期标记物的优选和确定，利用其制备试剂盒，能够实现肝癌的早期有效诊断，并为临床实践提供依据。
[0016]使用本专利技术提供的试剂盒，在检测时只需抽取1毫升血，即可在数小时内得出结果，利于连续动态检测和人群的大规模筛查；要求简单、成本低，易于推广应用。特别是该试剂盒可用于诊断早期肝癌，利于早诊早治，提高肝癌患者的生存率。
附图说明
[0017]图1为本专利技术提供的利用该血清外泌体LncRNA HULC作为肝癌早期标记物制备的试剂盒的使用示意图。
[0018]图2为本专利技术实施例3中的差异表达非常明显的基因以及特异性和敏感性强的诊断基因筛选图。
[0019]图3为本专利技术实施例3中的血清外泌体HULC的相对CT值分布情况统计图。
具体实施方式
[0020]以下结合附图对本专利技术的具体实施方式作进一步地说明。
[0021]本专利技术提供的一种筛选出血清外泌体LncRNA HULC作为肝癌早期标记物的方法，
其包含：
[0022]步骤1，分离正常人及肝癌患者血清外泌体，并分别检测正常人血清和早期肝癌患者血清外泌体LncRNA(Long non
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coding RNA，长链非编码RNA)的表达。
[0023]长链非编码RNA是长度大于200个核苷酸的非编码RNA，其在剂量补偿效应(Dosage compensationeffect)、表观遗传调控、细胞周期调控和细胞分化调控等众多生命活动中发挥重要作用，成为遗传学研究热点。
[0024]步骤2，对正常人血清和早期肝癌患者血清外泌体LncRNA中差异表达的基因进行聚类分析，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种筛选出血清外泌体LncRNA HULC作为肝癌早期标记物的方法，其特征在于，该方法包含：步骤1，分离正常人及肝癌患者血清外泌体，并分别检测正常人血清和早期肝癌患者血清外泌体LncRNA的表达；步骤2，对正常人血清和早期肝癌患者血清外泌体LncRNA中差异表达的基因进行聚类分析，找到在肝癌患者血清外泌体LnCRNA中差异表达明显的基因，作为新的肝癌标志物的候选LncRNA；步骤3，对肝癌标志物的候选LncRNA在基因水平上进行鉴定，找到若干特异性和敏感性强的诊断基因，包括HULC；步骤4，对正常人群和肝癌患者血清进行检测，观察外泌体LnCRNA作为肝癌早期标记物的敏感性和特异性；步骤5，确定血清外泌体LncRNA HULC为肝癌早期标记物。2.如权利要求1所述的筛选出血清外泌体LncRNA HULC作为肝癌早期标记物的方法，其特征在于，所述的步骤1中，利用超高速离心分离正常人及肝癌患者血清外泌体。3.如权利要求1所述的筛选出血清外泌体LncRNA HULC作为肝癌早期标记物的方法，其特征在于，所述的步骤3中，利用荧光实时定量qRT
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PCR和原位杂交，对肝癌标志物的候选LncRNA在基因水平上进行鉴定。4.如权利要求1所述的筛选出血清外泌体LncRNA HULC...

【专利技术属性】
技术研发人员：李世朋，王朏朏，乔兵兵，张海明，
申请(专利权)人：李世朋，
类型：发明
国别省市：