一种毒素四项微阵列芯片酶标板及其制备方法与应用技术

本发明专利技术提供了一种毒素四项微阵列芯片酶标板及其制备方法与应用，属于毒素检测技术领域。本发明专利技术提供的毒素四项微阵列芯片酶标板的每个样品孔中都含有生物分子识别位点，所述生物分子识别位点分别包被有质控蛋白、黄曲霉毒素抗原、玉米赤酶稀酮抗原、呕吐毒素抗原和伏马毒素抗原，所用包被液由0.01M PB pH7.5和1％浓度甘油组成。本发明专利技术提供的毒素四项微阵列芯片酶标板能对单个样本中四种毒素同时进行定量检测，与传统的ELISA相比能最大限度地减少工作强度，具有高通量、多指标、微量化、智能化、可视化和低成本的优势。可视化和低成本的优势。可视化和低成本的优势。

【技术实现步骤摘要】
一种毒素四项微阵列芯片酶标板及其制备方法与应用


[0001]本专利技术属于毒素检测
，尤其涉及一种毒素四项微阵列芯片酶标板及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]黄曲霉毒素(AFB1)是一类真菌毒素，具有极强的致癌性，广泛存在于食品中。玉米赤霉烯酮(ZEN)主要污染玉米、小麦、大米、大麦、小米和燕麦等谷物，具有雌激素样作用，能造成动物急慢性中毒，引起动物繁殖机能异常甚至死亡，可给畜牧场造成巨大经济损失。呕吐毒素(DON)是镰刀菌属的次级代谢产物，会抑制蛋白质的合成造成呕吐、腹泻、厌食、恶心、神经紊乱等毒性反应，这种毒素的性质是比较稳定的，烘培高温高压等食品加工方法对它的影响比较小。伏马毒素(FB)是一种真菌毒素，伏马毒素污染具有普遍性，对人畜危害较大，主要污染玉米及其制品。所以如何对上述四种毒素进行及时、快速、高效地检测和有效的分离，控制含量在允许的范围内至关重要。
[0003]由于对同一个样本中的多种毒素进行同时检测时，如何确保不同毒素之间不会相互影响，如何确保在同一个条件下能够成功进行多种毒素的同时检测，一直是本领域的难点所在。比如将多种毒素的抗体放于同一抗体稀释液中，会导致个别项目回收过高或过低、个别项目有本底或超阴等问题出现。所以目前现有技术中披露的检测上述四种毒素的方法均为单一毒素的检测方法，在满足对大量样本进行检测的同时，无法满足对同一个样本中的多种毒素同时进行检测，存在靶标物单一、样品前处理复杂、操作繁琐、所需样品用量大、耗时长等缺点，进而影响检测的效率。并且现有的毒素检测试剂盒的结果需要尽快读取，无法长期保存。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种毒素四项微阵列芯片酶标板，能对单个样本中多种毒素同时进行定量检测，与传统的ELISA相比具有高通量、多指标、微量化、智能化、可视化、低成本等优点，能最大限度地减少工作强度。
[0005]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了以下技术方案：
[0006]本专利技术提供了一种毒素四项微阵列芯片酶标板，所述酶标板的每个样品孔中都含有生物分子识别位点，所述生物分子识别位点分别包被有质控蛋白、黄曲霉毒素抗原、玉米赤酶稀酮抗原、呕吐毒素抗原和伏马毒素抗原，所用包被液由0.01M PB pH7.5和1％浓度甘油组成。
[0007]优选的，所述酶标板的每个样品孔中质控蛋白、黄曲霉毒素抗原、玉米赤酶稀酮抗原、呕吐毒素抗原和伏马毒素抗原的包被效价分别为1：2000
‑
4000、1:1000
‑
3000、1：3000
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7000、1：5000
‑
9000和1：60000
‑
10000。
[0008]本专利技术还提供了一种上述酶标板的制备方法，包括如下步骤：将包被液分别与质控蛋白、黄曲霉毒素抗原、玉米赤酶稀酮抗原、呕吐毒素抗原和伏马毒素抗原混合，获得五
种加样液，使用生物芯片点样仪进行点板，37℃包被2h，洗板，封闭。
[0009]优选的，所述生物芯片点样仪进行点板的条件为：每个识别位点的点板体积均为4nL，点间距为600μm，点样针移动速度为4000μm/s。
[0010]本专利技术还提供了一种毒素四项检测方法，包括如下步骤：在上述酶标板中加入毒素四项标准品或待测样品后，加入毒素四项酶标物和毒素四项抗试剂反应，洗板，加入显色液反应，洗板，获取结果。
[0011]优选的，所述毒素四项标准品或待测样品、毒素四项酶标物、毒素四项抗试剂的体积比为1：1：1。
[0012]本专利技术还提供了一种上述酶标板或上述制备方法在制备毒素四项检测产品中的应用。
[0013]本专利技术还提供了一种毒素四项可视化微阵列芯片试剂盒，包括上述酶标板，毒素四项标准品、抗体稀释液、酶标稀释液和样本稀释液。
[0014]优选的，所述抗体稀释液由0.1M PB pH7.5、1％蔗糖、0.025％硫柳汞钠和1％牛血清组成。
[0015]优选的，所述毒素四项标准品的制备方法包括如下步骤：将标准品稀释液与四项毒素混合，设定五种浓度梯度液，其中第一种浓度梯度液中四项毒素的浓度均为0ppb，第二种浓度梯度液中黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素、伏马毒素的浓度分别为1.5、20、200、200ppb，第三种浓度梯度液中黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素、伏马毒素的浓度分别为5、70、700、600ppb，第四种浓度梯度液中黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素、伏马毒素的浓度分别为15、250、2100、1800ppb，第五种浓度梯度液中黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素、伏马毒素的浓度分别为50、750、7000、5400ppb。
[0016]本专利技术的有益效果：
[0017]本专利技术首次应用ELISA微阵列芯片技术研发同时检测四种毒素的产品，本专利技术提供的毒素四项微阵列芯片酶标板能对单个样本中四种毒素同时进行定量检测，与传统的ELISA相比能最大限度地减少工作强度，具有以下优势：
[0018]高通量：一个多孔板生物芯片酶标板最多可同时检测90个样本；
[0019]多指标：样本分析可同时检测黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素和伏马毒素四种毒素；
[0020]微量化：只需50μL样品就可满足检测需求；
[0021]智能化：可在90秒获得实验数据，并提供分析报告；
[0022]可视化：可肉眼分辨检测项目的阴阳性，并且结果可长期留存；
[0023]低成本：每个生物分子识别位点只需使用几nL。
附图说明
[0024]图1为本专利技术毒素四项微阵列芯片酶标板示意图；
[0025]图2为生物分子识别位点点样结果，其中a
‑
f分别表示生物分子识别位点大小不一、点拖尾、少点、点中空、散点、点不均匀；
[0026]图3为不同包被液识别位点的形状，其中a
‑
c分别代表实施例1、对比例1和对比例2包被液识别位点的形状。
具体实施方式
[0027]本专利技术提供了一种毒素四项微阵列芯片酶标板，所述酶标板的每个样品孔中都含有生物分子识别位点，所述生物分子识别位点分别包被有质控蛋白、黄曲霉毒素抗原、玉米赤酶稀酮抗原、呕吐毒素抗原和伏马毒素抗原，所用包被液由0.01M PB pH7.5和1％浓度甘油组成。
[0028]在本专利技术中，每个样品孔中都以微阵列的方式包被有质控蛋白、黄曲霉毒素抗原、玉米赤酶稀酮抗原、呕吐毒素抗原和伏马毒素抗原五种生物分子识别位点，本专利技术对于上述五种生物分子识别位点在样品孔中的具体位置没有特殊限定，在具体实施例中，在毒素四项酶标板每板上设96个样品孔，样品孔横十二竖八整齐排列形成阵列，每个样品孔中固定有质控点、黄曲霉毒素抗原、玉米赤酶稀酮抗原、呕吐毒素抗原、伏马毒素抗原五种生物分子识别位点，每个项目有3个识别位点，如图1所示。本专利技术通过多个样品孔、以及样品孔中的多种生物分子识别点的组合，实现了生物样品的通量化、多指标本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种毒素四项微阵列芯片酶标板，其特征在于，所述酶标板的每个样品孔中都含有生物分子识别位点，所述生物分子识别位点分别包被有质控蛋白、黄曲霉毒素抗原、玉米赤酶稀酮抗原、呕吐毒素抗原和伏马毒素抗原，所用包被液由0.01M PB pH7.5和1％浓度甘油组成。2.根据权利要求1所述的酶标板，其特征在于，所述酶标板的每个样品孔中质控蛋白、黄曲霉毒素抗原、玉米赤酶稀酮抗原、呕吐毒素抗原和伏马毒素抗原的包被效价分别为1：2000
‑
4000、1:1000
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3000、1：3000
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7000、1：5000
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9000和1：60000
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100000。3.权利要求1或2所述酶标板的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将包被液分别与质控蛋白、黄曲霉毒素抗原、玉米赤酶稀酮抗原、呕吐毒素抗原和伏马毒素抗原混合，获得五种加样液，使用生物芯片点样仪进行点板，37℃包被2h，洗板，封闭。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述生物芯片点样仪进行点板的条件为：每个识别位点的点板体积均为4nL，点间距为600μm，点样针移动速度为4000μm/s。5.一种毒素四项检测方法，其特征在于，包括如下步骤：在权利要求1所述酶标板中加入毒素四项标准品或待测样品后，加入毒素四项...

【专利技术属性】
技术研发人员：田秀梅，张会萍，闫兴华，高凯伦，张君超，武冬霞，王冰冰，
申请(专利权)人：山东美正生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：