一种基于磁珠法的病毒核酸提取试剂盒及自动化运行程序制造技术

本发明专利技术第一方面提供了一种基于磁珠法的病毒核酸提取试剂盒，该试剂盒包括：裂解结合液、磁珠悬浮液、蛋白酶K、洗液1、洗液2、洗脱液。本发明专利技术第二方面提供了一种基于磁珠法的病毒核酸提取试剂盒的自动化运行程序，通过磁珠吸附、病毒核酸裂解、磁吸、震荡清洗、洗脱等步骤获得所需的病毒核酸提取。本发明专利技术的第三方面提供了一种基于磁珠法的病毒核酸提取试剂盒及自动化运行程序在检测PCR、酶切、分子杂交、文库构建等核酸制备中的用途。该试剂盒可以同时提取DNA/RNA并实现裂解与结合同步进行，从而大幅度缩短裂解时间，进而进一步缩短病毒核酸提取时间。提取时间。提取时间。

【技术实现步骤摘要】
一种基于磁珠法的病毒核酸提取试剂盒及自动化运行程序


[0001]本专利技术属于分子生学领域，具体是指一种基于磁珠法的病毒核酸提取试剂盒及自动化运行程序。

技术介绍

[0002]核酸提取技术是病毒分子生物学研究的基础，现已广泛应用于病原微生物检测、临床疾病诊断、环境微生物检测、食品安全检测以及法医学鉴定等众多领域。在提取过程中要遵循以下原则：提取尽可能充分，保证一级结构的完整性，避免蛋白质、脂类物质和多糖等生物大分子的污染，并且尽可能缩短和简化提取流程。一种提取效率高、时间短、操作简单的核酸提取试剂已成为快速分子诊断技术的关键。
[0003]目前，磁珠法技术越来越主导核酸提取市场，运用纳米技术对超顺磁性纳米颗粒的表面进行改良和表面修饰后，制备成超顺磁性氧化硅纳米磁珠。磁珠能在微观界面上与核酸分子特异性地识别和高效结合。通过Chaotropic盐(盐酸胍、异硫氰酸胍等)和外加磁场的作用下，能从血液、动物组织、食品、病原微生物等样品中的DNA和RNA分离出来。
[0004]常规的病毒核酸试剂盒整套提取反应时间普遍较长，检测耗时长是限制分子诊断临床筛查能力的重要因素。核酸提取作为分子诊断的前置步骤，缩短其耗时对于提高分子诊断筛查能力是至关重要的。目前自动化磁珠法核酸提取普遍用时在20分钟以上，其中主要包括裂解(结合)、清洗(晾干)、洗脱三步。常规的裂解结合孵育时间长，一般需要孵育8min
‑
15min，常规的提取全程序在吸磁、清洗、晾干耗时约8min
‑
10min，导致整体提取时间的延长；常规的的洗脱前需要将洗脱液加入后50
‑
70℃孵育，孵育时间5分钟左右，耗时较长。
[0005]因此本领域技术人员一直在改进各种基于磁珠法的病毒核酸提取试剂盒及其对应的自动化运行程序来提高病毒的检测效率，缩短检测时间。

技术实现思路

[0006]本专利技术提供了一种快速自动化磁珠法核酸提取试剂盒及运行程序，该提取方法可解决现有磁珠法核酸提取过程时间较长的问题，缩短了自动化提取时间，提供了一种自动化快速磁珠法核酸提取的方法：
[0007]本专利技术第一个目的提供了一种基于磁珠法的病毒核酸提取试剂盒，该试剂盒包括：裂解结合液、磁珠悬浮液、蛋白酶K、洗液1、洗液2、洗脱液。
[0008]解液结合液，主要由浓度为30mM
‑
60mM的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(简写为：Tris
‑
HCL)、Tris
‑
HCL的PH为8.0
‑
8.5，体积分数为0.02％
‑
0.1％的Antifoam 204和30％
‑
70％的异丙醇组成；此外，裂解结合液还含有以下至少一种成分：质量分数为0.05％～5％的N
‑
月桂酰肌氨酸钠(NLS)、浓度为2
‑
6M的盐酸胍、浓度为2
‑
6M的异硫氰酸胍、质量百分比为0.1
‑
5％的十二烷基磺酸钠(简写为SDS)、质量百分比为5％
‑
15％的聚乙二醇(简写为：PEG)、体积分数为1％
‑
5％Triton X
‑
100。
[0009]进一步地，裂解结合液中Tris
‑
HCL浓度为35
‑
50mM、所述Tris
‑
HCL的PH为8.0
‑
8.3。
[0010]进一步地，裂解结合液中含有体积分数为0.02％
‑
0.1％的Antifoam 204。
[0011]进一步地，裂解结合液中含有体积分数为30％
‑
50％异丙醇。
[0012]进一步地，裂解结合液中含有浓度为2
‑
4M的盐酸胍。
[0013]进一步地，裂解结合液中含有浓度为2
‑
4M的异硫氰酸胍。
[0014]进一步地，裂解结合液中含有质量分数为0.05％～3％的NLS。
[0015]进一步地，裂解结合液中含有质量百分比为0.1
‑
2％的SDS。
[0016]进一步地，裂解结合液中含有质量百分比为5％
‑
10％的PEG。
[0017]进一步地，裂解结合液中含有体积分数为1％
‑
3％Triton X
‑
100。
[0018]进一步地，病毒核酸提取试剂盒的磁珠悬浮液的浓度为2
‑
20mg/mL。
[0019]进一步地，病毒核酸提取试剂盒的磁珠悬浮液的磁珠为羟基磁珠或羧基磁珠中的一种。
[0020]进一步地，磁珠的粒径介于100～500nm之间。
[0021]进一步地，磁珠为羧基磁珠。
[0022]进一步地，磁珠粒径介于300～500nm。
[0023]进一步地，磁珠与裂解结合液可按照任意比例混合。
[0024]优选地，磁珠悬浮液与裂解结合液的体积混合比例为1:9～1:6。
[0025]进一步地，病毒核酸提取试剂盒的中蛋白酶K溶液的浓度为15
‑
100mg/mL。
[0026]优选地，蛋白酶K溶液的浓度为15
‑
50mg/mL。
[0027]进一步地，病毒核酸提取试剂盒的洗液1含有体积分数为40％
‑
60％的乙醇溶液。
[0028]进一步地，洗液1还含有浓度为0.5
‑
4M的盐酸胍和/或体积分数为0.5％
‑
1％的Triton X
‑
100。
[0029]进一步地，洗液1中乙醇含量为50％
‑
60％(体积分数)。
[0030]进一步地，洗液1中Triton X
‑
100的含量为0.5％
‑
0.65％(体积分数)。
[0031]进一步地，洗液1中盐酸胍的浓度为0.5
‑
2M。
[0032]进一步地，病毒核酸提取试剂盒的洗液2为体积分数为50％
‑
80％的乙醇溶液。
[0033]进一步地，洗液2为体积分数为70％
‑
80％的乙醇溶液。
[0034]进一步地，病毒核酸提取试剂盒的洗脱液为纯水。
[0035]本专利技术的第二个目的一种基于磁珠法的病毒核酸提取试剂盒的自动化运行程序，具体包括一下步骤：
[0036]步骤A1、磁棒将已经加入96孔深孔板2/8号孔已预装好50μL
‑
200μL的磁珠进行吸附，磁吸时间为6
‑
40s。
[0037]步骤A2、磁吸后将磁珠置于已预装好含有150μL
‑
300μL样品、20
‑
50μL蛋白酶K、300
‑
500μ本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于磁珠法的病毒核酸提取试剂盒，其特征在于，所述提取试剂盒包括如下试剂：裂解结合液、磁珠悬浮液、蛋白酶K、洗液1、洗液2、洗脱液。2.如权利要求1所述的病毒核酸提取试剂盒，其特征在于，所述裂解结合液中包含：羟甲基氨基甲烷盐酸盐、Antifoam 204和异丙醇。3.如权利要求2所述的病毒核酸提取试剂盒，其特征在于，所述羟甲基氨基甲烷盐酸盐的浓度为30mM～60mM。4.如权利要求2所述的病毒核酸提取试剂盒，其特征在于，所述Antifoam 204的体积分数为0.02％～0.1％。5.如权利要求2所述的病毒核酸提取试剂盒，其特征在于，所述异丙醇的体积分数为30％～70％。6.如权利要求2所述的病毒核酸提取试剂盒，其特征在于，所述裂解结合液中还含有以下至少一种成分：N
‑
月桂酰肌氨酸钠、盐酸胍、异硫氰酸胍、十二烷基磺酸钠、聚乙二醇、Triton X
‑
100。7.如权利要求6所述的病毒核酸提取试剂盒，其特征在于，所述N
‑
月桂酰肌氨酸钠的质量分数为0.05％～5％。8.如权利要求6所述的病毒核酸提取试剂盒，其特征在于，所述盐酸胍的浓度为2～6M。9.如权利要求6所述的病毒核酸提取试剂盒，其特征在于，所述异硫氰酸胍的浓度为2～6M。10.如权利要求6所述的病毒核酸提取试剂盒，其特征在于，所述十二烷基磺酸钠的质量百分比为0.1％～5％。11.如权利要求6所述的病毒核酸提取试剂盒，其特征在于，所述聚乙二醇的质量百分比为5％～15％。12.如权利要求6所述的病毒核酸提取试剂盒，其特征在于，所述Triton X
‑
100体的积分数为1％～5％。13.如权利要求1所述的病毒核酸提取试剂盒，其特征在于，所述磁珠悬浮液的浓度为5～20mg/mL。14.如权利要求13所述的病毒核酸提取试剂盒，其特征在于，所述磁珠悬浮液中的磁珠为羟基磁珠或羧基磁珠中的一种。15.如权利要求14所述的病毒核酸提取试剂盒，其特征在于，所述磁珠的粒径为100～500nm。16.如权利要求1所述的病毒核酸提取试剂盒，其特征在于，所述磁珠悬浮液与所述裂解结合液的体积混合比例为1:12～1:6。17.如权利要求1所述的病毒核酸提取试剂盒，其特征在于，所述蛋白酶K溶液的浓度为15～100mg/mL。18.如权利要求1所述的病毒核酸提取试剂盒，其特征在于，所述洗液1含有体积分数为40％～60％的乙醇溶液。19.如权利要求18所述的病毒核酸提取试剂盒，其特征在于，所述洗液1中还含有浓度为0.5
‑
4M的盐酸胍和/或体积分数为0.5％～1％的Triton X
‑
100。20.如权利要求1所述的病毒核酸提取试剂盒，其特征在于，所述洗液2为体积分数为
50％～80％的乙醇溶液。21.如权利要求1所述的病毒核酸提取试剂盒，其特征在于，所述洗脱液为纯水。22.一种病毒核酸提取试剂盒，其特征在于，所述提取试剂盒包括如下试剂：裂解结合液、磁珠悬浮液、蛋白酶K、洗液1、洗液2、洗脱液，其中所述解液结合液包含：三羟甲基氨基甲烷盐酸盐，Antifoam 204，异丙醇，N
‑
月桂酰肌氨酸钠，异硫氰酸胍和Triton X
‑
100，其中三羟甲基氨基甲烷盐酸盐的pH为8.0～8.5，浓度40mM；所述Antifoam 204的体积分数为0.05％，所述异丙醇的体积分数为30％，所述N
‑
月桂酰肌氨酸钠的质量分数为2％，所述异硫氰酸胍的浓度为2
‑
6M，所述Triton X
‑
100的体积分数为4％，所述磁珠悬浮液中含有100～500nm的羟基磁珠或羧基磁珠，所述磁珠悬浮液的浓度为5
‑
20mg/mL，所述磁珠悬浮液和所述裂解结合液的体积混合比例为1:11，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：李娜，李梁，梁佳茗，
申请(专利权)人：上海绅道生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：