一种茯苓中三萜酸类成分的HPLC检测方法技术

本发明专利技术公开了一种茯苓中三萜酸类成分的HPLC检测方法。本发明专利技术通过特定的样品处理方法和色谱条件，建立了具有8个共有峰的茯苓指纹图谱，实现了这些共有特征峰的很好分离，洗脱程序简单，得到的指纹图谱基线平稳，噪音干扰较小，特征峰峰形好、分离度高，能定量测定其中6种三萜酸类成分，为茯苓的质量检测和控制提供了依据，具备实际推广应用价值。具备实际推广应用价值。具备实际推广应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种茯苓中三萜酸类成分的HPLC检测方法


[0001]本专利技术涉及一种茯苓中三萜酸类成分的HPLC检测方法。

技术介绍

[0002]茯苓始载于《五十二病方》，写作“服零”，在《神农本草经》中归于上品，系多孔菌科真菌茯苓Poria cocos(Schw.)Wolf的干燥菌核，具有利水渗湿，健脾和胃、宁心安神等功效。茯苓被收录于历版《中国药典》，为药食同源的代表药物，是诸多经方和配伍加减的重要中药材。茯苓功效广泛，不仅是中医内科常用药，还具有保健功能，具有广泛的应用前景。其有效成分主要包括茯苓多糖和茯苓三萜类成分，其中，茯苓三萜类成分种类繁多，是茯苓发挥利水渗湿功效的关键成分。
[0003]丁岗，王振中，章晨峰，等.茯苓中三萜酸类成分HPLC指纹图谱的初步研究[J].中国中药杂志，2002，27(10)：756
‑
758.公开了一种茯苓中三萜酸类成分的HPLC检测，其能检测出茯苓药材中9种三萜酸类成分，但由于其分离效果差，并不能用于三萜酸类化合物的定量测定，无法有效控制茯苓的质量。

技术实现思路

[0004]为解决上述问题，本专利技术提供了一种茯苓中三萜酸类成分的HPLC检测方法，它包括如下步骤：
[0005]1)对照品溶液制备：取三萜酸类对照品，加甲醇溶解，即得对照品溶液；
[0006]2)供试品溶液制备：取待检样品，加甲醇溶液提取，过滤，滤液加乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯相干燥，加甲醇溶解，即得供试品溶液；
[0007]3)分别吸取对照品溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪；色谱条件如下：
[0008]色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸水为流动相B；梯度洗脱程序0～10min，52％A
→
57％A；10～23min，57％A
→
57％A；23～50min，57％A
→
95％A；50～55min，95％A
→
95％A。
[0009]进一步地，步骤1)所述对照品与甲醇的质量体积比为0.1～0.5mg：1ml。
[0010]更进一步地，所述对照品为去氢土莫酸、土莫酸、茯苓新酸A、猪苓酸C、去氢茯苓酸、茯苓酸、去氢齿孔酸和/或齿孔酸。
[0011]进一步地，步骤2)所述待检样品、甲醇溶液、乙酸乙酯和甲醇的质量体积比为1g：50～100ml：10～30ml：1～5ml。
[0012]更进一步地，所述甲醇溶液的浓度为50％～95％，v/v，优选83％，v/v。
[0013]进一步地，步骤2)所述提取为超声提取，超声提取功率50～150W，时间30～60min；所述滤液减压浓缩至待测样品的8～12倍量ml/g；所述干燥为蒸干。
[0014]进一步地，所述待测样品为茯苓药材。
[0015]进一步地，步骤3)所述色谱条件中色谱柱：Agilent 5HC
‑
C18，4.6
×
200mm，5μm，柱温30℃，进样量1～50μL，流速为1ml/min，检测波长：210nm。
[0016]本专利技术提供了一种茯苓中三萜酸类成分的含量测定方法，它包括如下步骤：
[0017]1)取茯苓药材和三萜酸类成分，按前述方法检测；
[0018]2)按外标法以峰面积计算茯苓药材中三萜酸类成分的含量。
[0019]进一步地，所述三萜酸类成分为去氢土莫酸、土莫酸、茯苓新酸A、猪苓酸C、去氢茯苓酸和/或茯苓酸。
[0020]本专利技术一种茯苓中三萜酸类成分的HPLC检测方法，通过特定的样品处理方法和色谱条件，建立了具有8个共有峰的茯苓指纹图谱，实现了这些共有特征峰的很好分离，洗脱程序简单，得到的指纹图谱基线平稳，噪音干扰较小，特征峰峰形好、分离度高，能定量测定其中6种三萜酸类成分，为茯苓的质量检测和控制提供了依据，具备实际推广应用价值。
[0021]显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
[0022]以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。
附图说明
[0023]图1对照品的结构式，其中，a～h依次是猪苓酸C、茯苓新酸A、去氢土莫酸、土莫酸、去氢茯苓酸、茯苓酸、去氢齿孔酸和齿孔酸。
[0024]图2未经乙酸乙酯纯化的样品色谱图
[0025]图3供试品的HPLC图谱，其中峰1～8依次是去氢土莫酸、土莫酸、茯苓A酸、猪苓酸C、去氢茯苓酸、茯苓酸、去氢齿孔酸和齿孔酸。
[0026]图4供试品的指纹图谱叠加图，其中S1～S10分别为1号样品至10号样品。
具体实施方式
[0027]本专利技术具体实施方式中使用的试剂、试药、设备均为已知产品，通过购买市售产品获得。
[0028]实施例1本专利技术茯苓的指纹图谱检测
[0029]1)对照品溶液的制备
[0030]分别精密称取去氢土莫酸、土莫酸、茯苓新酸A、猪苓酸C、去氢茯苓酸、茯苓酸、去氢齿孔酸和齿孔酸，加甲醇溶解，配置成浓度分别为0.19、0.19、0.17、0.15、0.1、0.15、0.17、0.19mg/ml的混合溶液。
[0031]2)供试品溶液的制备
[0032]取茯苓粉末1g，加入90ml的83％甲醇为溶剂，于38℃条件下超声提取40min后抽滤，提取功率为100W。取滤液减压浓缩至10ml，用20ml乙酸乙酯萃取3次后合并有机相，减压蒸干，用3ml甲醇溶解，得供试品溶液；
[0033]3)分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。色谱条件如下：
[0034]色谱柱：Agilent 5HC
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C18(4.6
×
200mm，5μm)；检测波长210nm；流速为1ml/min，柱温为30℃；进样量为20μL，流动相A为乙腈，流动相B为0.1％磷酸水溶液，按照如下程序进行
梯度洗脱：
[0035][0036]4)分析色谱图
[0037]茯苓的指纹图谱中有8个共有特征峰，分别为去氢土莫酸、土莫酸、茯苓新酸A、猪苓酸C、去氢茯苓酸、茯苓酸、去氢齿孔酸和齿孔酸相应的色谱峰。
[0038]实施例2本专利技术茯苓中三萜酸类成分的含量测定
[0039]1)对照品溶液的制备
[0040]分别精密称取去氢土莫酸、土莫酸、茯苓新酸A、猪苓酸C、去氢茯苓酸和茯苓酸，加甲醇溶解，配置成浓度分别为0.19、0.19、0.17、0.15、0.1、0.15、0.17、0.19mg/ml的混合溶液。
[0041]2)供试品溶液的制备
[0042]取供试品茯苓粉末1g，加入90ml的83％甲醇为溶剂本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种茯苓中三萜酸类成分的HPLC检测方法，其特征在于：它包括如下步骤：1)对照品溶液制备：取三萜酸类对照品，加甲醇溶解，即得对照品溶液；2)供试品溶液制备：取待检样品，加甲醇溶液提取，过滤，滤液加乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯相干燥，加甲醇溶解，即得供试品溶液；3)分别吸取对照品溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪；色谱条件如下：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸水为流动相B；梯度洗脱程序0～10min，52％A
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57％A；10～23min，57％A
→
57％A；23～50min，57％A
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95％A；50～55min，95％A
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95％A。2.根据权利要求1所述的HPLC检测方法，其特征在于：步骤1)所述对照品与甲醇的质量体积比为0.1～0.5mg：1ml。3.根据权利要求2所述的HPLC检测方法，其特征在于：所述对照品为去氢土莫酸、土莫酸、茯苓新酸A、猪苓酸C、去氢茯苓酸、茯苓酸、去氢齿孔酸和/或齿孔酸。4.根据权利要求1所述的HPLC检测方法，其特征在于：步骤2)所述待检样品、甲醇溶液、乙酸乙酯和甲醇的质...

【专利技术属性】
技术研发人员：李羿，巫晓霞，黄群，李晨，
申请(专利权)人：成都医学院，
类型：发明
国别省市：